【技术实现步骤摘要】
本公开整体涉及一种特异性结合人4-1bb并具有功能性的分离的单克隆抗体，特别是人单克隆抗体，或其抗原结合部分。还提供了一种编码该抗体或其抗原结合部分的核酸分子、一种表达载体、一种宿主细胞和一种表达该抗体或其抗原结合部分的方法。本公开还提供了一种双特异性分子。此外，本公开还提供了一种包含该抗体或其抗原结合部分的药物组合物，以及一种使用本公开的抗体或其抗原结合部分的治疗方法。
技术介绍
1、4-1bb，也称为cd137或tnfrsf9，是肿瘤坏死因子受体家族的成员。其最主要的特征是作为t细胞表面上调节tcr诱导的t细胞激活的共刺激分子。4-1bb在与4-1bbl(4-1bb的表达于激活的抗原呈递细胞上的主要天然配体)结合后，上调抗细胞凋亡分子，并促进细胞因子的产生和效应子功能。4-1bb也存在于树突状细胞、激活的单核细胞、nk细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞上，并且据报道，4-1bb信号传导刺激ifn-γ分泌并促进nk细胞增殖和dc激活(cariad chester等(2018)blood 131(1):49-57)。
2、另一方面，在肿瘤细胞上和癌症患者的血清中观察到4-1bb表达。4-1bb在炎症部位(主要在肿瘤微脉管和动脉粥样硬化区域内)沿血管壁的表达表明其可以介导白细胞迁移(drenkard d等(2007)faseb j.21(2):456-463)。此外，将4-1bb连接到调节性t细胞(treg)上可诱导treg增殖(zhang p等(2007)scand j immunol.66(4):435-44
3、为了探究4-1bb的复杂功能，melero等在1997年测试了激动性抗4-1bb抗体对低免疫原性ag104a肉瘤和高免疫原性p815肥大细胞瘤的作用，并揭示了4-1bb激动剂的抗肿瘤活性(melero i等(1997)nature med.3(6):682-685)。后来有报道称，约60％的12月龄4-1bbl-/-小鼠患上了b细胞淋巴瘤，并且4-1bbl-/-小鼠的nk细胞数量和活性均有所下降(middendorp s等(2009)blood114(11):2280-2289；vinay d.s.等(2004)j.immunol.173(6):4218-4229)。注射b16.f10黑色素瘤细胞后，4-1bb-/-小鼠的死亡率升高，但4-1bb+/+小鼠则未见该效应(ju s.a等(2005)immunol.cell biol.83(4):344-351)。根据这些发现，4-1bb已成为强力的免疫系统激活剂和候选免疫治疗靶点。研究表明，4-1bb激动剂可用于治疗肿瘤、病毒感染和自身免疫性疾病，以及提高移植物的存活率(seo s.k等(2004)naturemed.10(10):1088-1094；sun y等(2002)j.immunol.168(3):1457-1465；agarwal a等(2008)curr.opin.organ.transplant13(4):366-372)。
4、特别地，对4-1bb在癌症中的作用的研究远多于对其在其他病理状态中的作用的研究。研究发现，4-1bb信号传导破坏并逆转细胞毒性t淋巴细胞中建立的免疫失能。例如，在b16.siy黑色素瘤模型中，施用抗4-1bb单克隆抗体使丧失了il-2分泌能力的cd8+til的功能得到了恢复(cariad chester等(2018)，同上)。尽管抗4-1bb单克隆抗体的大部分抗肿瘤作用由cd8+t细胞实现，但nk细胞、nkt细胞、树突细胞和cd4+t细胞也被证明是肿瘤治疗的关键和必要条件(dass s.v等(2014)bmb rep.47(3):122-129)。此外，研究发现，在施用抗4-1bb抗体后，一些粘附分子(诸如icam-1和cxam-1)的上调促进了t细胞向肿瘤位点的迁移(palazon a等(2011)cancer res.71(3):801-811)。更重要的是，抗4-1bb疗法的有效性也已在其他实体瘤和淋巴瘤(诸如滤泡性淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、黑色素瘤、卵巢癌和鳞状肺癌)的临床前模型中得到了证实(cariad chester等(2018)，同上)。
5、urelumab是bms公司开发的全人igg4单克隆抗体，是首个进入临床试验的抗4-1bb治疗药物。它特异性结合并激活表达4-1bb的免疫细胞，并在1期和2期单一疗法试验中显示出可喜的有效性，但具有剂量依赖性肝毒性。耐受剂量下urelumab的单一疗法和组合疗法虽然显示出有潜力的免疫刺激药效学效应，但抗肿瘤作用有限。utomilumab是辉瑞公司的人源化igg2单克隆抗体，其显示出优异的安全性，但与urelumab相比是较弱的4-1bb激动剂。目前正在开展utomilumab联合利妥昔单抗、帕博利珠单抗(可瑞达)、阿维鲁单抗和一些其他抗肿瘤抗体治疗各种癌症的临床试验研究(cariad chester等(2018)，同上)。
6、此外，抗4-1bb抗体和其他抗体(诸如抗pd-1抗体)的组合疗法也正在进行临床试验。例如，需要可以同时靶向pd-l1和4-1bb从而阻断pd-1/pd-l1通路并在表达pd-l1的肿瘤细胞进行pd-l1交联时通过4-1bb提供共刺激信号的双特异性抗体。然而，专利us_2017_0198050_a1中所述的双特异性抗体无需与靶细胞交联即可激活或诱导4-1bb信号传导，引起了对4-1bb在高浓度下诱导的潜在毒性的担忧。
7、因此，本领域仍然需要开发在安全性和激动作用之间取得最佳平衡的新型抗4-1bb抗体。此外，此类抗4-1bb抗体也将有助于构建新型双特异性抗体，包括可以结合4-1bb和其他抗原(例如，pd-l1)的双特异性抗体。此类可以特异性结合4-1bb同时以较高的亲和力结合其他抗原(诸如pd-l1)的双特异性抗体也是4-1bb抗体领域开发工作的目的。
技术实现思路
1、本公开提供了一种特异性结合4-1bb(例如，人4-1bb)的分离的单克隆激动性抗体，例如人、小鼠、嵌合或人源化单克隆抗体，或其抗原结合部分。在一个实施方案中，本专利技术的抗体提供了在安全性和激动作用之间的最佳平衡。
2、本公开的抗体或其抗原结合部分可用于多种应用，包括检测4-1bb蛋白以及治疗4-1bb相关疾病，诸如肿瘤、感染和自身免疫性疾病。
3、因此，在一个方面，本公开涉及一种结合4-1bb的分离的单克隆抗体(例如，人抗体)或其抗原结合部分，该抗体或其抗原结合部分具有包含cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变区，其中该cdr1区、该cdr2区和该cdr3区包含分别与以下序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列：(1)seq id no:1、seq id no:2和seq idno:3；(2)seq本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种结合4-1BB的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含三个重链可变区CDR1区、CDR2区和CDR3区以及三个轻链可变区CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其中
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含所述重链可变区，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:77具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含所述轻链可变区，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:26(X1＝S或G)、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:78具有至少80
5.根据权利要求3-4中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区和所述轻链可变区包含分别与以下序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列：(1)SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26(X1＝S)；(2)SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26(X1＝G)；(3)SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；(4)SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；(5)SEQID NO:31和SEQ ID NO:32；或(6)SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78。
6.根据权利要求5所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含与所述重链可变区连接的具有SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链恒定区，和/或与所述轻链可变区连接的具有SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:63的氨基酸序列的轻链恒定区。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分激活4-1BB信号传导，并且所述抗体或其抗原结合部分是单克隆抗体。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分是小鼠抗体、人抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
9.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分是IgG1、IgG2或IgG4同种型。
10.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗原结合部分选自：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段，(v)dAb片段；(vi)纳米抗体；和(vii)单链Fv(scFv)。
...【技术特征摘要】
1.一种结合4-1bb的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含三个重链可变区cdr1区、cdr2区和cdr3区以及三个轻链可变区cdr1区、cdr2区和cdr3区，其中
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其中
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含所述重链可变区，其中所述重链可变区包含与seq id no:25、seq id no:27、seq id no:29、seq id no:31或seq id no:77具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含所述轻链可变区，其中所述轻链可变区包含与seq id no:26(x1＝s或g)、seq idno:28、seq id no:30、seq id no:32或seq id no:78具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求3-4中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区和所述轻链可变区包含分别与以下序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96...
【专利技术属性】
技术研发人员：康小强，黄潇，孙建明，
申请(专利权)人：南京维立志博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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