结合PD-1的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了特异性结合人PD‑1的分离的单克隆抗体。还提供了编码所述抗体的核酸分子、表达载体、宿主细胞和用于表达所述抗体的方法。本发明专利技术还提供了包含所述抗体的免疫缀合物、双特异性分子和药物组合物，以及使用本发明专利技术的抗PD‑1抗体的诊断和治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合PD-1的抗体及其用途
本专利技术一般涉及分离的单克隆抗体，特别是以高亲和力和功能性特异性结合人PD-1的单克隆抗体。还提供了编码所述抗体的核酸分子、表达载体、宿主细胞和表达所述抗体的方法。本专利技术还提供了包含所述抗体的免疫缀合物、双特异性分子和药物组合物，以及使用本专利技术的抗PD-1抗体的诊断和治疗方法。
技术介绍
治疗性抗体是制药工业增长最快的部分之一，尤其是靶向某些疾病相关细胞蛋白的单克隆抗体。一种这样的靶蛋白是程序性细胞死亡蛋白1，也称为PD-1(CD279)，由PDCD1基因编码(IshidaY等人，EMBOJ11：3887-95(1992)；FranciscoLM等人，ImmunologicalReviews.236：219-42(2010))，其是T细胞调节剂CD28家族的成员，但是作为单体存在，缺乏在其他CD28家族成员中特有的未配对的半胱氨酸残基。PD-1是属于免疫球蛋白超家族的55kDaI型跨膜蛋白，并且在活化的B细胞、T细胞和骨髓细胞上表达(KeirME，等人，AnnuRevImmunol26：677-704(2008)；Agata等人(1996)IntImmunol8：765-72；Okazaki等人(2002)Curr.Opin.Immunol.14：391779-82；Bennett等人(2003)JImmunol170：711-8)。PD-1结合两个配体PD-L1和PD-L2(DongH，等人，NatMed5：1365-9(1999)；LatchmanY，等人，NatImmunol2：261-8(2001))。在结合其配体后，发现PD-1抑制T细胞受体(TCR)的信号转导，并且下调免疫刺激细胞因子的分泌和存活蛋白的表达(KeirME，等人，AnnuRevImmunol26：677-704(2008)；DongH，等人，NatMed5：1365-9(1999))。临床前研究显示在消除单独的PD-1途径信号传导(HiranoF，等人，CancerRes65：1089-96(2005))或与其他免疫检查点抑制组合(WooSR，等人，CancerRes72(4)：917-27(2012))后肿瘤消退或延长的宿主存活。已经开发了许多靶向PD-1受体的癌症免疫治疗剂。一种这样的抗PD-1抗体是Nivolumab(由BristolMyersSquibb以商品名出售)，其在临床试验中在非小细胞肺癌、黑色素瘤和肾细胞癌中产生完全或部分应答，总计296名患者(TopalianSL等人(2012)TheNewEnglandJournalofMedicine.366(26)：2443-54)。其在2014年在日本被批准，并且在2014年被USFDA批准用于治疗转移性黑色素瘤。另一种靶向PD-1受体的抗PD-1抗体，Pembrolizumab(KEYTRUDATM，MK-3475，Merck)也在2014年被USFDA批准用于治疗转移性黑色素瘤。其正被用于肺癌、淋巴瘤和间皮瘤的US临床试验。尽管抗PD-1抗体已经开发和批准，但是仍需要具有增强的结合亲和力和其它期望的药物特征的另外的单克隆抗体。
技术实现思路
本专利技术提供了结合人或猴PD-1的分离的单克隆抗体，例如人单克隆抗体。在一个方面，本专利技术涉及一种分离的单克隆抗体(例如，人抗体)，或其抗原结合部分，其具有包含CDR1区、CDR2区和CDR3区的重链可变区，其中CDR1区、CDR2区和CDR3区包含与下述具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列(1)分别为SEQIDNO：1、2和3；或(2)分别为SEQIDNO：1、2和4；其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。这些氨基酸序列可分别由SEQIDNO：40至43的核酸序列编码。在一个方面，本专利技术的分离的单克隆抗体(例如，人抗体)或其抗原结合部分包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQIDNO：8至16中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。这些氨基酸序列可以分别由SEQIDNO：44至52的核酸序列编码。在一个实施方式中，本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合部分包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、CDR2区和CDR3区包含分别与SEQIDNO：5、6和7具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。这些氨基酸序列可以分别由SEQIDNO：53至55的核酸序列编码。在一个方面，本专利技术的分离的单克隆抗体(例如人抗体)或其抗原结合部分包含含有与SEQIDNO：17具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。这些氨基酸序列可以由SEQIDNO：56的核酸序列编码。在一个方面，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含各自含有CDR1区、CDR2区和CDR3区的重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区CDR1、CDR2和CDR3以及所述轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3包含(1)分别与SEQIDNO：1、2、3、5、6和7；或(2)分别与SEQIDNO：1、2、4、5、6和7具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区和轻链可变区包含与以下具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列：(1)分别为SEQIDNO：8和17；(2)分别为SEQIDNO：9和17；(3)分别为SEQIDNO：10和17；(4)分别为SEQIDNO：11和17；(5)分别为SEQIDNO：12和17；(6)分别为SEQIDNO：13和17；(7)分别为SEQIDNO：14和17；(8)分别为SEQIDNO：15和17；或(9)分别为SEQIDNO：16和17，其中抗体或其抗原结合片段结合PD-1。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，其中重链包含如上所述的重链可变区和SEQIDNO：18或19中所示的重链恒定区，并且轻链包含如上所述的轻链可变区和SEQIDNO：20中所示的轻链恒定区。SEQIDNO：18-20的氨基酸序列可以由SEQIDNO：57-59的核酸序列编码。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含通过二硫键相互连接的重链和轻链，其包含分别与以下具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列：(1)分别为SEQIDNO：21和39；(2)分别为SEQIDNO：22和39；(3)分别为SEQIDNO：23和39；(4)分别为S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、所述CDR2区和所述CDR3区包含如下的氨基酸序列：/n(1)分别为SEQ ID NO:1、2和3；或/n(2)分别为SEQ ID NO:1、2和4；/n其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180517 US 62/672,6021.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、所述CDR2区和所述CDR3区包含如下的氨基酸序列：
(1)分别为SEQIDNO:1、2和3；或
(2)分别为SEQIDNO:1、2和4；
其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。


2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其进一步包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、所述CDR2区和所述CDR3区分别包含SEQIDNO:5，6和7。


3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQIDNO:8至16中任一项具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。


4.权利要求1的抗体或其抗原结合部分，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQIDNO:17具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。


5.权利要求3的抗体或其抗原结合部分，其进一步包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQIDNO:17具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

【专利技术属性】
技术研发人员：康小强，赖寿鹏，黄潇，
申请(专利权)人：南京维立志博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32