新型抗CTLA-4抗体多肽制造技术

本公开提供抗CTLA‑4的抗体多肽、编码该多肽的多核苷酸、包含该多肽的药物组合物及其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型抗CTLA-4抗体多肽优先权声明本专利申请要求于2018年3月19日提交的PCT申请号PCT/CN2018/079495的优先权的权益。
本专利技术总体上涉及新型抗人CTLA-4抗体多肽。
技术介绍
癌症免疫治疗已成为癌症治疗的热门研究领域。细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)是免疫稽查点的有效靶标之一。在T细胞激活后，CTLA-4一般在抗原与TCR结合后1小时内快速表达于该类T细胞。CTLA-4可以通过与CD28竞争抑制T细胞信号传导。除了在激活的T细胞诱导表达外，CTLA-4组成性的表达于调节T细胞(Treg)表面，提示CTLA-4可能是接触介导的抑制所必需的，并与Treg产生免疫抑制细胞因子如转化生长因子beta和白介素-10有关。在许多临床前和临床研究中都证明了CTLA-4阻断可诱导肿瘤消退。有两种抗CTLA-4抗体在临床研制中。依匹单抗(MDX-010,BMS-734016)，全人抗CTLA-4单克隆抗体IgG1-kappa同型，是一种免疫调节剂，已被批准作为治疗晚期黑色素瘤的单一疗法。单域抗体(sdAb)是一种包含一个单体可变抗体结构域的抗体。与全抗体一样，可以选择性结合特定抗原。单域抗体比由两条蛋白重链和两条轻链组成的普通抗体小很多。第一个单域抗体是从驼类中发现的重链抗体中设计出来的(Hamers-CastermanC,AtarhouchT,MuyldermansS,RobinsonG,HamersC,SongaEB,BendahmanN,HamersR(1993)不含轻链的天然抗体.Nature363(6428):446–448.)，这些被称为VHH片段。现在，大多数单域抗体的研究是基于重链可变结构域的。单域抗体具有很多优点。例如，它们通常有高溶解度和稳定性，并且可以很轻易的在酵母、植物和哺乳动物细胞中生产(HarmsenMM,DeHaardHJ(2007)驼类单域抗体片段的特性、生产和应用.ApplMicrobiolBiotechnol77(1):13–22.)。此外，它们具有良好的热稳定性和良好的组织穿透性。并且它们还具有成本效益。单域抗体的优点使得它们适用于许多的生物技术和治疗应用。例如，它们可用于治疗疾病，包括但不限于癌症、传染性疾病、炎症和神经退行性疾病。虽然抗CTLA-4的抗体已经开发出来，但作为治疗药物，抗CTLA-4抗体仍有改进的空间。因此，本领域希望开发新的抗CTLA-4抗体，特别是针对CTLA-4的单域抗体。
技术实现思路
本专利技术中，本公开中的冠词“一个(a)”、“一个(an)”和“这个(the)”是指该条的语法宾语中的一个或多个(即，至少一个)。举例而言，“一种抗体”指一种或多种抗体。本专利技术提供了新型抗CTLA-4单抗抗体，以及其氨基酸和核酸序列，及其使用。一方面，本专利技术提供了一种包含可特异性结合CTLA-4的重链可变结构域的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含：选自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3和SEQIDNO:10组成的组中1、2或3个重链互补性决定区(CDR)序列。在某些实施例中，所述重链可变结构域包含含有SEQIDNO:1、SEQIDNO:10和SEQIDNO:3的重链可变结构域。在某些实施例中，所述重链可变结构域包含含有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3的重链可变结构域。在某些实施例中，其中所述重链可变结构域包含选自由SEQIDNO:4、SEQIDNO:6和SEQIDNO:8组成的组中的重链可变区及其同源序列，所述同源序列具有至少80％的序列同一性，而与CTLA-4保持特定的结合亲和力。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽还进一步包含一种或多种氨基酸残基替代或修饰，而与CTLA-4保持特定的结合亲和力。在某些实施例中，至少一种替代或修饰是在一个或多个CDR序列中，和/或在一个或多个VH序列中，但不在任何CDR序列中。在某些实施例中，所述抗体多肽是单域抗体或重链抗体。在某些实施例中，所述重链可变结构域来源于VHH结构域。在某些实施例中，所述抗体多肽进一步包含免疫球蛋白恒定区，可选的人Ig的恒定区，或者可选的人IgG的恒定区域。在某些实施例中，所述抗体多肽是被分离的。在某些实施例中，所述重链可变结构域是驼类源的或是人源化的。在某些实施例中，所述抗体多肽是纳米体。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽可特异性结合人CTLA4，通过流式细胞术测定其EC50值不超过0.5nM。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽可阻断CTLA4和细胞表面表达的CD80之间的结合，流式细胞术测定其IC50值不超过0.15nM；或阻断CTLA4和细胞表面表达的CD86之间的结合，流式细胞术测定其IC50值不超过0.25nM。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽可特异性结合食蟹猴CTLA-4，和/或鼠CTLA-4。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽与一个或多个共轭基团连接。在某些实施例中，所述共轭基团包含清除修饰剂、化学治疗剂、毒素、放射性同位素、镧系元素、发光标记、荧光标记、酶底物标记、DNA烷基化剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白粘合剂或其他抗癌药物。另一方面，本专利技术提供了一种抗体或其抗原结合片段，所述片段与上述任一权利要求的抗体多肽竞争相同的表位。本专利技术还提供了一种包含本公开提供的抗体多肽的药物组合物，包括抗体或其抗原结合片段，和药学可接受的载体。本专利技术还提供了一种编码本公开提供的抗体多肽的多核苷酸。在某些实施例中，所述多核苷酸是被分离的。在某些实施例中，本公开提供的多核苷酸包含选自SEQIDNO:5、SEQIDNO:7和SEQIDNO:9组成的组中的核苷酸序列，和/或其具有至少80％(如至少85％、88％、90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)序列同一性的同源序列，和/或其仅具有简并替代的变体。本专利技术还提供了一种包含本公开提供的多核苷酸的载体。本专利技术还提供了一种包含本公开提供的载体的宿主细胞。本专利技术还提供了一种表达本公开提供的抗体多肽的方法，包括在可表达本公开提供的载体的条件下培养本公开提供的宿主细胞。本专利技术还提供了一种在将受益于CTLA-4活性的调节受试者中治疗疾病或病症的方法，包括向受试者施用本公开提供的任一抗体多肽或本公开所提供的药物组合物的治疗有效量。在某些实施例中，所述疾病或病症是CTLA-4相关疾病或病症。在某些实施例中，所述疾病或病症是癌症、自身免疫性疾病、炎症疾病、传染病、移植物抗宿主病(GVHD)或移植排斥。在某些实施例中，所述癌症是淋巴瘤、膀胱癌、骨癌、脑和中枢神经系统癌、乳腺癌、子宫或子宫内膜癌、直肠癌、食管癌、头颈癌、肛门癌、胃肠道癌、上皮内肿瘤、肾(kidney)癌或肾细胞(renal)癌、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、骨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含特异性结合CTLA-4的重链可变结构域的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含：/n选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:10组成的组中1、2或3个重链互补性决定区(CDR)序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180319 CN PCT/CN2018/0794951.一种包含特异性结合CTLA-4的重链可变结构域的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含：
选自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3和SEQIDNO:10组成的组中1、2或3个重链互补性决定区(CDR)序列。


2.如权利要求1中所述的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:10和SEQIDNO:3。


3.如权利要求1或2中所述的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含选自由SEQIDNO:4、SEQIDNO:6和SEQIDNO:8组成的组中的重链可变区及其同源序列，所述同源序列具有至少80％的序列同一性，而与CTLA-4保持特定的结合亲和力。


4.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，进一步包含一种或多种氨基酸残基替代或修饰，而与CTLA-4保持特定的结合亲和力。


5.如权利要求4中所述的抗体多肽，其中至少一种替代或修饰是在一个或多个CDR序列中，和/或在一个或多个VH序列中但不在任何CDR序列中。


6.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽是单域抗体或重链抗体。


7.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，其中所述重链可变结构域来源于VHH结构域。


8.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，进一步包含免疫球蛋白恒定区，可选的人Ig的恒定区，或者可选的人IgG的恒定区域。


9.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽是驼类源的或是人源化的。


10.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽是纳米体。


11.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽可特异性结合人CTLA4，通过流式细胞术测定其EC50值不超过0.5nM。


12.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽可阻断CTLA4和细胞表面表达的CD80之间的结合，流式细胞术测定其IC50值不超过0.15nM，或阻断CTLA4和细胞表面表达的CD86之间的结合，流式细胞术测定其IC50值不超过0.25nM。


13.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽可特异性结合食蟹猴CTLA-4，和/或小鼠CTLA-4。


14.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽与一个或多个共轭基团连接。


15.如权利要求14所述的抗体多肽，其中所述共轭基团包含清除修饰剂、化学治疗剂、毒素、放射性同位素、镧系元素、发光标记、荧光标记、酶底物标记、DNA烷基化剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白粘合剂或其他抗癌药物。


16.一种抗体多肽，与如前任一项权利要求所述的竞争相同的表位。


17.一种药物组合物，包含如前任一项权利要求所述的抗体多肽，和一种药学可接受的载体。


18.一种多核苷酸，编码如权利要求1-16中所述的抗体多肽。


19.如权利要求18中所述的多核苷酸，包含选自由SEQIDNO:5、SEQIDNO:7和SEQIDNO:9组成的组中的核苷酸序列，和/或其具有至少80％(如至少85％、88％、90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕴颖，李竞，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31