重组TET酶MBD4-NgTET1及其在提高TET酶氧化产物中5caC占比的应用制造技术

本发明专利技术提供了增强TET酶活性的重组蛋白结构域，为DNA甲基化结合结构域（MBD），MBD1

【技术实现步骤摘要】
重组TET酶MBD4
‑
NgTET1及其在提高TET酶氧化产物中5caC占比的应用
[0001]本申请是于2021年10月18日提交的申请号为202111207210.4、名称为“重组蛋白结构域及其编码DNA、增强TET酶及全基因组DNA甲基化检测方法”的专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术专利涉及重组蛋白结构域及其编码DNA、增强TET酶及全基因组DNA甲基化检测方法，属于生物


技术介绍

[0003]DNA胞嘧啶甲基化（5mC）是DNA中最常见的碱基修饰方式，约占所有胞嘧啶的1%
‑
8%，被称为“第五种碱基”。DNA甲基化与染色质状态和基因转录活跃程度具有明显的相关性，是预测基因表达水平的有效依据。因此，DNA甲基化水平检测是临床疾病诊断的有效手段。现有的DNA甲基化检测技术主要是依赖于反向筛选的重亚硫酸盐转化法，其原理是利用重亚硫酸盐将未甲基化的胞嘧啶转变成尿嘧啶，再通过PCR扩增转变成胸腺嘧啶。这种方法具有DNA损伤大、背景噪音高和准确性低等缺陷。近年来，酶转化法甲基化检测技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组TET酶MBD4
‑
NgTET1，其特征在于：所述重组TET酶MBD4
‑
NgTET1为序列如SEQ ID No.4所示的重组蛋白结构域MBD4通过GGGS连接肽连接序列如SEQ ID No.5所示的NgTET1蛋白。2.权利要求1所述的重组TET酶MBD4
‑
NgTET1在提高TET酶氧化产物中5caC占比的应用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于其步骤包括：（1）采用权利要求1所述的重组TET酶对模板DNA进行氧化；（2）还原剂处理，碱中和；（3）DNA回收，回收产物构成全基因组DNA甲基化检测文库；其中步骤（1）中添加TET酶反应缓冲液，所述TET酶反应缓冲液含有：1
‑
100 mM 3
‑
(N
‑
吗啉基)丙磺酸钠盐、1
‑
100 mM双(2
‑
羟乙基)氨基
‑
三(羟甲基)甲烷、1
‑
100 mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸、1
‑
300 mM氯化钠、0.1
‑
10 mM抗坏血酸、0.1
‑
10 mM柠檬酸、0.1
‑
20 mMα
‑
酮戊二酸、0.1
‑
20 mM 1,3
‑
丙酮二羧酸、0.1
‑
20 mM三磷酸腺苷、0.1
‑
10 mM四氟对苯醌、0.1
‑
10 mM四氯对苯醌、 0.1
‑
10 mM四溴对苯醌、0.1
‑
10 mM四碘苯醌、0.01
‑
2 mM三(2

【专利技术属性】
技术研发人员：侯策，韦磊，江翱，陈晶晶，黄开瑜，滕以刚，曹振，宋东亮，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：