【技术实现步骤摘要】
一种TanCAR的构建及其应用
[0001]本专利技术属于CART治疗
,具体涉及一种TanCAR的构建及其应用。
技术介绍
[0002]恶性肿瘤严重危及人类的生命健康。目前对恶性肿瘤的常规治疗仍为手术及放、化疗,这种常规治疗对极大多数肿瘤的疗效仍不十分理想,对与极大多数化疗药物而言,其治疗指数依然很低,即其治疗剂量与毒性剂量较为接近。故这种治疗手段通常伴有明显的毒性作用。因此,研究选择性杀灭肿瘤细胞的方法主要依赖于肿瘤细胞的特异性标记,目前肿瘤的靶向性治疗已经成为研究的热点。近年来,随着生物技术的迅速发展,CAR
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T(Chimeric antigen receptor T cell,CAR
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T)疗法已经成为一种非常有前途的癌症治疗方法,特别是针对非实体瘤的血液系统肿瘤,取得了非常好的临床治疗效果,目前作为针对B淋巴细胞恶性肿瘤治疗的CAR
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T药物已经获得美国FDA及中国SFDA的批准上市。但是,目前CAR
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T治疗过程还存在一些问题,特别是针对实体瘤的治疗效果欠佳,因此,如何提高CAR
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T针对实体瘤的治疗效果(如针对恶性胶质母细胞瘤的CAR
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T治疗效果),同时降低CAR
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T在治疗过程中所存在的副作用,是该领域所面临的巨大的挑战。
[0003]用于胶质母细胞瘤治疗的CAR
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T细胞所针对的靶抗原主要包括白介素13受体α2(IL13Rα2)、人类表皮生 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种TanCAR,其特征在于,在第三代CAR骨架的基础上构建而成,由识别靶细胞表面靶分子的胞外段部分、跨膜部分及细胞内信号转导部分三部分组成。TanCAR中识别靶细胞表面靶分子的胞外段部分由具有核苷酸序列表中NO1所示的碱基序列的IL13(E13K.R66D.S69D.R109K)突变体序列与具有核苷酸序列表中NO2所示的EphA2 scFv序列组成,其IL13(E13K.R66D.S69D.R109K)突变体序列位于识别靶细胞表面靶分子的胞外段部分的5
’
端,EphA2 scFv序列位于识别靶细胞表面靶分子的胞外段部分的3
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端,两段序列由GGGS linker的核酸序列间隔。2.如权利要求1所述的TanCAR,其特征在于,所说的核苷酸序列表中NO1所示的碱基序列中IL13(E13K.R66D.S69D.R109K)突变体氨基酸序列为:TCCCCAGGCCCTGTGCCTCCCTCTACAGCCCTCAGGAAGCTCATTGAGGAGCTGGTCAACATCACCCAGAACCAGAAGGCTCCGCTCTGCAATGGCAGCATGGTATGGAGCATCAACCTGACAGCTGGCATGTACTGTGCAGCCCTGGAATCCCTGATCAACGTGTCAGGCTGCAGTGCCATCGAGAAGACCCAGGACATGCTGGACGGATTCTGCCCGCACAAGGTCTCAGCTGGGCAGTTTTCCAGCTTGCATGTCCGAGACACCAAAATCGAGGTGGCCCAGTTTGTAAAGGACCTGCTCTTACATTTAAAGAAACTTTTTAAGGAGGGACAGTTCAAC。3.如权利要求1所述的TanCAR,其特征在于,所说的蛋白序列表中NO1所示的氨基酸序列中IL13(E13K.R66D.S69D.R109K)蛋白序列为:SPGPVPPSTALRKLIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQDMLDGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFKEGQFN。4.如权利要求1所述的TanCAR,其特征在于,所说的核苷酸序列表中NO2所示的碱基序列中优化酶切位点以及增添linker的EphA2 scFv核酸序列为:TTCGAACAGGTTCAATTGTTAGAGTCTGGTGGTGGCCTGGTACAACCAGGTGGCTCCCTCAGGCTCAGCTGCGCCGCATCAGGATTTACTTTCAGCTCTTATACTATGAGTTGGGTTAGACAAGCCCCTGGGCAAGCCCTCGAATGGATGGGAACAATCTCGTCCGGAGGCACATATACCTACTACCCCGACTCCGTCAAAGGTCGGTTTACGATCAGCCGTGACAACGCCAAAAATTCCCTGTACCTACAAATGAACTCTCTAAGAGCTGAAGATACTGCAGTCTATTATTGCGCCAGAGAAGCTATCTTCACTTACTGGGGACGTGGTACGTTAGTGACAGTCTCATCGGGCGGTGGCGGTTCTGGTGGCGGTGGCTCCGGCGGTGGCGGTTCTGACATTCAGCTAACTCAAAGTCCATCGTCGCTATCAGCCAGCGTAGGAGACAGAGTCACAATCACGTGCAAAGCGAGCCAAGACATCAATAACTATCTTTCATGGTATCAACAGAAACCTGGCCAAGCACCGCGTTTACTTATATACAGAGCAAATCGGTTGGTAGACGGTGTCCCCGACAGATTCTCTGGTTCAGGTTACGGGACGGACTTTACCTTAACAATTAATAACATCGAGAGTGAAGATGCGGCTTACTATTTCTGCCTGAAATACGACGTGTTCCCATATACATTTGGTCAGGGTACTAAGGTTGAGATTAAAGCTAGC。5.如权利要求1所述的TanCAR,其特征在于,所说的核苷酸序列表中NO2所示的碱基序列中优化酶切位点以及增添linker的EphA2 scFv蛋白序列为:QVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYTMSWVRQAPGQALEWMGTISSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREAIFTYWGRGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINNYLSWYQQKPGQAPRLLIYRANRLVDGVPDRF...
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