一种靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞及其应用制造技术

本发明专利技术公开了肿瘤免疫细胞治疗领域的一种靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞及其应用。本发明专利技术一方面提供一种嵌合抗原受体，其由第一信号肽、抗原结合片段、铰链区、跨膜区、胞内共刺激信号域、胞内域、自剪切序列、第二信号肽和抗CD47单链抗体依次串联而成；另一方面提供一种靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞，特别是嵌合抗原受体修饰的T细胞、NK细胞或NKT细胞。本发明专利技术将编码抗原结合片段的第一核酸和编码抗CD47单链抗体的第二核酸构建在同一个载体上，通过靶向抗原并外泌CD47抗体，可实现抗CD47抗体的局部递送，减轻对正常细胞的影响，并有效拮抗肿瘤免疫微环境中的免疫抑制因素，阻断肿瘤细胞的抗吞噬作用。阻断肿瘤细胞的抗吞噬作用。阻断肿瘤细胞的抗吞噬作用。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞及其应用


[0001]本专利技术属于肿瘤免疫细胞治疗领域，具体涉及一种靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞及其应用。

技术介绍

[0002]作为一种新型靶向免疫疗法，嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR
‑
T)已在血液系统恶性肿瘤疾病中展现出了卓越疗效。嵌合抗原受体(CARs)是将T细胞重新定位于肿瘤表面抗原的合成受体，主要由胞外抗原结合域、跨膜结构域和胞内结构域组成。胞外抗原结合域可特异性识别肿瘤抗原，并通过跨膜结构域连接胞内结构域，从而传递活化信号，促进T细胞的增殖与功能。经CAR修饰后的T细胞无须MHC分子的处理和递呈便可识别肿瘤细胞的肿瘤抗原，特异性杀伤肿瘤细胞，在临床上具有广阔的应用前景。第一代CARs通常将抗体衍生的肿瘤结合元件连接到CD3ζ或Fc受体信号结构域以触发T细胞活化，可在一定程度上杀伤肿瘤细胞，但效果并不十分理想，CART细胞存活时间较短。第二代和第三代治疗则增加了CD28、4
‑
1BB等共刺激分子，在很大程度上延长了T细胞存活时间并增强其效应子功能。
[0003]在用化疗、放化疗联合以及造血干细胞移植等传统方式治疗难治复发白血病效果欠佳的情况下，CAR
‑
T细胞治疗是理想选择。目前以CD19为靶点的CAR
‑
T细胞在治疗难治复发白血病和淋巴瘤患者中的应用最为广泛，但病人在获得高缓解率的同时伴随着高复发率的风险。例如，CD19
‑
CAR
‑
T治疗难治复发非霍奇金淋巴瘤已取得显著疗效，约50％的患者可获得完全缓解，但其中约有55％在一年内复发；另外，由于免疫抑制性肿瘤微环境与抗原丢失等限制，与CD19
‑
CAR
‑
T在急性白血病中所取得的疗效相比，其在实体肿瘤中的疗效不佳。导致CD19
‑
CAR
‑
T治疗复发的主要机制包括抗原反复刺激导致的免疫抑制性肿瘤微环境和肿瘤选择性剪接导致的抗原逃逸。因此，为减少免疫抑制性TME对CAR
‑
T细胞的抑制作用，减少治疗复发，需要进一步改善现有CD19
‑
CAR
‑
T细胞的结构与功能以及治疗策略，以期获得更好的疗效。
[0004]CD47是一种广泛分布于正常细胞表面的蛋白质，其主要配体SIRPα在巨噬细胞、粒细胞、单核细胞等髓样细胞的膜上高度表达。正常细胞表达CD47而标上自我标记，通过CD47/SIRPα轴释放“don
’
t eat me”信号，抑制巨噬细胞介导的吞噬作用，保护正常细胞免遭破坏。研究表明，CD47在多种肿瘤如白血病、淋巴瘤中均有高表达。通过高表达CD47，癌细胞可伪装成自身细胞释放抗吞噬信号，抑制巨噬细胞介导的吞噬作用，发生免疫逃逸，从而促进肿瘤的进展扩散，与肿瘤患者的预后不良相关。此外，CD47的表达与PD
‑
1、Treg标记Foxp3、MDSC标记CD11b和CD33的表达正相关。抗CD47处理可促使肿瘤小鼠模型体内的巨噬细胞向M1亚型极化，并降低肿瘤小鼠模型的效应T细胞中PD
‑
1的表达并增加IFN
‑
γ的分泌，减少免疫抑制性细胞Tregs和MDSCs的数量，以此改善肿瘤微环境，延缓肿瘤的生长。但是抗CD47单链抗体的自身特性导致其应用具有一定局限性，且存在靶向正常细胞的风险，造成细胞毒性反应。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中的不足，本专利技术的目的在于提供一种靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞及其应用。
[0006]本专利技术第一方面提供一种嵌合抗原受体，由第一信号肽、抗原结合片段、铰链区、跨膜区、胞内共刺激信号域、胞内域、自剪切序列、第二信号肽和抗CD47单链抗体依次串联而成。
[0007]进一步地，所述抗原结合片段识别和结合的抗原为肿瘤相关抗原；
[0008]优选地，所述抗原结合片段为单链抗体；
[0009]优选地，所述肿瘤相关抗原选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD123、BCMA或Her2等；
[0010]优选地，所述肿瘤相关抗原为CD19。
[0011]进一步地，所述第一信号肽和第二信号肽选自CD8α信号肽、IL
‑
2信号肽或GM
‑
CSF信号肽；
[0012]优选地，所述第一信号肽选自CD8α信号肽；
[0013]优选地，所述第二信号肽选自GM
‑
CSF信号肽；
[0014]所述铰链区选自CD8α铰链区或FcRIIIα受体；
[0015]所述跨膜区选自T细胞受体亚基、CD8α亚基、CD8β亚基、CD8δ亚基、CD4跨膜结构域或CD28跨膜结构域；
[0016]所述胞内共刺激信号域选自4
‑
1BB、CD27、CD28、ICOS、OX40、NKG2D或B7
‑
H3胞内共刺激信号域中的一种；胞内共刺激信号域用于传导胞外对抗原结合片段特异的抗原结合域与目标抗原结合后产生的刺激信号，引起免疫细胞活化和免疫应答；
[0017]优选地，所述胞内共刺激信号域选自4
‑
1BB；
[0018]所述胞内域选自CD3ζ；
[0019]所述自剪切序列选自T2A或P2A。
[0020]本专利技术第二方面提供所述嵌合抗原受体的编码基因。
[0021]本专利技术第三方面提供所述嵌合抗原受体的编码基因的表达载体。
[0022]进一步地，所述表达载体选自慢病毒表达载体、逆转病毒表达载体或腺病毒表达载体。
[0023]本专利技术第四方面提供包含所述表达载体的病毒。
[0024]本专利技术第五方面提供一种靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞，包含所述嵌合抗原受体的编码基因或所述嵌合抗原受体的编码基因的表达载体；
[0025]优选地，所述免疫细胞选自T细胞、NK细胞或NKT细胞；
[0026]优选地，所述免疫细胞选自T细胞。
[0027]本专利技术第六方面提供一种靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞在制备治疗淋巴瘤或白血病药物中的应用。
[0028]本专利技术第七方面提供一种药物组合物，包括所述嵌合抗原受体的编码基因的表达载体或所述的靶向抗原同时外泌CD47抗体的免疫细胞。
[0029]本专利技术的有益效果为：
[0030]1、本专利技术将编码抗原结合片段(如CD19单链抗体)的第一核酸和编码抗CD47单链抗体的第二核酸构建在同一个载体上，通过靶向抗原并外泌CD47抗体，本专利技术嵌合抗原受
体修饰的免疫细胞可实现抗CD47抗体的局部递送，减轻对正常细胞的影响，高效、特异性地靶向表达相应抗原的肿瘤细胞，并有效拮抗肿瘤免疫微环境中的免疫抑制因素，阻断肿瘤细胞的抗吞噬作用，在保留嵌合抗原受体修饰的免疫细胞抗肿瘤活性的同时，减少肿瘤免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，由第一信号肽、抗原结合片段、铰链区、跨膜区、胞内共刺激信号域、胞内域、自剪切序列、第二信号肽和抗CD47单链抗体依次串联而成。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗原结合片段识别和结合的抗原为肿瘤相关抗原；优选地，所述抗原结合片段为单链抗体；优选地，所述肿瘤相关抗原选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD123、BCMA或Her2；优选地，所述肿瘤相关抗原为CD19。3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述第一信号肽和第二信号肽选自CD8α信号肽、IL
‑
2信号肽或GM
‑
CSF信号肽；优选地，所述第一信号肽选自CD8α信号肽；优选地，所述第二信号肽选自GM
‑
CSF信号肽；所述铰链区选自CD8α铰链区或FcRIIIα受体；所述跨膜区选自T细胞受体亚基、CD8β亚基、CD8α亚基、CD8δ亚基、CD4跨膜结构域或CD28跨膜结构域；所述胞内共刺激信号域选自4
‑
1BB、CD27、CD28、IC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉华，邱瑛琦，胡宇行，胡蓉，许斌焱，王浩，廖佩云，
申请(专利权)人：生物岛实验室，
类型：发明
国别省市：