【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及il18蛋白的特异性抗体及其制备方法与应用。
技术介绍
1、白介素18(il-18，也称为干扰素-γ诱导因子)是一种免疫反应的调节因子，也是一种炎症性细胞因子，其在免疫系统的抗病毒和抗细菌等反应中起着重要作用。il-18的功能十分复杂多样。一方面，il-18能够刺激免疫系统的自然杀伤细胞(nk细胞)和t细胞的活性，增强机体的抗病毒和抗肿瘤能力。另一方面，il-18还能够促进炎症反应的过程，进一步激活促炎细胞因子如il-1β和tnf-α的分泌，加重机体炎症反应和疾病的发展。
2、随着对il-18作用机制的研究不断深入，人们发现它在人类疾病中的作用越来越受到重视。研究表明，il-18可能与多种疾病的发生和发展有关。首先，il-18与一些细胞因子异常分泌所引起的炎症反应相关，如关节炎、肝炎和慢性阻塞性肺病等。这些疾病往往伴随着白细胞介素异常高水平的存在，导致机体炎症反应持续过度，进一步加重病情。其次，il-18也与某些肿瘤的形成和发展有关，它可以激活nk细胞对肿瘤细胞的攻击力，因此可以作为一种抗肿瘤的治疗手段被应用于临床。在一些实验室研究中，发现对il-18的靶向治疗，可以有效地抑制某些恶性肿瘤的生长和扩散。il-18也与一些自身免疫性疾病有关。如类风湿性关节炎和狼疮等疾病的患者血清中il-18的含量明显升高。因此研究人员认为il-18在自身免疫反应的调节中起着至关重要的作用。
3、虽然il-18的功能多样，但激活il-18通路可能会导致机体的过度炎症反应，引发一些炎症性疾病的发生和
4、在研究il-18过程中，抗体是一个非常重要的研究工具，尤其对于疾病患者具有重大的价值和意义。然而，传统的鼠、兔等动物仅能识别抗原表面平展的多肽。
5、因此，需要开发一种能够识别抗原表面复杂的空间结构，产生高度特异性、高亲和力的抗体。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的上述技术问题之一，本专利技术提供了一种il18蛋白的特异性抗体及其制备方法与应用。
2、第一方面，本专利技术提供用il18蛋白免疫骆驼科动物所得的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。
3、在一些实施方案中，所述骆驼科动物选自单峰驼、双峰驼、美洲驼、骆马、羊驼和小羊驼，优选为羊驼。
4、在一些实施方案中，所述抗体为纳米抗体，所述抗体活性片段为纳米抗体活性片段。
5、在一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体或者多克隆抗体。
6、在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段与所述il18蛋白结合的kd值在1000nm以下，优选在800nm以下，更优选在600nm以下，更优选在500nm以下，更优选在300nm以下。
7、在一些实施方案中，所述il18蛋白具有如seq id no:1所示的氨基酸序列。进一步优选地，所述il18蛋白由包括如下步骤的方法制备而成：将编码所述il18蛋白的核苷酸序列构建至载体质粒；将所述载体质粒转染至真核细胞系中表达，纯化。
8、在一些实施方案中，所述il18蛋白可通过商业渠道获得。
9、第二方面，本专利技术提供一种构建抗体文库的方法，所述方法包括如下步骤：
10、(1)将il18蛋白作为抗原免疫骆驼科动物，采集被免疫动物的静脉外周血，分离得到淋巴细胞；
11、(2)提取所述淋巴细胞的总mrna，反转录为cdna并进行扩增；
12、(3)将所述扩增得到的dna插入病毒表达载体，转化入细菌，收集菌落，得抗体文库。
13、在一些实施方案中，所述骆驼科动物选自单峰驼、双峰驼、美洲驼、骆马、羊驼和小羊驼，优选为羊驼。
14、在一些实施方案中，步骤(1)所述免疫采用皮下注射方式。所述免疫的次数优选为3～5次。所述静脉外周血优选在最后一次免疫之前和之后分别采集。
15、在一些实施方案中，步骤(3)所述病毒表达载体为噬菌体表达载体。
16、在一些实施方案中，步骤(3)所述细菌为tg1感受态细菌。
17、第三方面，本专利技术提供上述构建抗体文库的方法获得的抗体文库，或由所述抗体文库表达产生的多克隆抗体。
18、第四方面，本专利技术提供一种构建抗原特异性抗体文库的方法，所述方法包括如下步骤：对第三方面所述的抗体文库进行筛选，获得抗原特异性抗体文库。
19、在一些实施方案中，所述构建抗原特异性抗体文库的方法包括如下步骤：
20、(i)对所述抗体文库进行培养，释放病毒；
21、(ii)将所述病毒与抗原进行孵育，去掉与抗原非特异性结合的病毒，保留与抗原特异性结合的病毒；
22、(iii)用所述与抗原特异性结合的病毒侵染细菌，收集菌落，获得抗原特异性抗体文库。
23、在一些实施方案中，步骤(iii)所述细菌为大肠杆菌。
24、第五方面，本专利技术提供上述构建抗原特异性抗体文库的方法获得的抗原特异性抗体文库，或由所述抗原特异性抗体文库表达产生的与抗原特异性结合的多克隆抗体。
25、第六方面，本专利技术提供一种制备抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段的方法，所述方法包括如下步骤：对第三方面所述的抗体文库进行筛选，获得与抗原特异性结合的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。
26、在一些实施方案中，所述制备抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段的方法包括如下步骤：
27、(a)对所述抗体文库进行培养，释放病毒；
28、(b)将所述病毒与抗原进行孵育，去掉与抗原非特异性结合的病毒，保留与抗原特异性结合的病毒；
29、(c)用所述与抗原特异性结合的病毒侵染细菌，将被侵染的细菌涂抹至平板培养基培养，挑选单一菌落。
30、在一些实施方案中，步骤(c)所述细菌为大肠杆菌。
31、在一些实施方案中，可以对所述单一菌落进行扩大培养，之后进行抗原特异性结合鉴定。
32、在一些实施方案中，可以对所述单一菌落进行扩大培养，然后进行步骤(d)：提取dna，转化至宿主细胞并表达，以获得单克隆抗体。
33、第七方面，本专利技术提供采用上述制备抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段的方法获得的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。
34、第八方面，本专利技术提供特异性识别il18蛋白的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段；所述抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段包含至少一个重链可变区；所述重链可变区具有：
35、如seq id no:3或seq id no:4或seq id no:5所示的cdr1；
【技术保护点】
1.特异性识别IL18蛋白的纳米抗体或其活性片段。
2.根据权利要求1所述的纳米抗体或其活性片段，其特征在于，所述纳米抗体或其活性片段包含重链可变区，所述重链可变区具有：
3.核酸分子，其编码权利要求1或2所述的纳米抗体或其活性片段。
4.表达载体，其含有权利要求3所述核酸分子；
5.宿主细胞，其包括权利要求3所述的核酸分子，优选为大肠杆菌。
6.利用所述权利要求5所述宿主细胞表达纳米抗体或其活性片段的方法。
7.权利要求1或2所述纳米抗体或其活性片段经人源化后获得的人源化纳米抗体或其活性片段。
8.蛋白偶联物，其特征在于，包含权利要求1或2所述纳米抗体或其活性片段或权利要求7所述人源化纳米抗体或其活性片段；
9.检测样品中IL18蛋白的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或2所述纳米抗体或其活性片段或权利要求7所述人源化纳米抗体或其活性片段；
10.权利要求1或2所述纳米抗体或其活性片段，或权利要求7所述人源化纳米抗体或其活性片段在制备检测样品中IL18蛋白的试剂盒中的应用
...【技术特征摘要】
1.特异性识别il18蛋白的纳米抗体或其活性片段。
2.根据权利要求1所述的纳米抗体或其活性片段，其特征在于，所述纳米抗体或其活性片段包含重链可变区，所述重链可变区具有：
3.核酸分子，其编码权利要求1或2所述的纳米抗体或其活性片段。
4.表达载体，其含有权利要求3所述核酸分子；
5.宿主细胞，其包括权利要求3所述的核酸分子，优选为大肠杆菌。
6.利用所述权利要求5所述宿主细胞表达纳米抗体或其活性片段的方法。
7.权利要求...
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