副鸡禽杆菌HA融合蛋白及其三聚体、制备的疫苗组合物、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种副鸡禽杆菌HA融合蛋白，该副鸡禽杆菌HA融合蛋白由从N端到C端依次排列的副鸡禽杆菌HA蛋白片段和促三聚体结构组成；该副鸡禽杆菌HA蛋白片段为A型、B型、或C型副鸡禽杆菌HA蛋白片段，该A型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.1所示，该B型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.2所示、该C型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.3所示。本发明专利技术的副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚化后形成的三聚体具有良好的免疫原性，其制备的疫苗不仅能产生完全保护，还能对低日龄的雏鸡完全保护，解决了现有技术中肉雏鸡早期的免疫问题。技术中肉雏鸡早期的免疫问题。

【技术实现步骤摘要】
副鸡禽杆菌HA融合蛋白及其三聚体、制备的疫苗组合物、制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及副鸡禽杆菌融合蛋白及其三聚体、制备的疫苗组合物、制备方法和应用，属于含有抗原或抗体的医药配制品领域。

技术介绍

[0002]副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum，Apg)是一种引起鸡急性上呼吸道疾病的致病菌，有A、B、C三个血清型。该病首先发现于波兰和美国，发现后，确认在其他各国经常发生。1980年以来，我国也屡有本病的报道，目前3个血清型均为主要流行血清型。感染后的呼吸道疾病俗称鸡传染性鼻炎(Avian infectious coryza，IC)，临床上以面部水肿、鼻窦炎、流泪为主要特征，可引起产蛋鸡的产蛋量下降，育成鸡的生长受阻、开产期推迟，肉鸡增重率下降，给养禽业造成巨大的经济损失。Apg 3个血清型之间不具有交叉保护力，而且同血清型的不同分离菌株间的保护力也有较大差异。
[0003]副鸡禽杆菌引起的鸡传染性鼻炎是当前世界范围内严重危害家禽养殖业发展的重要疾病之一。在各种防控措施中，疫苗免疫仍为最重要的措施。目前养禽业中普遍使用全菌灭活疫苗，除对发酵培养的单位体积菌数有着较高的要求，还存在灭活不完全造成的生物安全方面的风险。
[0004]亚单位疫苗是近几年发展起来的一种比较切实可行的新型基因工程疫苗，副鸡禽杆菌亚单位疫苗研究尝试以HA蛋白为研究对象，然而因为分子量过大，很难在体外实现高效表达，未开发成产品，现有技术中至今未有副鸡禽杆菌亚单位疫苗上市。加上本病的发病特点是潜伏期短、传播迅速,短时间内便可波及全鸡群，因此，临床上急需开发出免疫效果好的亚单位疫苗组合物，能够有效防止该病的流行。
[0005]在当前产业上，全菌抗原疫苗制备过程中存在的内毒素及细菌碎片，造成的食欲下降、精神萎靡、注射部位肿块等副反应一直存在，尤其不能用于21日龄以下雏鸡，加之肉鸡出栏早，注射部位肿块不能完全吸收，因此全菌抗原疫苗不能施用于低日龄的肉雏鸡。如何解决肉雏鸡早期的副鸡禽杆菌免疫也是临床上亟需解决的问题。

技术实现思路

[0006]为解决现有技术的不足，本专利技术提供一种副鸡禽杆菌融合蛋白、其制备的疫苗组合物，该疫苗组合物能够有效预防和/或治疗副鸡禽杆菌的感染。
[0007]本专利技术提供一种副鸡禽杆菌HA融合蛋白，其中，所述副鸡禽杆菌HA融合蛋白由从N端到C端依次排列的副鸡禽杆菌HA蛋白片段和促三聚体结构组成；所述副鸡禽杆菌HA蛋白片段为A型副鸡禽杆菌HA蛋白片段、B型副鸡禽杆菌HA蛋白片段、或C型副鸡禽杆菌HA蛋白片段，所述A型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.1所示，所述B型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.2所示、所述C型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.3所示。
[0008]本专利技术使用的副鸡禽杆菌HA蛋白片段具有良好的免疫原性，其制备成疫苗免疫鸡
后较对应的副鸡禽杆菌HA蛋白制备的疫苗具有更好的免疫效果。
[0009]作为本专利技术的一种实施方式，所述的副鸡禽杆菌HA融合蛋白中所述促三聚体结构为副鸡禽杆菌HA蛋白C
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末端、T4噬菌体纤维蛋白C
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末端(T4 phage fibritin foldon trimerization)、酵母转录激活因子GCN4(Transcriptional activator GCN4)、或CMP(chicken cartilage matrix protein)；所述副鸡禽杆菌HA蛋白C
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末端如SEQ ID NO.4所示，所述T4噬菌体纤维蛋白C
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末端如SEQ ID NO.5所示，所述酵母转录激活因子GCN4如SEQ ID NO.6所示，所述CMP如SEQ ID NO.7所示。
[0010]作为本专利技术的一种优选实施方式，所述的副鸡禽杆菌HA融合蛋白中，所述副鸡禽杆菌HA蛋白片段和所述促三聚体结构之间还具有柔性肽段，所述柔性肽段如SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。
[0011]本专利技术所述的副鸡禽杆菌融合蛋白还可以包括柔性连接肽，所述柔性连接肽的长度为4
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10个氨基酸序列。柔性连接肽能够使嵌合蛋白具有更佳的亲和力，这主要是由于柔性连接肽增加了结构功能域之间的空间，消除或减少了相邻结构功能域之间的空间物理阻碍作用，增加所述融合蛋白各结构功能域的相对独立性，同时也增加所述融合蛋白各功能区的结构稳定及生物学功能。
[0012]本专利技术还提供了一种副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体，其中，任一所述副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体的分子由三个所述的副鸡禽杆菌HA融合蛋白的分子三聚化而成。
[0013]本专利技术的副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体，经制备为疫苗后能提供完全保护，且能对低日龄的雏鸡提供完全保护。
[0014]本专利技术还提供一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的所述副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体，以及药学上可接受的载体。
[0015]本专利技术首次采用副鸡禽杆菌HA蛋白片段和促三聚体结构组成融合蛋白高效表达后，形成三聚体结构，制备疫苗组合物，可预防和/或治疗鸡传染性鼻炎疫情，并且含有该融合蛋白的疫苗组合物免疫动物后能使动物机体快速产生抗体，对当前流行的副鸡禽杆菌单独或混合感染有良好的预防和控制效果，生物安全性好。能提供完全保护，且能对低日龄的雏鸡提供完全保护。
[0016]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术的疫苗组合物中，所述副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体为A型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体和/或B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体和/或C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体。
[0017]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术的疫苗组合物中，所述A型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价≥1:8，所述B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价≥1:16，所述C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价≥1:16。
[0018]作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术的疫苗组合物中，所述A型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:8～1:32，所述B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:16～1:32，所述C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:16～1:32。
[0019]所述A型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价可选自1:8、1:16、1:32。
[0020]所述B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价可选自1:16、1:32。
[0021]所述C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价可选自1:16、1:32。
[0022]作为本专利技术的一种更优选的实施方式，本专利技术的疫苗组合物中，所述A型副鸡禽杆
菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:8，所述B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:16，所述C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:16。
[0023]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种副鸡禽杆菌HA融合蛋白，其中，所述副鸡禽杆菌HA融合蛋白由从N端到C端依次排列的副鸡禽杆菌HA蛋白片段和促三聚体结构组成；所述副鸡禽杆菌HA蛋白片段为A型副鸡禽杆菌HA蛋白片段、B型副鸡禽杆菌HA蛋白片段、或C型副鸡禽杆菌HA蛋白片段，所述A型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.1所示，所述B型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.2所示、所述C型副鸡禽杆菌HA蛋白片段如SEQ ID No.3所示。2.根据权利要求1所述的副鸡禽杆菌HA融合蛋白，其中，所述促三聚体结构为副鸡禽杆菌HA蛋白C
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末端、T4噬菌体纤维蛋白C
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末端(T4 phage fibritin foldon trimerization)、酵母转录激活因子GCN4(Transcriptional activator GCN4)、或CMP(chicken cartilage matrix protein)；所述副鸡禽杆菌HA蛋白C
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末端如SEQ ID NO.4所示，所述T4噬菌体纤维蛋白C
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末端如SEQ ID NO.5所示，所述酵母转录激活因子GCN4如SEQ ID NO.6所示，所述CMP如SEQ ID NO.7所示；优选地，所述副鸡禽杆菌HA蛋白片段和所述促三聚体结构之间还具有柔性肽段，所述柔性肽段如SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。3.一种副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体，其中，任一所述副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体的分子由三个权利要求1～2任意一项所述的副鸡禽杆菌HA融合蛋白的分子三聚化而成。4.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的权利要求3所述副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体，以及药学上可接受的载体；优选地，所述副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体为A型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体和/或B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体和/或C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体。5.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其中，所述A型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价≥1:8，所述B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价≥1:16，所述C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价≥1:16；优选地，所述A型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:8～1:32，所述B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:16～1:32，所述C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:16～1:32；更优选地，所述A型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:8，所述B型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:16，所述C型副鸡禽杆菌HA融合蛋白三聚体AGP效价为1:16。6.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其中，所述药学上可接受的载体为佐剂，所述佐剂选自：(1)矿物油、铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、DDA；(2)油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或(3)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物；以及RIBI佐剂系统、Block co
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polymer、SAF
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M、单磷酰脂质A、Avridine脂质
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胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS 1314、胞壁酰二肽、ISA 206、Gel佐剂中的一种或几种；优选地，皂苷为Quil A、QS
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21、GPI
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0100；所述佐剂含量为5％
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70％V/V，所述佐剂含量优选30％到70％V/V，更优选66％V/V。7.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物还包括下列抗原组成的组中的一种或多种：鸡新城疫病毒抗原、禽流感病毒抗原、传染性支气管炎病毒抗原、鸡传染性法氏囊病病毒抗原、减蛋综合征病毒抗原、禽呼肠孤病毒抗原、大肠杆菌抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，逄文强，金云云，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：