融合蛋白在制备疫苗佐剂或预防和治疗病毒感染的药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种融合蛋白在制备疫苗佐剂或预防和治疗病毒感染的药物中的用途，所述融合蛋白包括特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段和人干扰素。本发明专利技术还涉及所述融合蛋白在制备预防和治疗病毒感染导致的疾病的药物中的用途。本发明专利技术的融合蛋白具有可激活OX40信号通路，调节人获得性免疫系统，并且与调节人先天免疫系统的干扰素信号相互配合，协同增强人体对病毒的免疫力，以达到强效抗病毒的效果。本发明专利技术的融合蛋白可在预防和/或治疗病毒导致的疾病，特别是乙肝病毒、水痘

【技术实现步骤摘要】
融合蛋白在制备疫苗佐剂或预防和治疗病毒感染的药物中的用途


[0001]本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种抗人OX40抗体和干扰素的融合蛋白在制备疫苗佐剂或抗病毒的药物中的应用。

技术介绍

[0002]目前抗病毒药物大体上分为两大类，一类直接抑制病毒，另一类则是通过调节人体免疫系统来清除病毒。直接抑制病毒的药物是针对病毒的生命周期的关键环节开发的。病毒感染人体有几个主要环节，包括：1)病毒结合并侵入细胞；2)病毒的遗传物质在细胞内的复制；3)病毒衣壳蛋白的表达、加工和新一代病毒的组装；和4)病毒的释放。针对以上环节，可以开发出各种药物。直接抑制病毒的药物由于针对性强，可开发出高效、低副作用的特效药。然而由于许多病毒的变异性强，容易出现耐药现象。一旦出现耐药，则必须重新开发新的药物，对时效性和开发成本都是很大的挑战。另一类通过调节人体免疫力起效的药物则恰好具有与直接抑制病毒的药物互补的优势。人体的先天免疫系统对包括病毒在内的病原体有着迅速且广谱的打击能力，而获得性免疫系统则包括具有巨大多样性的免疫细胞。因此，充分调动人体的免疫系统可以有效地抵御多种病毒，包括突变的病毒。
[0003]目前机制明确的且被广泛用于抗病毒的调节人体免疫力的药物是干扰素类药物。干扰素(Interferon，IFN)是一类具有广泛生物活性的糖蛋白。干扰素通过诱导细胞进入特殊的抗病毒状态，激活细胞合成抗病毒蛋白(AVP)，产生降解病毒mRNA、抑制病毒多肽链的合成等多种效应，从而实现干扰病毒增殖的效果。另外，干扰素也与多个信号通路产生联系，调节获得性免疫系统，促进高特异性细胞免疫和体液免疫的形成，达到强效且持久的抗病毒效果。
[0004]根据其对应的受体的不同，通常将干扰素分为3种主要类型：I型干扰素、II型干扰素和III型干扰素。其中I型干扰素在临床上应用最为广泛，包括IFNα-2a、IFNα-2b、IFNα-2c、IFNβ-1a、IFNβ-1b、IFNω等。I型干扰素被广泛应用于肝炎、多发性硬化病及多种恶性肿瘤的治疗。
[0005]IFN药物也曾被尝试用于同为冠状病毒引起的SARS(严重急性呼吸系统综合症)和MERS(中东呼吸综合症)的治疗。以SARS为代表的致命性冠状病毒的爆发往往呈现突发、多地爆发的形式。这就导致没有足够的时间去根据病毒的特点研发特异性治疗性药物，所以老药新用或者广谱抗病毒药物(免疫激活剂)成为首要的应急选择。I型干扰素作为经典的广谱抗病毒药物，对SARS的治疗作用限于流行病爆发的特点而未经过严格的随机对照实验证实。I型干扰素对MERS的治疗作用也只是有一些病例报告，在使用Ribavirin与PEG-IFNa2b后，危重病人的预后得到了明显的改善。而I型干扰素在灵长类动物冠状病毒模型中也被报道有明确的治疗作用。在SARS食蟹猴模型中，预防性给予食蟹猴PEG-IFNa2b(感染前3天、1天)，可以较强地阻断SARS-Cov的分泌、复制以及病毒抗原蛋白在感染组织里的表达；而治疗性给药(感染后1天、3天)，PEG-IFNa2b只有中等程度的对病毒的分泌、复制以及病毒
抗原蛋白在感染组织里的表达的抑制作用。在MERS食蟹猴模型中，Ribavirin与PEG-IFNa2b联用，感染病毒8小时后，相对于对照组，治疗组动物未见明显的呼吸系统异常，仅有轻微的肺炎发生，低水平的血清与肺部炎性反应，病毒拷贝数也明显较低。
[0006]但是，总体而言，干扰素抗病毒的效果仍不令人满意，同时干扰素可导致多种不良反应，其副作用包括：流感样症状、发热、头痛、乏力、全身肌肉酸痛、外周血红细胞和血小板减少、情绪和精神异常，存在加重或诱发原有的或潜在的自身免疫性疾病的可能。这成为限制干扰素临床应用的主要原因。
[0007]人OX40主要表达于活化的T细胞上，包括CD4、CD8、Th和Treg细胞等。抗原依赖性OX40L/OX40共刺激分子的活化与T细胞内多个信号通路相偶联。晶体结构研究表明，OX40L与OX40的结合可诱导OX40-OX40L复合物三聚体化，从而在细胞内形成与receptor-associated factor(TRAF)结合的结合位点。后者(TRAF2、5)则可进而激活NF-κB信号通路，抑制T细胞凋亡。有研究发现，OX40活化可以导致Bcl-2和Bcl-xL高表达，提示OX40可能通过NF-κB信号通路诱导抗凋亡蛋白表达而实现其抑制T细胞凋亡的功能。PKB/PI3K是OX40下游的另一个重要信号通路。研究发现，一方面，T细胞上OX40的共刺激信号是维持PKB活化的必要条件，另一方面，组成型活化的PKB可以拮抗OX40缺陷导致的T细胞中抗凋亡蛋白的下调。OX40共刺激信号可以通过PKB/PI3K信号通路维持Survivin的表达。最后，T细胞上TCR和OX40的活化还可以协同引起钙流和NFAT信号通路的活化，调节包括IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ在内的细胞因子的表达。综上，上述研究表明OX40的活化可以通过NF-κB信号通路、PKB/PI3K信号通路和NFAT信号通路来调节T细胞的增殖、凋亡和细胞因子分泌活性，从而达到增强免疫系统活力的效果。基于上述发现，OX40已成为免疫疗法的一个重要靶点，众多的临床前和临床研究都提示OX40可以作为肿瘤免疫疗法的一个重要靶点。有趣的是，最近的研究还发现OX40信号通路在抑制乙肝病毒感染中的作用，提示OX40激动剂可以作为抗乙肝病毒感染，进而治疗乙肝病人的潜在手段。
[0008]近年来，呼吸系统病毒感染及其导致的疾病大规模频繁爆发，严重危害人类健康，甚至引发全球性健康危机。在此背景下，急需开发有效地对抗呼吸系统病毒感染，提高人体免疫力的新型药物。

技术实现思路

[0009]本专利技术的主要目的在于提供一种融合蛋白在制备疫苗佐剂或预防和/或治疗病毒感染和/或病毒感染导致的疾病的药物中的应用。本专利技术的研究意外地发现，该融合蛋白具有特异性抗病毒活性，可激活OX40信号通路，调节人获得性免疫系统，并且与调节人先天免疫系统的干扰素信号通路相互配合，协同增强人体针对病毒的免疫力，以达到强效抗病毒的效果。
[0010]第一方面，本专利技术提供了一种融合蛋白在制备疫苗佐剂或预防和/或治疗病毒感染和/或病毒感染导致的疾病的药物中的用途，其中所述融合蛋白包含：
[0011]a)特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段；和
[0012]b)人干扰素；
[0013]其中所述人干扰素直接或通过肽接头连接至所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段的轻链或重链的羧基端或氨基端。
[0014]在根据本专利技术的用途中，所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段可以包含：
[0015]重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的VH CDR1、SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的VH CDR2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的VH CDR3；和/或
[0016]轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白在制备疫苗佐剂或预防和/或治疗病毒感染和/或病毒感染导致的疾病的药物中的用途，其中所述融合蛋白包含：a)特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段；和b)人干扰素；其中所述人干扰素直接或通过肽接头连接至所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段的轻链或重链的羧基端或氨基端。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的VH CDR1、SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的VH CDR2和SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的VH CDR3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的VL CDR1、SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的VL CDR2和SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的VL CDR3；优选地，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示氨基酸序列或由其组成，和/或所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示氨基酸序列或由其组成。3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段选自骆驼化单域抗体、scFv、scFv二聚体、BsFv、dsFv、dsFv2、dsFv-dsFv'、Fv片段、Fab、Fab'、F(ab')2、ds双功能抗体、纳米抗体、域抗体或双价域抗体中的一种或多种。4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述特异性结合人OX40的抗体或其抗原结合片段还包含免疫球蛋白的恒定区；优选地，所述免疫球蛋白的恒定区选自人IgG1、IgG2或IgG4的恒定区中的一种或多种。5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述人干扰素选自I型人干扰素、II型人干扰素或III型人干扰素中的一种或多种；优选地，所述人干扰素选自IFNα2a、IFNβ、IFNγ、IFNλ3或IFNα2b中的一种或多种；更优选地，所述人干扰素为IFNα2b，例如氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的IFNα2b；进一步优选地，所述人干扰素为IFNα2b突变体，例如在SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列中具有一个或多个选自以下的突变的IFNα2b突变体：T106A、R149A、A145G、A145D、R120A或L117A，或者在SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列中具有一个或多个选自以下的双突变的IFNα2b突变体：T106A/A145D、T106A/R149A、T106A/A145G、T106A/R120A或T106A/L117A。6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其中所述肽接头选自(G)
m
、KESGSVSSEQLAQFRSLD、EGKSSGSGSESKST、GSAGSAAGSGEF、(GGGGS)
n
或(GGSGG)
n
中的一种或多种，其中m为1-20之间的整数，n为1-5之间的整数；优选地，m为5-10之间的整数，n为1-3之间的整数；更优选地，所述肽接头为(GGGGS)
n
，其中n为1-5之间的整数；进一步优选地，n为1-3之间的整数。7.根据权利要求1至6中任一项所述的用途，其中所述融合蛋白包含一组或多组选自以下的组分，或由其组成：(1)氨基酸序列为SEQ ID NO:10的特异性结合人OX40的抗体的重链和氨基酸序列为SEQ ID NO:11的特异性结合人OX40的抗体的轻链，其中所述重链通过肽接头在其羧基端连接人干扰素，所述肽接头为(GGGGS)3，并且所述人干扰素为如SEQ ID NO:9所示的IFNα2b；
(2)氨基酸序列为SEQ ID NO:12的特异性结合人OX40的抗体的重链和氨基酸序列为SEQ ID NO:11的特异性结合人OX40的抗体的轻链，其中所述轻链通过肽接头在其羧基端连接人干扰素，所述肽接头为(GGGGS)3，并且所述干扰素为如SEQ ID NO:9所示的IFNα2b；(3)氨基酸序列为SEQ ID NO:10的特异性结合人OX40的抗体的重链和氨基酸序列为SEQ ID NO:11的特异性结合人OX40的抗体，其中所述轻链通过肽接头在其羧基端连接人干扰素，所述肽接头为(GGGGS)3，并且所述干扰素为如SEQ ID NO:9所示的IFNα2b；(4)氨基酸序列为SEQ ID NO:10的特异性结合人OX40的抗体的重链和氨基酸序列为SEQ ID NO:11的特异性结合人OX40的抗体的轻链，其中所述轻链在其羧基端连接人干扰素，所述干扰素为如SEQ ID NO:9所示的IFNα2b；(5)氨基酸序列为SEQ ID NO:10的特异性结合人OX40的抗体的重链和氨基酸序列为SEQ ID NO:11的特异性结合人OX40的抗体的轻链，其中所述轻链通过肽接头在其羧基端连接人干扰素，所述肽接头为GGGGS，并且所述干扰素为如SEQ ID NO:9所示的IFNα2b；(6)氨基酸序列为SEQ ID NO:10的特异性结合人OX40的抗体的重链和氨基酸序列为SEQ ID NO:11的特异性结合人OX40的抗体的轻链，其中所述轻链通过肽接头在其羧基端连接人干扰素，所述肽接头为(GGGGS)2，并且所述干扰素为如SEQ ID NO:9所示的IFNα2b；(7)氨基酸序列为SEQ ID NO:13的特异性结合人OX40的抗体的重链和氨基酸序列为SEQ ID NO:11的特异性结合人OX40的抗体的轻链，其中所述轻链通过肽接头在其羧基端连接人干扰素，所述肽接头为GGGGS，并且所述干扰素为如SEQ ID NO:9所示的IFNα2b；(8)氨基酸序列为SEQ ID NO:13的特异性结合人OX40的抗体的重链和氨基酸序列为SEQ ID NO:11的特异性结合人OX40的抗体的轻链，其中所述轻链通过肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵勇，莫世甫，顾莉蕴，王志超，徐伟，丁栋，杨洁，
申请(专利权)人：南京优迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：