本发明专利技术涉及具有免疫佐剂作用的土贝母皂苷及其制备方法和作为疫苗佐剂的应用。该皂苷是从中药土贝母中制备的土贝母苷乙、土贝母苷丙或包含有这2种皂苷化合物的土贝母总皂苷，具有免疫佐剂作用，可诱生机体对抗原同时产生Th1型和Th2型免疫应答，显示出比现有技术中已知的铝胶佐剂产生更强的细胞免疫和体液免疫反应，可以作为疫苗的佐剂。该方法制备土贝母皂苷工艺简单、操作简便，产品收率和纯度高，避免使用第一、二类有机溶剂，无有害溶剂残留，安全性好、生产成本低。生产成本低。生产成本低。
【技术实现步骤摘要】
具有免疫佐剂作用的土贝母皂苷及其制备方法和用途
[0001]本专利技术涉及具有免疫佐剂作用的土贝母皂苷及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]疫苗接种是控制和预防传染病最经济、有效的措施[O
’
Hagan DT,Lodaya RN,Lofano G.The continued advance of vaccine adjuvants
–‘
we can work it out
’
.Semin.Immunol.2020,50,101426]。由于SARS
‑
CoV
‑
2等复杂病原体的流行，疫苗的开发面临着越来越大的挑战。佐剂是传统疫苗和新型疫苗必不可少的组成成分，不仅影响机体对疫苗免疫应答的强度，而且能针对特定病原体诱导最有效的免疫应答类型[Harandi AM.Systems analysis of human vaccine adjuvants.Semin.Immunol.2018,39,30
–
34；Rappuoli R,Hanon E.Sustainable vaccine development:a vaccine manufacturer
’
s perspective.Curr.Opin.Immunol.2018,53,111
–
118]。目前研究报道的免疫佐剂种类甚多，但由于存在毒副作用或安全隐患等不可避免的缺陷多难以实际应用[Del Giudice G,Rappuoli R,Didierlaurent AM.Correlates of adjuvanticity:A review on adjuvants in licensed vaccines.Semin.Immunol.2018,39,14
–
21；Shi S,Zhu H,Xia X,Liang Z,Ma X,Sun B.Vaccine adjuvants:Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.Vaccine 2019,37,3167
–
3178]。目前，铝胶、MF59、AS01、AS03和AS04是为数不多经欧盟或美国FDA批准应用于临床的疫苗佐剂。铝胶仍是疫苗生产中应用最广的佐剂，其存在一些问题：
⑴
主要通过诱导Th2型免疫应答产生抗体起保护作用，不能诱生Th1型免疫应答和细胞介导的免疫反应，只适用于以抗体为主要保护性免疫的疫苗；
⑵
对人免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、流感病毒、血吸虫病、百日咳和伤寒等多种抗原无佐剂作用；
⑶
促进IgE抗体产生，机体容易产生过敏反应；
⑷
局部反应，形成肉芽肿，甚至发生局部无菌性脓肿；
⑸
含铝胶的疫苗冷冻后，铝胶变性；
⑹
影响机体神经系统。随着新型疫苗应用的增多，对佐剂的需求越来越大，开发新型、高效、安全的佐剂对于增强疫苗的保护作用具有重要意义。
[0003]皂甙是一种天然糖苷化合物，被广泛研究用作疫苗的佐剂[Lacaille
‑
Dubois MA,Wagner H.New perspectives for natural triterpene glycosides as potential adjuvants.Phytomedicine 2017,37,49
‑
57.]。其中研究最多的是南美皂树(Quillaja saponaria Molina)树皮中的总皂苷
‑‑
Quil A及其活性成分QS
‑
21[Lacaille
‑
Dubois MA.Updated insights into the mechanism of action and clinical profile of the immunoadjuvant QS
‑
21:A review.Phytomedicine 2019,60,152905]。由于具有对外源性抗原既能刺激Th1免疫应答，又能诱导细胞毒性T淋巴细胞反应的独特特性，Quil A和QS
‑
21广泛用于治疗性癌症疫苗[Cebon JS,Gore M,Thompson JF,et al.Results of a randomized,double
‑
blind phase II clinical trial of NY
‑
ESO
‑
1vaccine with ISCOMATRIX adjuvant versus ISCOMATRIX alone in participants with high
‑
risk resected melanoma.J.Immunother.Cancer 2020,8,e0004108]以及细胞内病原体(如HIV、
结核病和疟疾)疫苗的临床试验[Van Der Meeren O,Hatherill M,Nduba V,et al.Phase 2b controlled trial of M72/AS01
E vaccine to prevent tuberculosis.New Engl.J.Med.2018,379,1621
–
1634]。然而，QS
‑
21具有严重的缺陷，
①
溶血性强、毒副作用大；
②
分子结构中均存在酰基，易水解，其去酰化水解产物失去诱导Th1型免疫应答及产生特异性CTL的能力，只能引发Th2型免疫应答；
③
南美皂树资源匮乏，含量低，分子量大，化学结构复杂，分离制备困难[Wang PF.Natural and synthetic saponins as vaccine adjuvants.Vaccines 2021,9,222]。事实上，QS
‑
21不是单一分子，而是两种异构体的混合物[Wang P,Devalankar DA,Dai Q,Zhang P,Michalek SM.Synthesis and evaluation of QS
‑
21
‑
based immunoadjuvants with a terminal
‑
functionalized side chain incorporated in the west wing trisaccharide.J.Org.Chem.2016,81,9560
‑
9566]。有必要进一步寻找高效、安全、稳定的皂苷佐剂[Pifferi C,Fuentes R,Fern
á
ndez
‑
Tejada A.Natural and 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.具有免疫佐剂作用的土贝母皂苷，其特征是，所述土贝母皂苷是从中药土贝母中制备的土贝母苷乙、土贝母苷丙或包含有这2种皂苷化合物的土贝母总皂苷。2.制备如权利要求1所述的土贝母皂苷的方法，其特征在于,包括以下步骤：a.土贝母药材粉碎，以乙醇提取；b.提取液减压回收乙醇、浓缩，得到醇提取物；c.醇提取物上大孔吸附树脂柱，以水和乙醇混合液进行梯度洗脱；d.硅胶薄层色谱检查，具有相同斑点的洗脱液合并，回收乙醇，浓缩，干燥，即得所述土贝母总皂苷；e.土贝母总皂苷经柱色谱或HPLC，以洗脱剂洗脱，得到所述土贝母苷乙和所述土贝母苷丙。3.根据权利要求2所述的土贝母皂苷的制备方法，其特征在于，所述步骤a采用加热回流提取、超声提取、微波提取、渗漉提取中的任一种；乙醇浓度5％
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95％。4.根据权利要求2所述的土贝母皂苷的制备方法，其特征在于，所述步骤b中醇提取物的密度为1...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙红祥，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：
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