【技术实现步骤摘要】
基于共享性引物探针检测基因多态性的试剂盒、方法及应用
本申请涉及基因检测领域，具体涉及一种基因多态性的PCR检测。技术背景目前用于检测基因多态性的方法主要有以下几种：测序分型法、高分辨率熔解曲线分型法、基因芯片分型法、TaqMan探针分型法和MGB探针分型法等。测序分型法是该领域检测的金标准，但受限于操作繁琐性和设备特殊性，没有广泛推广；而其余方法都是基于PCR扩增技术衍生而来，使用相对广泛。其中，测序分型法检测过程包含PCR扩增、测序，操作繁琐，检测时间一般长达4～5个小时，而且操作过程中需要打开PCR反应管，容易带来PCR产物的污染；高分辨率熔解曲线分型法的特征是利用多态性位点的碱基不同而带来的Tm值差别，通过识别不同的Tm值而进行检测，往往野生型和突变型位点的Tm值差别不到1℃，所以需要精准识别温度的设备，这类设备比较少，而且大多属于进口，价格昂贵；基因芯片分型法检测过程包含PCR扩增、探针杂交，操作繁琐，检测时间一般长达4～5个小时，而且操作过程中需要打开PCR反应管，容易带来PCR产物的污染；TaqMan探针分...
【技术保护点】
1.一种用于基因多态性检测的探针性ARMS引物制备方法，其特征在于，所述方法包括针对野生型位点和突变型位点同向设计野生型ARMS引物和突变型ARMS引物，所述野生型ARMS引物和突变型ARMS引物5′端最后一个碱基通过不同报告基团标记。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于基因多态性检测的探针性ARMS引物制备方法，其特征在于，所述方法包括针对野生型位点和突变型位点同向设计野生型ARMS引物和突变型ARMS引物，所述野生型ARMS引物和突变型ARMS引物5′端最后一个碱基通过不同报告基团标记。
2.权利要求1所述的用于基因多态性检测的探针性ARMS引物制备方法，其特征在于：所述方法进一步包括淬灭探针和下游引物的设计，所述淬灭探针是针对野生型探针性ARMS引物和突变型探针性ARMS引物设计互补核苷酸序列，并对互补核苷酸序列的3′端进行非荧光淬灭基团的标记；优选的，所述淬灭探针的碱基数比野生型探针性ARMS引物和突变型探针性ARMS引物碱基数少3-9个。
3.权利要求1-2任一所述的用于基因多态性检测的探针性ARMS引物制备方法，其特征在于：进一步包括野生型探针性ARMS引物和突变型探针性ARMS引物错配碱基的引入，所述错配碱基靠近野生型探针性ARMS引物和突变型探针性ARMS引物的3′端；优选的，所述野生型探针性ARMS引物和突变型探针性ARMS引物相同序列位置引入的错配碱基不同，不同序列位置引入的错配碱基可以相同，也可以不同；更优选的，所述错配碱基在野生型探针性ARMS引物和突变型探针性ARMS引物的3′端的第2-4个碱基上引入错配碱基，且所述野生型探针性ARMS引物和突变型探针性ARMS引物的Tm值为65～70℃。
4.权利要求1-3任一所述的用于基因多态性检测的探针性ARMS引物制备方法，其特征在于：所述基因多态性检测针对CYP2C19；优选的，针对CYP2C19*2、CYP2C19*3；更优选的，还针对CYP2C19*17。
5.权利要求4所述的用于基因多态性检测的探针性ARMS引物制备方法，其特征在于：所述CYP2C19*2的野生型探针性ARMS引物5′端标记FAM荧光基团，CYP2C19*2的突变型探针性ARMS引物5′端标记TET荧光基团，CYP2C19*2的淬灭探针3′端标记BHQ2淬灭基团；所述CYP2C19*3野生型探针性ARMS引物5′端标记ROX荧光基团，CYP2C19*3的突变型探针性ARMS引物5′端标记CY5荧光基团，CYP2C19*3的淬灭探针3′端标记BHQ2淬灭基团，所述CYP2C19*2的野生型探针性ARMS引物、突变型探针性ARMS引物、淬灭探针和下游引物核苷酸序列分别如SEQIDNO.1-4所示；所述CYP2C19*3的野生型探针性ARMS引物、突变型探针性ARMS引物、淬灭探针和下游引物核苷酸序列分别如SEQIDNO.5-8所示；优选的，所述CYP2C19*17野生型探针性ARMS引物5′端标记FAM荧光基团，CYP2C19*17的突变型探针性ARMS引物5′端标记TET荧光基团，CYP2C19*17的淬灭探针3′端标记BHQ2淬灭基团；所述CYP2C19*17的野生型探针性ARMS引物、突变型探针性ARMS引物、淬灭探针和下游引物序列分别如SEQIDNO.9-12所示。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：扶媛媛，周洋，苏正稳，曹彦东，王利，郝俊，杨颖，
申请(专利权)人：北京安智因生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。