用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用。该引物包括目标序列扩增区域和设置在目标序列扩增区域3’末端的封闭区域，封闭区域具有R(D)n1DsDsDx或R(D)n2DsDsMx所示结构，其中，R表示RNA碱基，D表示互补配对碱基，M表示错配碱基，n1和n2表示括号中D碱基的个数，n1为1或2，n2为2，s表示相邻的两个核苷酸之间的3’氧原子进行硫代修饰，x表示封闭修饰。最后三个碱基间的硫代连接防止末端带封闭修饰的碱基被酶切掉，故可采用高保真酶扩增，且既能保证扩增的准确性，又不产生非特异扩增和引物二聚体，从而提高了MSI状态检测的准确性。

Primers and kits for PCR amplification, methods and applications for detecting MSI status

【技术实现步骤摘要】
用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用
本专利技术涉及高通量测序检测领域，具体而言，是一种用于PCR扩增的引物、试剂盒、检测MSI状态的方法及应用。
技术介绍
在人类基因组中，广泛分布着许多短的(1-6个碱基)串联重复DNA序列，即微卫星序列(MicroSatellite，MS)。微卫星不稳定性(MicroSatelliteInstability，MSI)是指某一微卫星由于重复单位的插入或缺失而造成的微卫星长度的任何改变，出现新的微卫星等位基因现象。由于错配修复基因功能丧失，在细胞增殖的过程中，导致DNA复制时，这些序列常发生小范围的碱基缺失，插入或者替换不被修复状态。根据MSI不稳定性的程度，可分为微卫星高度不稳定型(MSI-H)、微卫星低度不稳定型(MSI-L)和微卫星稳定型(microsatellitestability，MSS)。传统的检测MS位点的稳定性主要是采用PCR扩增结合毛细管电泳的方法，由于这种方法检测的位点数量有限，一般只是检测6个常见位点，大于等于2个位点不稳定判断是微卫星高度不稳定型(MSI-H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于PCR扩增的引物，其特征在于，所述引物包括目标序列扩增区域和设置在所述目标序列扩增区域3’末端的封闭区域，所述封闭区域具有R(D)n1DsDsDx或R(D)n2DsDsMx所示结构，其中，R表示RNA碱基，D表示互补配对碱基，M表示错配碱基，n1和n2表示括号中D碱基的个数，n1为1或2，n2为2，s表示相邻的两个核苷酸之间的3’氧原子进行硫代修饰，x表示封闭修饰。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于PCR扩增的引物，其特征在于，所述引物包括目标序列扩增区域和设置在所述目标序列扩增区域3’末端的封闭区域，所述封闭区域具有R(D)n1DsDsDx或R(D)n2DsDsMx所示结构，其中，R表示RNA碱基，D表示互补配对碱基，M表示错配碱基，n1和n2表示括号中D碱基的个数，n1为1或2，n2为2，s表示相邻的两个核苷酸之间的3’氧原子进行硫代修饰，x表示封闭修饰。


2.根据权利要求1所述引物，其特征在于，所述封闭修饰选自如下任意一种：MGB修饰、C3间臂修饰，3’磷酸化修饰，3’地高辛修饰，3’生物素修饰及3’端的碱基为双脱氧碱基。


3.根据权利要求1或2所述的引物，其特征在于，所述引物为扩增以下位点的引物：






其中，a表示重复单元，b表示所述重复单元的重复次数。


4.根据权利要求3所述的引物，其特征在于，所述引物如SEQIDNO:70至SEQIDNO:207...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡玉刚，汪彪，郑文莉，吴强，
申请(专利权)人：纳昂达南京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32