一种犬血清中白蛋白的提纯方法技术

本发明专利技术公开了一种犬血清中白蛋白的提纯方法，通过乙醇两步法从犬血清中分离提纯白蛋白，其中，步骤S1采用温度≤‑20℃的低温乙醇法，步骤S2采用温度65～68℃的热乙醇法。本发明专利技术提供的犬血清中白蛋白的提纯方法，采用乙醇两步法即可获得高纯度的犬血白蛋白，是一种快速、简单、高纯度及高回收率的从犬血清中提纯白蛋白的工艺方法，可应用于犬白蛋白药物以及犬相关疾病治疗药物的制备，工艺方法简单，节约资源，成本低，适合规模化生产。

A purification method of albumin in dog serum

【技术实现步骤摘要】
一种犬血清中白蛋白的提纯方法
本专利技术涉及生物制品
，尤其涉及一种犬血清中白蛋白的提纯方法。
技术介绍
随着经济发展人民生活日益富足，越来越多的人们饲养宠物来陪伴自己和家人。犬是宠物种类中数量最多的，据不完全统计我国犬只数量多达1.2亿只。随着犬数量日益增多，犬疾病的发生在所难免，在犬病治疗过程中犬血白蛋白的使用是普遍和有效的，但市场中犬血白蛋白产品良莠不齐，存在着以次充好、以血清充当犬血白蛋白的情况。在人血白蛋白提纯工艺中，普遍采用低温乙醇五步或者七步法能够逐级地将人血浆中各种成分分离纯化出来，操作繁琐，步骤多，试剂消耗大，成本高，我们虽然可以借鉴人血白蛋白纯化的工艺，但犬血清中的白蛋白和球蛋白为主要用于制药的物质，而其他成分现还没能形成产品，故若一味地模仿人血白蛋白低温乙醇逐成分分离会造成资源浪费和成本的增加，进而人血白蛋白分离纯化方法不能适用于犬血白蛋白分离纯化，更不利于犬血白蛋白的市场化。因此，现急需一种快速、简单、高纯度及高回收率的从犬血清中提纯白蛋白的工艺方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种快速、简单的犬血清中白蛋白的提纯方法。为了实现上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：一种犬血清中白蛋白的提纯方法，通过乙醇两步法从犬血清中分离提纯白蛋白，其中，步骤S1采用温度≤-20℃的低温乙醇法，步骤S2采用温度65～68℃的热乙醇法，最终获得高纯度的犬血白蛋白。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，包括以下步骤：步骤S1、低温乙醇法将融化的血清，上清经澄清柱芯过滤后置于-8～-12℃环境中，pH值调至6.8～7.2，待温度降到10℃以下时，缓慢添加温度≤-20℃的95％乙醇，添加量为血清体积的25～30％，搅拌混匀后反应14～18h；搅拌均匀，离心，上清液即为犬血白蛋白粗提液；步骤S2、热乙醇法取步骤S1中的犬血白蛋白粗提液，加入氯化钠溶液，二者混合后氯化钠终浓度为0.85～0.92％(w/v)；在倒入辛酸钠粉末，使终浓度在0.75～0.85％(w/v)；pH值调至6.0～6.2，搅拌40～60分钟，即为水浴液；水浴液分装，密封，置于65～68℃水浴锅中水浴1小时以上；将水浴后液体置于-20℃中静置冷却12-16小时，即为冷却液；将冷却液用台式离心机5000g或以上离心力离心20-30分钟，收集上清；离心上清经500KDa超滤后，膜下液即为犬血白蛋白精纯原液。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，步骤S1中乙醇的添加量为血清体积的27％。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，步骤S1中反应时间为16小时。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，步骤S1中pH值调至7.0。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，步骤S2中氯化钠终浓度为0.9％(w/v)。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，步骤S2中辛酸钠终浓度在0.8％(w/v)。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，包括以下步骤：步骤S1、低温乙醇法将融化的血清进行16000rpm离心，上清经0.45um澄清柱芯过滤后置于-10℃环境中，pH值调至7.0，待温度降到10℃以下时，缓慢添加温度≤-20℃的95％乙醇，添加量为血清体积的27％，搅拌混匀后反应16h；搅拌均匀，经16000rpm离心，上清液即为犬血白蛋白粗提液；步骤S2、热乙醇法取步骤S1中的犬血白蛋白粗提液，加入氯化钠溶液，二者混合后氯化钠终浓度为0.9％(w/v)；再倒入辛酸钠粉末，使终浓度在0.8％(w/v)；pH值调至6.1，搅拌50分钟，即为水浴液；水浴液分装，密封，置于65～68℃水浴锅中水浴1小时以上；将水浴后液体置于-20℃中静置冷却14小时，即为冷却液；将冷却液用台式离心机5000g或以上离心力离心20分钟，收集上清；离心上清经500KDa超滤后，膜下液即为犬血白蛋白精纯原液。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，步骤S1或S2中采用pH值为4.0的HAC-NaAC缓冲溶液调节上清液pH值。优选地，上述的犬血清中白蛋白的提纯方法，步骤S2中使用40℃～55℃注射用水配制成浓度为0.71M升的氯化钠溶液。与现有技术相比，本专利技术的技术效果：本专利技术提供的犬血清中白蛋白的提纯方法，采用乙醇两步法即低温乙醇法+高温乙醇法，即可获得高纯度(≥95％)的犬血白蛋白，是一种快速、简单、高纯度及高回收率的从犬血清中提纯白蛋白的工艺方法，可应用于犬白蛋白药物以及犬相关疾病治疗药物的制备，工艺方法简单，节约资源，成本低，适合规模化生产。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1提供的SDS-PAGE结果；其中，泳道1：蛋白Marker，泳道2：白蛋白浓缩液，泳道3：球蛋白。图2为本专利技术对比例1提供的SDS-PAGE结果；泳道1：预染蛋白Marker(ThermoFisher#26616)；泳道2：犬血清；泳道3：水浴离心上清液；泳道4：水浴离心沉淀；泳道5：500KDa超滤膜下液；泳道8：低温乙醇法超滤膜下液；泳道9：10KDa浓缩液。图3为本专利技术对比例2提供的SDS-PAGE结果；泳道1：蛋白Marker；泳道2：犬血清；泳道3：20％乙醇上清；泳道5：20％乙醇水浴离心上清；泳道6：20％乙醇水浴离心沉淀；泳道8：20％乙醇水浴离心上清超滤浓缩液。具体实施方式本专利技术的犬血清中白蛋白的提纯方法，通过乙醇两步法从犬血清中分离提纯白蛋白，其中，步骤S1采用温度≤-20℃的低温乙醇法，步骤S2采用温度65～68℃的热乙醇法，最终获得高纯度的犬血白蛋白。具体地，包括以下步骤：步骤S1、低温乙醇法将融化的血清离心，上清经澄清柱芯过滤后置于-8～-12℃环境中，pH值调至6.8～7.2，优选7.0；待温度降到10℃以下时，缓慢添加温度≤-20℃的95％乙醇，添加量为血清体积的25～30％，优选27％；搅拌混匀后反应14～18h，优选16小时；搅拌均匀，离心，上清液即为犬血白蛋白粗提液；步骤S2、热乙醇法取步骤S1中的犬血白蛋白粗提液，加入氯化钠溶液，二者混合后氯化钠终浓度为0.85～0.92％(w/v)；在倒入辛酸钠粉末，使终浓度在0.75～0.85％(w/v)；pH值调至6.0～6.2，优选6.1，搅拌40～60分钟，即为水浴液；水浴液分装，密封，置于65～68℃水浴锅中水浴1小时以上，优选66℃，水浴2小时；将水浴后液体置于-20℃中静置冷却12-16小时，即为冷却液；将冷却液用台式离心机5000g或以上离心力离心20-30分钟，收集上清；离心上清经500KDa超滤后，膜下液即为犬血白蛋白精纯原液。其中，本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种犬血清中白蛋白的提纯方法，其特征在于，通过乙醇两步法从犬血清中分离提纯白蛋白，其中，步骤S1采用温度≤-20℃的低温乙醇法，步骤S2采用温度65～68℃的热乙醇法，最终获得高纯度的犬血白蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种犬血清中白蛋白的提纯方法，其特征在于，通过乙醇两步法从犬血清中分离提纯白蛋白，其中，步骤S1采用温度≤-20℃的低温乙醇法，步骤S2采用温度65～68℃的热乙醇法，最终获得高纯度的犬血白蛋白。


2.根据权利要求1所述的犬血清中白蛋白的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1、低温乙醇法
将融化的血清离心，上清经澄清柱芯过滤后置于-8～-12℃环境中，pH值调至6.8～7.2，待温度降到10℃以下时，缓慢添加温度≤-20℃的95％乙醇，添加量为血清体积的25～30％，搅拌混匀后反应14～18h；搅拌均匀，离心，上清液即为犬血白蛋白粗提液；
步骤S2、热乙醇法
取步骤S1中的犬血白蛋白粗提液，加入氯化钠溶液，二者混合后氯化钠终浓度为0.85～0.92％(w/v)；在倒入辛酸钠粉末，使终浓度在0.75～0.85％(w/v)；pH值调至6.0～6.2，搅拌40～60分钟，即为水浴液；水浴液分装，密封，置于65～68℃水浴锅中水浴1小时以上；将水浴后液体置于-20℃中静置冷却12-16小时，即为冷却液；将冷却液用台式离心机5000g或以上离心力离心20-30分钟，收集上清；离心上清经500KDa超滤后，膜下液即为犬血白蛋白精纯原液。


3.根据权利要求1或2所述的犬血清中白蛋白的提纯方法，其特征在于，步骤S1中乙醇的添加量为血清体积的27％。


4.根据权利要求1或2所述的犬血清中白蛋白的提纯方法，其特征在于，步骤S1中反应时间为16小时。


5.根据权利要求2所述的犬血清中白蛋白的提纯方法，其特征在于，步骤S1中pH值调至7....

【专利技术属性】
技术研发人员：石晶，赵健，陈宪平，陈放，付玉，侯强，董鹏，殷玉和，
申请(专利权)人：长春西诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22