女性黄体功能快速无创监测技术制造技术

本发明专利技术涉及女性生育能力无创监测技术，具体而言，涉及一种全定量或半定量的快速无创尿检技术来测定女性尿中孕酮代谢物的周期生成量，以此来监测和评估女性黄体功能、判断不同排卵周期类型、确定是否真正排卵及排卵后能否受孕。本发明专利技术的第一实施方案，涉及一种用于测定孕二醇葡糖苷酸的蛋白杂交偶联体，包含孕二醇葡糖苷酸和偶联蛋白，其特征在于，还包含连接两者的连接物。本发明专利技术的激素蛋白偶联体用不饱和标记抗体检测PdG，其灵敏度可达0.1ng/ml，线性范围可控制在0.1‑50ng/ml之间。

Rapid and noninvasive monitoring of luteal function in women

The invention relates to a non-invasive monitoring technology for female fertility, in particular to a full quantitative or semi quantitative rapid non-invasive urine detection technology to determine the periodic production of progesterone metabolites in female urine, so as to monitor and evaluate the function of female corpus luteum, judge different ovulation cycle types, determine whether ovulation is real and whether pregnancy can be achieved after ovulation. The first embodiment of the invention relates to a protein hybridized couple for the determination of progesterone glucoside acid, which comprises progesterone glucoside acid and coupling protein, and is characterized in that it also comprises a connector connecting the two. The hormone protein coupling of the invention detects PDG with unsaturated labeled antibody, the sensitivity can reach 0.1ng/ml, and the linear range can be controlled between 0.1 \u2011 50NG / ml.

【技术实现步骤摘要】
女性黄体功能快速无创监测技术本申请是2015年4月17日申请的名称为“女性黄体功能快速无创监测技术”，申请号为201510185202.2的中国专利申请的分案申请。
本专利技术涉及女性生育能力无创监测技术，具体而言，涉及一种全定量或半定量的快速无创尿检技术来测定女性尿中孕酮代谢物的周期生成量，以此来监测和评估女性黄体功能、判断不同排卵周期类型、确定是否真正排卵及排卵后能否受孕。
技术介绍
据2012年《中国不孕不育现状调研报告》显示，中国不孕不育率高达12.5％，女方原因占50％以上。人数超过5000万。不孕不育治疗失败的患者占66％，其中98.9％是因没有及时准确检测而造成的。因此，专利技术一种无创、价廉、医院及家庭易用的女性黄体功能监测技术，特别适用于中国优生优育的需要。在月经周期开始时，每个卵巢中大约有15-20卵子开始成熟。装有卵子的卵泡产生雌激素。最终，一个卵泡占优势地位并继续不断成熟，而其余的卵泡开始瓦解。该优势卵泡的雌激素水平在排卵前几天大幅上升，直到达到临界水平。这种高雌激素水平，触发了另一种激素称为促黄体激素(LH)的激增。触发排卵，导致卵子从卵巢释放。标志着排卵周期的结束。月经周期中先后出现的雌激素和LH峰与卵巢排卵时间具有密切关系。一旦雌激素或LH峰的出现，排卵通常会发生在未来12-48小时内。因此，在月经周期中监测雌激素或LH峰值，可以用来确定最佳受孕时间，或需要釆取避孕措施的时间。在排卵前，雌激素峰和LH峰的出现并不能确认排卵实际发生，因为雌激素激增和LH释放高峰并不总是导致排卵。即使有了真正的排卵，但由于卵后黃体期不足或黄体期短，而导致不孕。这种有排卵但不能受孕的现象，是目前妇女中不孕最常见的原因。目前市场上的商品化检验仅局限于激素血检或LH尿检，由于激素血检需大型仪器，既不方便，而且检查结果对于不孕症的诊断，又无统一标准。而LH尿检(包括昆明云南大学的CN00112779.9专利、甘肃兰州大学的CN200610200333专利、以及武汉璟泓万方堂的CN20110072240.9专利)则主要应用于排卵期的初步估测。因此，至今为止，国内外还没有一种方便易用的商品化不孕不育体外无创诊断产品，用来定量监测女性黄体功能、确定有无排卵、排卵后能否受孕、以及相关的女性生育力和激素不孕症。
技术实现思路
本专利技术的目的是，根据排卵期间女性尿中激素孕酮生成量与排卵和受孕的密切关系，来测定排卵后孕酮尿代谢物-孕二醇葡糖苷酸(pregnanediolglucuronidePdG)的生成量，从而提供一种医院、家庭及个人进行全定量或半定量、价廉方便的免疫分析方法及检测试剂盒。以排卵期为参考点，通过定量测定排卵后6天内尿中PdG的浓度，来监测黄体功能的变化，从而核实有无真实排卵和排卵后能否受孕。(1)当孕二醇值<2.0mg/24h时，表明无排卵或黃素化不破裂卵泡(luteinizedunrupturedfollicle，LUF)。(2)如果孕二醇值在2.0-3.0mg/24h之间时，表示有排卵，但排卵后黄体期不足或短，不能受孕。(3)只有当孕二醇值>3.0mg/24h时，该周期才是具有完全生育力的排卵周期。因此，排卵后6天内孕二醇值超过3.0mg/24h是女性具有完全生育力和能正常受孕的判断标准。如果用排卵后6天内孕二醇值是否超过3.0mg/24h作为标准，本专利技术也可用定性免疫分析如胶体金半定量免疫试剂条，来确定女性是否具有完全生育力能正常受孕(>3.0mg/24h)或患有不孕症(≤3.0mg/24h)。本专利技术通过将孕二醇葡糖苷酸通过连接物(linker)与偶联蛋白连接起来形成孕二醇葡糖苷酸的蛋白杂交偶联体，并测定孕二醇葡糖苷酸的蛋白杂交偶联体，来监测黄体功能的变化，从而核实有无真实排卵和排卵后能否受孕。本专利技术连接物分为疏水性(如简单非弹性碳链)和亲水性(如含氧、硫、氮等的杂原子的弹性碳链)，其长度为1-100个碳原子，优选5-25个碳原子，更优选6-20个碳原子，最优选6-18个碳原子，其中一个或多个碳原子可以被选自氧、硫、氮等的杂原子取代。尽管，连接物的长短和它的亲水性或疏水性能，同时以不同方式、不同程度地影响着免疫分析的灵敏度和特异性。但两者之间的关系至今尚无系统地研究，更没有报道就如何有效利用连接物长短及亲水性/疏水性能，来为免疫分析的商业应用如免疫分析试剂盒的开发应用，进行合理地设计。本专利技术通过改变连接物的亲疏水性及链的长短，可以控制孕二醇葡糖苷酸在偶联蛋白上的连接数量，也就调节了孕二醇葡糖苷酸在试剂条检测线上的密度，即密度越高，线性范围越宽，密度越低，灵敏度越好。同时，碳链的长短和类型也影响孕二醇葡糖苷酸-偶联蛋白杂交偶联体与抗体的结合好坏，可有效避免与抗体的非特异性结合，而且适当长的碳链可以减少和抗体结合的立体位阻。本专利技术的第一实施方案，涉及一种用于测定孕二醇葡糖苷酸的蛋白杂交偶联体，包含孕二醇葡糖苷酸和偶联蛋白，其特征在于，还包含连接两者的连接物。本专利技术的第二实施方案，涉及第一实施方案的偶联体，其特征在于，所述连接物为包含1-100个碳原子，优选5-25个碳原子，更优选6-20个碳原子，最优选6-18个碳原子的直链或支链基团。本专利技术的第三实施方案，涉及第二实施方案的偶联体，其特征在于，所述连接物的一个或多个碳原子被杂原子取代。本专利技术的第四实施方案，涉及第三实施方案的偶联体，其特征在于，所述杂原子选自氧、氮和硫。本专利技术的第五实施方案，涉及第一到第四实施方案中任一项的偶联体，其特征在于，所述偶联蛋白选自卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)、血蓝蛋白(KLH)。本专利技术的第六实施方案，涉及第一到第四实施方案中任一项的偶联体，所述偶联体选自：(1)孕二醇葡糖苷酸--6原子碳链--卵清蛋白偶联体(2)孕二醇葡糖苷酸--13原子碳链--卵清蛋白偶联体(3)孕二醇葡糖苷酸--20原子碳链--卵清蛋白偶联体(4)孕二醇葡糖苷酸--18原子碳链--卵清蛋白偶联体。本专利技术的第七实施方案，涉及第一到第四实施方案中任一项的偶联体，其特征在于，所述孕二醇葡糖苷酸与连接物和偶联蛋白比例为1：1至100：1。本专利技术的第八实施方案，涉及一种用于检测孕二醇葡糖苷酸的试剂盒，所述试剂盒包含本专利技术的第一到第七实施方案中任一项的蛋白杂交偶联体，其特征在于，还包含与所述蛋白杂交偶联体特异性结合的抗体。本专利技术的第九实施方案，涉及第八实施方案的试剂盒，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。本专利技术的第十实施方案，涉及第九实施方案的试剂盒，其特征在于，还含有与所述抗体连接的可检测标记物。本专利技术的第十一实施方案，涉及第九实施方案的试剂盒，其特征在于，还含有与所述抗体特异性结合的第二抗体。本专利技术的第十二实施方案，涉及第十一实施方案的试剂盒，其特征在于，所述抗体与第二抗体的比例为1：2至2：1。本专利技术的第十三实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于测定孕二醇葡糖苷酸的蛋白杂交偶联体，包含孕二醇葡糖苷酸和偶联蛋白以及连接两者的连接物，其特征在于，所述连接物包含聚乙二醇。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于测定孕二醇葡糖苷酸的蛋白杂交偶联体，包含孕二醇葡糖苷酸和偶联蛋白以及连接两者的连接物，其特征在于，所述连接物包含聚乙二醇。


2.如权利要求1所述的偶联体，其特征在于，所述连接物为包含1-100个碳原子，优选6-25个碳原子，更优选6-20个碳原子，最优选6-18个碳原子的直链或支链基团。


3.如权利要求2所述的偶联体，其特征在于，所述连接物中的一个或多个碳原子被选自氧、氮和硫的杂原子取代。


4.如权利要求1所述的偶联体，其特征在于，所述聚乙二醇选自二乙二醇、三乙二醇、四乙二醇。


5.如权利要求1-4中任一项所述的偶联体，其特征在于，所述偶联蛋白选自卵清蛋白、牛血清白蛋白、血蓝蛋白。


6.如权利要求1-4中任一项所述的偶联体，选自：



(1)孕二醇葡糖苷酸--6原子碳链--卵清蛋白偶联体；



(2)孕二醇葡糖苷酸--13原子碳链--卵清蛋白偶联体；



(3)孕二醇葡糖苷酸--20原子碳链--卵清蛋白偶联体；和



(4)孕二醇葡糖苷酸--18原子碳链--卵清蛋白偶联体。


7.如权利要求1-4中任一项所述的偶联体，其特征在于，所述孕二醇葡糖苷酸与连接物和偶联蛋白比例为1：1至100：1。


8.一种用于...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾泳川，吴银秋，
申请(专利权)人：南京济朗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32