一种子宫内膜干细胞制剂及其应用制造技术

本申请属于再生医学和生物学技术领域，具体涉及一种子宫内膜干细胞制剂及其应用。本发明专利技术所提供的子宫内膜干细胞制剂包含：子宫内膜干细胞、西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1，选用子宫内膜干细胞作为干细胞来源，取材方便，无创伤性，无伦理限制；子宫内膜干细胞和西洋参皂苷发挥协同作用，有效抑制了卵巢早衰，大大的缩短组织修复时间。本发明专利技术还提供了上述子宫内膜干细胞制剂在制备治疗卵巢早衰药物中的应用。

Endometrial stem cell preparation and application thereof

The utility model belongs to the technical field of regenerative medicine and biology, in particular to a endometrial stem cell preparation and the application thereof. The present invention provides endometrial stem cell preparation includes endometrial stem cells, ginseng saponin L1 and ginseng saponin R1, the endometrial stem cells as a source of stem cells, convenient, non-invasive, no ethical restrictions; endometrial stem cells and the synergistic effect of Panax quinquefolium saponins, effectively inhibit premature ovarian failure the organization, greatly shorten the repair time. The invention also provides the application of the above mentioned endometrial stem cell preparation in the preparation of medicine for treating premature ovarian failure.

【技术实现步骤摘要】
一种子宫内膜干细胞制剂及其应用
本专利技术属于再生医学和生物学
，具体涉及一种子宫内膜干细胞制剂及其应用。
技术介绍
卵巢早衰(prematureovarianfailure,POF)是指40岁前月经己形成规律的女性，由于卵巢功能衰退而出现月经不调、闭经、性器官萎缩等症状，而且常伴随着促性腺激素水平的上升和雌激素水平的下降。卵巢早衰是妇产科临床工作中的常见病和多发病，已经成为当今妇女不孕症的最主要病因。目前，主要通过激素治疗和免疫治疗等方法恢复卵巢功能，然而上述方法只能暂时地缓解症状，不能有效促进自身损伤卵巢组织的再生修复，无法根治疾病。通过注射骨髓间充质干细胞替代药物治疗和手术治疗，是近年来临床应用中用来治疗卵巢早衰的新手段。然而骨髓间充质干细胞必须通过骨髓穿刺才能获取，不仅取样困难，而且容易给患者造成一定的身体损伤，阻碍了健康人群捐献骨髓的意愿。另外，骨髓中骨髓间充质干细胞的含量非常稀少，增殖能力较低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种子宫内膜干细胞制剂，应用于制备治疗卵巢早衰的药物，干细胞来源方便、无创伤性。本专利技术的具体技术方案如下：本专利技术提供了一种子宫内膜干细胞制剂，包含：子宫内膜干细胞、西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1。子宫内膜干细胞(endometrialstemcells,EnSCs)是一种成体干细胞，具有自我更新、多向分化和高度增殖的潜能，致癌风险低，受伦理学争议少。子宫内膜干细胞具有与BMMSCs相似的生物学特性，均表达CD29、CD44、CD73和CD90等间充质干细胞特异的表面标志，不表达CD14、CD34、CD45、CD133和Stro-1等内皮细胞、造血干细胞表面标志，不表达MHC-I，少量表达MHC-II，不表达或极少表达HLA-DR，说明EnSCs具有较低免疫原性。EnSCs可从经血中无创获取，增殖速度快，传代稳定，免疫原性低，具有较强的旁分泌能力。优选的，所述子宫内膜干细胞的浓度为1.0×106～5.0×106个/mL。西洋参总皂苷对中枢神经系统、心血管系统、消化系统、免疫系统、内分泌系统和泌尿生殖系统有广泛的作用，具有抗心肌缺血和保护心肌、抗心律失常、抑制衰老凋亡和抗炎作用。优选的，所述西洋参皂苷L1的浓度为0.1～5mg/mL，更优选为0.5～3mg/L，最优选为1mg/mL。优选的，所述西洋参皂苷R1的浓度为0.1～5mg/mL，更优选为0.5～3mg/L，最优选为1mg/mL。优选的，所述子宫内膜干细胞制剂还包含：生理盐水。本专利技术还提供了一种上述子宫内膜干细胞制剂的制备方法，将子宫内膜干细胞、西洋参皂苷L1、西洋参皂苷R1和生理盐水混合，得到所述子宫内膜干细胞制剂。本专利技术还提供了上述子宫内膜干细胞制剂或上述制备方法得到的子宫内膜干细胞制剂在制备治疗卵巢早衰药物中的应用。优选的，所述子宫内膜干细胞制剂为注射制剂。与现有技术相比，本专利技术的子宫内膜干细胞制剂具有以下优点：1)本专利技术选用子宫内膜干细胞作为干细胞来源，取材方便，无创伤性，无伦理限制；而且所述子宫内膜干细胞制剂免疫原性低，可避免免疫排斥，安全可靠；2)本专利技术子宫内膜干细胞制剂还包含西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1，西洋参皂苷可直接增强衰老细胞的抗逆能力，子宫内膜干细胞通过旁分泌作用修复卵巢早衰组织，西洋参皂苷和子宫内膜干细胞协同作用，有效抑制了卵巢早衰，大大的缩短组织修复时间；3)本专利技术制剂选用生理盐水作为溶剂，其渗透压与人体的渗透压一致，可避免损伤卵巢组织，低温保存下其生物活性稳定；4)本专利技术子宫内膜干细胞制剂为注射制剂，可避免血液流动而造成制剂的损失；5)本专利技术制剂的制备步骤简单，耗时短，可实现规模化生产。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1为各组卵巢组织切片的卵泡数量结果。具体实施方式通过选用子宫内膜干细胞替代骨髓干细胞，同时优化制剂中的组成成分，本专利技术提供了一种子宫内膜干细胞制剂，应用于制备治疗卵巢早衰的药物，干细胞存活率稳定、来源方便、无创伤性，而且制剂的制备时间短、效率高。本专利技术对子宫内膜干细胞、西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1的来源不作特殊限定，采用本领域技术人员所熟知的常规的子宫内膜干细胞、西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1即可，或采用本领域技术人员所熟知的常规技术进行制备得到的子宫内膜干细胞、西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1。下面将结合本专利技术具体实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例只是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。本领域技术人员应当理解，对本专利技术的具体实施例进行修改或者对部分技术特征进行同等替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神，均应涵盖在本专利技术保护的范围中。以下实施例中，所采用的西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1来源于陕西慧科植物开发有限公司。实施例1子宫内膜干细胞的制备1、经咨询同意后，根据经血采集套装(杭州易文赛，S-Evansbiosciences)说明书收集健康女性的经血样品；然后将这些样品转移至含有双抗(青霉素/链霉素)和肝素的磷酸盐缓冲液中，4℃条件下保存，24h～48h之内将样品送往实验室离心；接着取上清液并在无菌条件下快速检测是否存在细菌污染，若为阴性则继续分离培养并鉴定，表1为子宫内膜干细胞的流式鉴定结果。其中，子宫内膜干细胞的分离培养及鉴定过程请参考下列文献：周华,宋丽娜,张敏.人子宫内膜干细胞体外分离、培养及鉴定.中华中医药学刊[J].2014.32(8):1907-1908。表1CD73CD90CD105CD11bCD19CD34CD45HLA-DR表达量98.4％97.5％99.3％1.8％1.2％1.0％0.4％1.4％实施例2(1)配方：子宫内膜干细胞2.5×106个/mL；西洋参皂苷L11mg/mL；西洋参皂苷R11mg/mL；生理盐水补足。(2)制备：1)将西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1采用生理盐水进行溶解，得到西洋参皂苷溶液；其中，西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1的浓度均为1mg/mL；2)采用步骤1)得到的西洋参皂苷溶液重悬实施例1中得到的子宫内膜干细胞，得到所述子宫内膜干细胞制剂，其中子宫内膜干细胞的浓度为2.5×106个/mL；3)把步骤2)得到的子宫内膜干细胞制剂分装至注射器中，然后放到无菌的空盒里，把转有制剂的空盒转移至已放有冰袋的保存箱中，于0～4℃下进行保存。实施例3子宫内膜干细胞1×106个/mL；西洋参皂苷L10.3mg/mL；西洋参皂苷R10.3mg/mL；生理盐水补足。实施例4子宫内膜干细胞5×106个/mL；西洋参皂苷L13mg/mL；西洋参皂苷R13mg/mL；生理盐水补足。实施例51、选用广州中医药大学实验动物部提供的2-3月龄、体重200±20g、具有正常动情周期的wistar雌性大鼠120只，适应性饲养1周后，随机分为4组，依次为对照组1、对照组2、对照组3和实验组，每组各30只。构建大鼠卵巢早衰模型：一次性腹腔注射环磷酰胺溶液(120mg/kg)和白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种子宫内膜干细胞制剂，包含：子宫内膜干细胞、西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1。

【技术特征摘要】
1.一种子宫内膜干细胞制剂，包含：子宫内膜干细胞、西洋参皂苷L1和西洋参皂苷R1。2.根据权利要求1所述的子宫内膜干细胞制剂，其特征在于，所述子宫内膜干细胞的浓度为1.0×106～5.0×106个/mL。3.根据权利要求1所述的子宫内膜干细胞制剂，其特征在于，所述西洋参皂苷L1的浓度为0.1～5mg/mL。4.根据权利要求1所述的子宫内膜干细胞制剂，其特征在于，所述西洋参皂苷R1的浓度为0.1～5mg/mL。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：马颖，马铎，陈祥，
申请(专利权)人：广州资生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44