间充质干细胞群、其产物及其用途制造技术

本发明专利技术提供了药物组合物和使用其治疗疾病或障碍的方法，所述药物组合物包含间充质基质细胞(MSC)群、从所述MSC群分泌的胞外囊泡及其组合。

Mesenchymal stem cell population, its products and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】间充质干细胞群、其产物及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2016年11月3日提交的美国临时专利申请号62/416,821的优先权权益。上述申请的内容全部通过引用并入，如同其整体在本文中被完全阐述。
本专利技术涉及具体的间充质干细胞群、其分泌的胞外囊泡和其它产物以及其用于治疗对象的疾病的用途。
技术介绍
间充质基质细胞——也称为间充质干细胞(MSC)——是可容易在体外条件下操作的一类成体干细胞。存在于早期胚胎阶段的干细胞是多潜能的，而MSC呈现较有限的可塑性，主要分化成成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞(中胚层细胞)，以及在某种程度上还分化成骨骼肌和内皮细胞。MSC存在于骨髓和脂肪组织中，并且也存在于外周血、胎盘、脐带血、牙髓和其它组织中。MSC是细胞疗法和操作的引人注意的候选者，因为其可以容易地从患者自身的组织如骨髓、脂肪组织或牙髓分离，在体外培养，和自体移植到患者体内。另外，MSC也可以从诸如脐带和胎盘Wharton胶质的组织获得，并用于同种异体移植。MHC(特别是衍生自脐带和胎盘的那些)中MHC-II的表达相对低或不存在，这允许其使用伴有最低限度的移植细胞免疫排斥相关并发症和困难。MSC的特征在于高迁移潜力，并且结合其可塑性，其可作为靶向治疗应用和组织再生的理想工具。MSC具有响应由发炎和受损组织以及肿瘤产生的信号而迁移的能力。因此，MSC自然地迁移到患病对象的疾患区域。然而，关于MSC在其到达肿瘤部位后是具有促肿瘤作用还是抗肿瘤作用存在很大的争议。在一些模型中，MSC抑制肿瘤生长(例如肺癌、B16黑素瘤)，而在其它模型中其被报道增强肿瘤生长(例如多发性骨髓瘤、乳腺癌)。这些区别效果取决于MSC的组织来源、肿瘤类型，并且这些差别效果涉及的因素还未被鉴定。理解MSC-肿瘤的相互干扰(crosstalk)可以提供关于MSC对肿瘤行为的影响的重要信息，并且可对用于治疗各种疾病的MSC来源选择具有重要意义。因此，MSC的不同来源和群体的分泌组(secretome)和各种组学分析对于理解MSC在健康个体中以及在损伤或肿瘤存在的情况下诱导免疫调节和再生能力的能力是至关重要的。MSC的分泌组和组学分析的表征可有助于确定其相容性和潜力——一方面治疗和再生潜力以及另一方面促肿瘤或抗肿瘤作用。细胞之间的通信通过直接的细胞与细胞接触或通过可溶性因子的分泌而进行。然而，基于胞外载体(EV)的释放和摄取，最近出现了可以短距离和长距离操作的新机制。胞外囊泡是膜衍生的胞外囊泡，其可分为三大类：外来体、微胞外囊泡和凋落小体。外来体是具有50-100nm尺寸的内吞起源的小型膜胞外囊泡。其可以含有从供体到受体细胞穿梭的微RNA(miRNA)、长非编码RNA(lncRNA)、mRNA、DNA片段和蛋白质。外来体似乎在肿瘤微环境中的信息交换中发挥重要作用，因为已经显示其介导癌细胞之间的致癌蛋白质的转移。另一方面，也已显示外来体编程免疫系统以引发抗肿瘤反应。除了其在细胞-细胞相互作用中的天然作用外，外来体还可以装载有各种药物和外源核酸或蛋白质，并将这种货物(cargo)递送到不同的细胞。对于包括RNA系疗法的各种疗法，外来体相对于现有递送载体具有多种优势。由于其可以衍生自患者自身的细胞，其免疫原性将低于任何外源递送载体。更重要地，外来体是miRNA和其它非编码RNA的天然载体，并且与靶细胞的直接膜融合允许内容物被直接递送到胞质溶胶中。这使得外来体成为用于小分子的优越递送系统。miRNA通过部分序列同源性诱导基因沉默，因此单个miRNA可具有数百个靶标。miRNA作为癌基因和/或肿瘤抑制子(suppressor)的作用取决于其mRNA靶标。miRNA通过外来体分泌，并通过介导相邻或远距离细胞中的mRNA抑制而在细胞内通信中发挥重要作用。进一步，多种类型的肿瘤中异常表达的miRNA已经被描述。已经关于肿瘤发生、患者预后和作为新型治疗靶标研究了miRNA的表达和功能。使用miRNA治疗癌症最具吸引力的优势是其能够影响网络环境中的多个靶基因，使得其特别适于治疗神经胶质瘤，因为神经胶质瘤是一种复杂的异质性肿瘤。此外，若干体外和临床前研究证明了靶向miRNA的治疗益处。除了miRNA，人类基因组还表达数万种长非编码RNA(lncRNA)。这些非编码RNA的长度>200个碱基，但缺乏显著的开放阅读框。lncRNA呈现各种各样的转录模式，呈现组织特异性并在生理和病理条件下的各种细胞过程中发挥重要功能。仍然需要识别、分离和/或调整(tailoring)特定MSC群和治疗效果的方法。这些细胞的miRNA、lncRNA和蛋白质特征及其分泌组提供了信息，允许更知识化的靶向和特异性MSC疗法用于多种疾病。
技术实现思路
本专利技术提供了包含间充质干细胞(MSC)的不同来源和亚群和/或从所述MSC分泌的胞外囊泡的组合物、包含其的试剂盒及其治疗用途。本专利技术进一步涉及用具有本文公开的独特表达谱的MSC以及用从所述MSC分泌的胞外囊泡治疗各种疾病或状况。根据第一方面，提供了治疗有此需要的对象的疾病或状况的方法，该方法包括：(a)提供富集绒毛膜胎盘衍生间充质干细胞(CH-MSC)群；和(b)向对象给予药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的下列至少一种：i.CH-MSC群；ii.衍生自CH-MSC群的胞外囊泡；iii.来自CH-MSC群的条件培养基；和iv.由CH-MSC群分泌的胞外基质；从而治疗疾病或状况。根据另一方面，提供了选择间充质干细胞(enrichedpopulationofchorionicplacenta-derivedmesenchymalstemcells，MSC)亚群的方法，该方法包括：(a)提供MSC；和(b)选择至少一种MSC，所述至少一种MSC在所述至少一种MSC的表面上表达至少一种表面标志物，其中CD184、CD193、CD235a、CD318、CD255、CD268、fMLP、ITGA2、ITGA4、和CD326中的至少一种的表达表明MSC是脐带衍生的MSC，TCRα-β、CD55、LIFR、ST6GALNACS和MICA/B中的至少一种的表达表明MSC是绒毛膜胎盘衍生的MSC，CD24、CD48、CD66b、CD338、CD120b、CD268、FGFLR1、ITGA5、NES和PDGFRAA中的至少一种的表达表明MSC是骨髓衍生的MSC，CD84、PDGFRBB、和TNFRSF11B中的至少一种的表达表明MSC是脂肪衍生的MSC，以及CD157的表达表明MSC是羊膜胎盘衍生的MSC；从而选择MSC亚群。根据另一方面，提供了用于治疗疾病或状况的药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的佐剂、赋形剂或载体和下列至少一种：(a)分离和富集的CH-MSC群；(b)衍生自CH-MSC群的胞外囊泡；(c)来自CH-MSC群的条件培养基；和(d)由CH-MSC群分泌的胞外基质。根据另一方面，提供了维持培养中的干细胞和原代细胞的方法，该方法包括，(a)提供干细胞、原代细胞或两者；(b)在包含衍生自MSC的胞外囊泡的培养基中使干细胞、原代细胞或两者生长，从而维持培养中的干细胞、原代细胞或两者。根据一些实施方式，疾病或状况选自神经疾病、肌肉疾病、自身免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.治疗有此需要的对象的疾病或状况的方法，所述方法包括：(a)提供富集的绒毛膜胎盘衍生间充质干细胞(CH‑MSC)群；和(b)向所述对象给予药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的下列至少一种：i.所述CH‑MSC群；ii.衍生自所述CH‑MSC群的胞外囊泡；iii.来自所述CH‑MSC群的条件培养基；和iv.由所述CH‑MSC群分泌的胞外基质；从而治疗所述疾病或状况。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.03 US 62/416,8211.治疗有此需要的对象的疾病或状况的方法，所述方法包括：(a)提供富集的绒毛膜胎盘衍生间充质干细胞(CH-MSC)群；和(b)向所述对象给予药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的下列至少一种：i.所述CH-MSC群；ii.衍生自所述CH-MSC群的胞外囊泡；iii.来自所述CH-MSC群的条件培养基；和iv.由所述CH-MSC群分泌的胞外基质；从而治疗所述疾病或状况。2.权利要求1所述的方法，其中所述疾病或状况选自神经疾病、肌肉疾病、自身免疫疾病、炎性疾病、消化疾病、能量稳态疾病、纤维化疾病、老化、放射引起的损伤、细胞移植物排斥和增生性疾病。3.权利要求2所述的方法，其中所述神经疾病选自脑癌、癌的脑转移、多发性硬化(MS)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、阿尔茨海默病、帕金森病、神经损伤、放射引起的脑损伤、缺氧脑损伤和雷特综合征。4.权利要求3所述的方法，其中所述脑癌是星形细胞肿瘤、神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、成神经细胞瘤和脑膜瘤中的任一种。5.权利要求4所述的方法，其中所述神经胶质瘤是成胶质细胞瘤。6.权利要求2所述的方法，其中所述肌肉疾病选自MS、肌营养不良、肌肉损伤、肌肉炎症、恶病质和少肌症。7.权利要求6所述的方法，其中所述肌营养不良是杜兴氏肌营养不良(DMD)或贝克氏肌营养不良。8.权利要求2、6或7中任一项所述的方法，其中所述疾病是肌肉疾病，并且其中所述胞外囊泡、条件培养基、胞外基质或其组合包含miR-29a、miR-29b、miR-29c和miR-656中的至少一种。9.权利要求2所述的方法，其中所述自身免疫疾病选自MS、糖尿病、结肠炎、和克罗恩病。10.权利要求2所述的方法，其中所述能量稳态疾病是糖尿病。11.权利要求2所述的方法，其中所述消化疾病选自过敏性肠综合征(IBD)、克罗恩病和结肠炎。12.权利要求2所述的方法，其中老化包括皮肤老化、肌肉老化和脑老化中的至少一种。13.权利要求2所述的方法，其中所述增生性疾病是癌症。14.权利要求13所述的方法，其中所述癌症是脑癌、脑转移、肺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌和头颈癌中的任一种。15.权利要求14所述的方法，其中所述脑癌选自神经胶质瘤、成神经管细胞瘤、成神经细胞瘤和脑膜瘤。16.权利要求15所述的方法，其中所述神经胶质瘤是成胶质细胞瘤。17.权利要求13至16中任一项所述的方法，进一步包括照射所述对象。18.权利要求13至17中任一项所述的方法，其中所述MSC群、胞外囊泡、条件培养基、胞外基质或其组合包含miR-145和miR-656中的至少一种。19.权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述富集的CH-MSC群基本上不含羊膜胎盘衍生的MSC(AM-MSC)。20.权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述提供包括从细胞混合物或胎盘组织选择CH-MSC。21.权利要求20所述的方法，其中所述选择包括选择表达至少一种表面标志物的至少一种细胞，所述表面标志物选自TCRα-β、CD55、LIFR、ST6GALNACS和MICA/B。22.权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述给予包括静脉内给予、肌内给予、鼻内给予、鞘内给予、纹状体内给予、颅内给予、动脉内给予和皮下给予中的至少一种。23.权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述CH-MSC群对于所述对象是同种异体的。24.权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述CH-MSC群对于所述对象是自体的。25.权利要求21至24中任一项所述的方法，进一步包括确认所述至少一种表面标志物在所选择的CH-MSC的表面上的表达。26.选择间充质干细胞(MSC)亚群的方法，所述方法包括：(a)提供MSC；和(b)选择至少一种MSC，所述至少一种MSC在所述至少一种MSC的表面上表达至少一种表面标志物，其中CD184、CD193、CD235a、CD318、CD255、CD268、fMLP、ITGA2、ITGA4、和CD326中的至少一种的表达表明MSC是脐带衍生的MSC，TCRα-β、CD55、LIFR、ST6GALNACS、和MICA/B中的至少一种的表达表明MSC是绒毛膜胎盘衍生的MSC，CD24、CD48、CD66b、CD338、CD120b、CD268、FGFLR1、ITGA5、NES、和PDGFRAA中的至少一种的表达表明MSC是骨髓衍生的MSC，CD84、PDGFRBB和TNFRSF11B中的至少一种的表达表明MSC是脂肪衍生的MSC，并且CD157的表达表明MSC是羊膜胎盘衍生的MSC；从而选择MSC亚群。27.权利要求26所述的方法，进一步包括在MSC生长培养基中培养MSC。28.权利要求26或27所述的方法，其中所述提供包括提供组织或细胞混合物，和从所述组织或细胞混合物分离MSC。29.权利要求28所述的方法，其中所述分离MSC包括分离表达选自下列的多种表面标志物的细胞：CD9、CD10、CD13、CD26、CD29、CD44、CD36、CD46、CD47、CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e、CD50、CD51/61、CD54、CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·布罗迪，S·布罗迪，
申请(专利权)人：埃克森蒂姆生物技术公司，
类型：发明
国别省市：以色列,IL