一种注射用猪胎盘转移因子及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种注射用猪胎盘转移因子，属于生物医药技术领域。本发明专利技术所述制备方法将新鲜猪胎盘洗净，匀浆，得到猪胎盘匀浆液；猪胎盘匀浆液反复冻融5～7后，与pH值2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液；浸提液经过双层过滤得到分离液，分离液加入壳聚糖作为絮凝剂，依次进行微滤和超滤，得到超滤液；调节超滤液的pH至和渗透压，除菌，即得注射用猪胎盘转移因子。本发明专利技术提供的注射用猪胎盘转移因子制备方法能够更好的完整保留注射用猪胎盘转移因子的活性，还可以缩短生产周期，提高转移因子的提取量，降低生产成本，适合大规模工业化生产。制备得到的注射用猪胎盘转移因子可用于制备免疫增强剂和疫苗佐剂。

Porcine placenta transfer factor for injection and preparation method and application thereof

The invention provides a porcine placenta transfer factor for injection, and belongs to the field of biomedicine technology. The preparation method of the invention is to wash and homogenate the fresh pig placenta and obtain the pig placenta homogenate. After the pig's placenta homogenate is repeatedly frozen and thawed for 5~7, it is mixed with pH 2~4 value of hydrochloric acid solution, stirring and leaching at 3~5 degrees Celsius, and the leaching solution is obtained. The extract is filtered through double layers to obtain the separating liquid, and the separating liquid is added with chitosan as flocculant, and then ultrafiltration is obtained by microfiltration and ultrafiltration. By adjusting the pH to osmotic pressure of ultrafiltration and removing bacteria, the porcine placenta transfer factor was injected. The preparation method of the porcine placenta transfer factor for injection can better preserve the activity of the porcine placenta transfer factor for injection, shorten the production cycle, increase the extraction amount of the transfer factor, and reduce the production cost, and is suitable for large-scale industrial production. The prepared porcine placenta transfer factor can be used to prepare Immunoenhancers and vaccine adjuvants.

【技术实现步骤摘要】
一种注射用猪胎盘转移因子及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种注射用猪胎盘转移因子及其制备方法和应用。
技术介绍
转移因子是由动物蛋白细胞中具有免疫获悉的T淋巴细胞所释放的一类小分子可透析物质，可溶于水，能诱导机体免疫细胞活化，增强机体免疫力，能转移包括病毒、细菌、真菌、寄生虫、组织相容性抗原和肿瘤抗原等多种抗原的细胞免疫。由于转移因子使用安全、作用迅速、无抗原性同时作为免疫激发剂和辅助制剂可显著提高对动物疾病的预防和控制效果。目前市场上存在很多猪、牛等诸多动物脾脏转移因子，但对于动物胎盘中提取转移因子较少。陈灵等研究了一种以猪胎盘为原料的提取方法，但是其提取产物的纯度不高，无法满足市场需求(陈灵，张利萍，罗永海，等.猪胎盘肽(胎盘转移因子)的提取制备及其性质研究[C]//上海市动物学会1999年年会.1999.)。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术为了解决以猪胎盘为原料无法得到高纯度、高产量转移因子的问题，本专利技术提供了一种注射用猪胎盘转移因子的制备方法，时间短、质量可控，产量高，适宜大规模工业化生产。为了解决上述问题，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种注射用猪胎盘转移因子的制备方法，包括如下步骤：(1)将猪胎盘匀浆，得到猪胎盘匀浆液；(2)将猪胎盘匀浆液反复冻融5～7次，得到冻融液；(3)将冻融液与pH值为2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液；(4)将浸提液进行双层过滤，得到分离液和沉淀；(5)将分离液与壳聚糖混合后，依次进行微滤、超滤，得到超滤液；所述壳聚糖的质量与分离液的体积之比为0.5～2:100；(6)将超滤液的pH值调节至6.8～7.2、渗透压调节至280～320mosm/kg，除菌，得到注射用猪胎盘转移因子。优选的，所述步骤(1)中，将洗净后猪胎盘在60～80℃的水中浸泡3～5s再进行匀浆。优选的，所述反复冻融中，冷冻温度独立的不高于-20℃，融解时间独立的不超过50min。优选的，所述步骤(3)中，冻融液与pH值2～4的盐酸溶液体积比为1:1～2。优选的，所述步骤(3)中，浸提时间为10～15h，搅拌速率为60～80r/min。优选的，所述步骤(4)中，在得到沉淀后还包括将所得沉淀与水混合再次匀浆，反复冻融1～2次后进行双层过滤，所得滤液合并至分离液中。优选的，所述双层过滤为依次以200目和300目滤网进行过滤。优选的，所述步骤(5)中，微滤的滤网规格为0.22μm，超滤的超滤膜规格为6KD。本专利技术上述技术方案所述注射用猪胎盘转移因子的制备方法得到的注射用猪胎盘转移因子，其中多肽含量不低于2mg/mL，核糖含量不低于45μg/mL。本专利技术上述技术方案所述注射用猪胎盘转移因子在制备免疫增强剂或疫苗佐剂中的应用。本专利技术提供了一种注射用猪胎盘转移因子的制备方法，将新鲜猪胎盘洗净，匀浆，得到猪胎盘匀浆液；猪胎盘匀浆液反复冻融5～7后，与pH值2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液；浸提液经过双层过滤得到分离液，分离液加入壳聚糖作为絮凝剂，依次进行微滤和超滤，得到超滤液；调节超滤液的pH至和渗透压，除菌，即得注射用猪胎盘转移因子。本专利技术提供的注射用猪胎盘转移因子制备方法能够更好的完整保留注射用猪胎盘转移因子的活性，还可以缩短生长周期，提高转移因子的提取量，降低生产成本，适合大规模工业化生产。附图说明图1为单罐多层气压过滤机的结构示意图；图2为装有0.22μm滤芯的立式过滤套筒；图3为装有6KD超滤芯的立式过滤套筒；图4为注射用猪胎盘转移因子提取装置。具体实施方式本专利技术提供了一种注射用猪胎盘转移因子的制备方法，包括如下步骤：(1)将猪胎盘匀浆，得到猪胎盘匀浆液；(2)将猪胎盘匀浆液反复冻融5～7次，得到冻融液；(3)将冻融液与pH值为2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液；(4)将浸提液进行双层过滤，得到分离液和沉淀；(5)将分离液与壳聚糖混合后，依次进行微滤、超滤，得到超滤液；所述壳聚糖的质量与分离液的体积之比为0.5～2:100；(6)将超滤液的pH值调节至6.8～7.2、渗透压调节至280～320mosm/kg，除菌，得到注射用猪胎盘转移因子。本专利技术将猪胎盘匀浆，得到猪胎盘匀浆液。本专利技术优选的在匀浆前对猪胎盘进行洗净，以去除血浆和浆膜，得到主要包括胎盘子叶和肉埠的洗净后猪胎盘，将洗净后猪胎盘捣碎并匀浆，得到猪胎盘匀浆液。在本专利技术中，所述猪胎盘优选的采用新鲜猪胎盘。所述新鲜猪胎盘是指离体6h以内的猪胎盘，本专利技术所述新鲜猪胎盘优选的来源于市售。本专利技术优选的将洗净后猪胎盘在60～80℃的水中浸泡3～5s，再进行匀浆。以60～80℃水处理能够使猪胎盘变硬，便于捣碎。在本专利技术中，优选的将洗净后猪胎盘捣碎至7～9μm后再进行匀浆。本专利技术优选的采用捣碎机捣碎，所述捣碎转速优选为4000～6000r/min，更优选为5000r/min。在本专利技术中，所述匀浆优选的以匀浆机进行。得到猪胎盘匀浆液后，本专利技术将猪胎盘匀浆液反复冻融5～7次，得到冻融液。本专利技术将猪胎盘匀浆液反复冻融是为了使细胞破碎，反复冻融5～7次能够提高细胞破碎程度，使小分子的转移因子更多的渗出，以提高转移因子的提取率。在本专利技术中，所述冻融次数更优选为6次。在本专利技术中，所述反复冻融中，冷冻至猪胎盘匀浆液冻实，融解则以猪胎盘匀浆液处于无冰状态为止。在本专利技术中，冷冻温度独立的优选为-20℃以下，更优选为-35～-30℃。本专利技术优选地采用液氮进行冷冻，液氮冷冻的速度更快，有利于提高细胞破碎程度。在本专利技术中，融解时间独立地不超过50min，更优选为30～50min。本专利技术优选的采用微波进行融解，微波功率优选为500～700w，更优选为600w。利用液氮和微波的速冻速溶能够进一步破坏细胞结构，提高转移因子的含量。得到冻融液后，本专利技术将冻融液与pH值2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液。在本专利技术中，所述冻融液与pH值2～4的盐酸溶液体积比优选为1:1～2，更优选为1:1.5。本专利技术以pH值2～4的盐酸溶液作为提取溶剂，pH值2～4的酸性环境有利于提高注射用猪胎盘转移因子中的多肽提取率，转移因子中的多肽含量可提高20～30％；还有利于粗蛋白的絮凝。在本专利技术中，所述浸提温度更优选为4℃。本专利技术采用3～5℃的低温浸提是因浸提时间较长，为了防止在浸提过程中减少因过热导致料液核糖多肽物质减少、造成产品质量下降。在本专利技术中，所述浸提时间优选为10～15h，更优选为12h。在本专利技术中，所述浸提同时伴随搅拌，所述搅拌转速优选为60～80r/min，更优选为70r/min。得到浸提液后，本专利技术将浸提液进行双层过滤，得到分离液和沉淀。本专利技术对浸提液进行双层过滤主要是为了去除脂肪颗粒等漂浮物，本专利技术所述双层过滤优选的依次以200目和300目滤网对浸提液进行过滤。本专利技术优选的将所得沉淀与水混合进行再次匀浆，反复冻融1～2次后进行双层过滤，得到再分离液，将再分离液合并到分离液中。本专利技术将沉淀再次匀浆、反复冻融以及双层过滤的目的是为了进一步提取转移因子。在本专利技术中，所述沉淀质量与水的体积之比优选为1:0.5～1，更优选为1:0.6～0.8。本专利技术所述再次匀浆的操作同前述步骤中对洗净后猪胎盘的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种注射用猪胎盘转移因子的制备方法，包括如下步骤：(1)将猪胎盘匀浆，得到猪胎盘匀浆液；(2)将猪胎盘匀浆液反复冻融5～7次，得到冻融液；(3)将冻融液与pH值为2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液；(4)将浸提液进行双层过滤，得到分离液和沉淀；(5)将分离液与壳聚糖混合后，依次进行微滤、超滤，得到超滤液；所述壳聚糖的质量与分离液的体积之比为0.5～2:100；(6)将超滤液的pH值调节至6.8～7.2、渗透压调节至280～320mosm/kg，除菌，得到注射用猪胎盘转移因子。

【技术特征摘要】
1.一种注射用猪胎盘转移因子的制备方法，包括如下步骤：(1)将猪胎盘匀浆，得到猪胎盘匀浆液；(2)将猪胎盘匀浆液反复冻融5～7次，得到冻融液；(3)将冻融液与pH值为2～4的盐酸溶液混合，3～5℃下搅拌浸提，得到浸提液；(4)将浸提液进行双层过滤，得到分离液和沉淀；(5)将分离液与壳聚糖混合后，依次进行微滤、超滤，得到超滤液；所述壳聚糖的质量与分离液的体积之比为0.5～2:100；(6)将超滤液的pH值调节至6.8～7.2、渗透压调节至280～320mosm/kg，除菌，得到注射用猪胎盘转移因子。2.根据权利要求1所述注射用猪胎盘转移因子的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，将洗净后猪胎盘在60～80℃的水中浸泡3～5s再进行匀浆。3.根据权利要求1所述注射用猪胎盘转移因子的制备方法，其特征在于，所述反复冻融中，冷冻温度独立的不高于-20℃，融解时间独立的不超过50min。4.根据权利要求1所述注射用猪胎盘转移因子的制备方法，其特征在于，所述步骤(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓斌，刘友霖，徐磊，卢永恒，
申请(专利权)人：派生特福州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35