外泌体在促进造血干/祖细胞增殖中的用途制造技术

本发明专利技术提出了外泌体在促进造血干/祖细胞增殖中的用途。由此，在造血干/祖细胞增殖的体系中添加外泌体，能够有效提高造血干/祖细胞的增殖效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域，具体地，本专利技术涉及外泌体在促进造血干/祖细胞增殖中的用途，更具体地，本专利技术涉及外泌体在促进造血干/祖细胞增殖中的用途、外泌体在制备用于促进造血干/祖细胞增殖的培养基中的用途、外泌体在制备用于促进造血干/祖细胞增殖的试剂盒中的用途以及促进造血干/祖细胞增殖的方法。
技术介绍
造血干/祖细胞是维持人体血液及免疫系统的基础，也是各类血细胞及免疫细胞的唯一来源。自上世纪五十年代首例造血干/祖细胞移植实施以来，造血干/祖细胞移植已成为目前临床上治疗多种恶性血液疾病、肿瘤及免疫疾病的有效治疗手段。与终末分化细胞相比，造血干/祖细胞具有很强的自我更新能力及向各谱系血细胞分化的潜能。因此移植治疗后，造血干/祖细胞能够迅速归巢并定植于患者骨髓微环境中。随后，伴随着造血干/祖细胞的快速增殖分化，逐步解除患者的骨髓抑制并重建其造血及免疫系统。但是目前最主要的问题是造血干/祖细胞的数量问题。由于造血干/祖细胞在脐带血单个核细胞中比例仅为1％左右，能够采集到的造血干/祖细胞总数十分有限，不能满足临床应用需要。因而，目前的促进造血干/祖细胞增殖的方法仍有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种促进造血干/祖细胞增殖的方法。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：以脐带组织来源的间充质干细胞作为基质细胞的共培养体系能够有效促进造血干/祖细胞的增殖。间充质干细胞能够分泌多种可溶性细胞因子，并产生大量微型囊泡，包括外泌体。那么，间充质干细胞所产生的何种物质能够影响造血干/祖细胞的增殖，专利技术人展开一系列实验证实间充质干细胞分泌的外泌体具备独特的生物学功能。专利技术人在含有重组人干细胞生长因子(SCF)、重组人血小板生成素(TPO)、重组FMS样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)的无血清培养基中添加由间充质干细胞生成的外泌体，结果发现，相对于对照，添加外泌体后造血干/祖细胞的增殖速度加快，经培养后造血干/祖细胞的总数量较未添加组显著增多。因而，专利技术人认为，外泌体能够显著增加造血干/祖细胞增殖的能力。为此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了外泌体在促进造血干/祖细胞增殖中的用途。由此，在造血干/祖细胞增殖的体系中添加外泌体，能够有效提高造血干/祖细胞的增殖效率。根据本专利技术的实施例，上述外泌体在促进造血干/祖细胞增殖中的用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述外泌体由间充质干细胞形成。专利技术人发现，间充质干细胞来源的外泌体中表达CD63、CD81、Hsp70等特异性蛋白，其内部包裹多种脂类物质、miRNA、mRNA及蛋白质，能作为信号分子参与介导细胞间通讯并调控细胞的功能。选用间充质干细胞分泌的外泌体促进造血干/祖细胞增殖效率进一步提高。根据本专利技术的实施例，所述外泌体由脐带间充质干细胞形成。脐带间充质干细胞来源丰富，易于培养扩增且细胞免疫原性较低，采用脐带间充质干细胞分泌的外泌体，体内安全性更高。根据本专利技术的实施例，所述造血干/祖细胞为脐带血造血干/祖细胞，优选CD34+细胞。专利技术人通过实验发现，外泌体在促进脐带造血干/祖细胞尤其是CD34+细胞的增殖方面具有更加显著的作用，尤其是脐带间充质干细胞来源的外泌体在促进脐带造血干/祖细胞的增殖方面，不仅具有显著的作用，而且安全性更高。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了外泌体在制备培养基中的用途，所述培养基用于促进造血干/祖细胞增殖。由此，利用本专利技术的培养基能够高效地促进造血干/祖细胞的增殖，从而能够获得大量细胞活性好的造血干/祖细胞。根据本专利技术的实施例，上述外泌体在制备培养基中的用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述外泌体由间充质干细胞形成，优选由脐带间充质干细胞形成。选用间充质干细胞分泌的外泌体制备培养基，所述培养基在促进造血干/祖细胞增殖的效率方面进一步提高。采用脐带来源的间充质干细胞分泌的外泌体，来源更加广泛，免疫原性更低。根据本专利技术的实施例，所述造血干/祖细胞为脐带血造血干/祖细胞，优选CD34+细胞。专利技术人通过实验发现，外泌体所制备的培养基在促进脐带造血干/祖细胞尤其是CD34+细胞的增殖方面具有更加显著的作用，尤其是脐带间充质干细胞来源的外泌体所制备的培养基，在促进脐带造血干/祖细胞的增殖方面，不仅具有显著的作用，而且安全性更高。根据本专利技术的实施例，所述培养基中包含2～50微克/ml外泌体，由此，造血干/祖细胞的增殖效率高，获得的造血干/祖细胞的活性好。根据本专利技术的实施例，所述培养基为添加了20～100ng/mL重组人干细胞生长因子、20～100ng/mL重组人血小板生成素和20～100ng/mL重组FMS样酪氨酸激酶3配体的Stemspan培养基。专利技术人通过实验发现，在上述培养基中培养人造血干/祖细胞，造血干/祖细胞的增殖效率高。根据本专利技术的实施例，所述培养基中包含10微克/ml外泌体。专利技术人通过实验发现，在含有10微克/ml外泌体的培养基中培养造血干/祖细胞，造血干/祖细胞的增殖效率更高。根据本专利技术的实施例，所述培养基为添加了50ng/mL重组人干细胞生长因子、50ng/mL重组人血小板生成素、50ng/mL重组FMS样酪氨酸激酶3配体的Stemspan培养基。专利技术人通过实验发现，在上述培养基中培养造血干/祖细胞，造血干/祖细胞的增殖效率进一步提高。在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了外泌体在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于促进造血干/祖细胞增殖。由此，利用本专利技术的试剂盒能够高效地促进造血干/祖细胞的增殖，从而能够获得大量细胞活性好的造血干/祖细胞。根据本专利技术的实施例，上述外泌体在制备试剂盒中的用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述外泌体由间充质干细胞形成，优选由脐带间充质干细胞形成。专利技术人发现选用间充质干细胞分泌的外泌体在促进造血干/祖细胞增殖的效率方面进一步提高。采用脐带来源的间充质干细胞分泌的外泌体，来源更加广泛，免疫原性更低。根据本专利技术的实施例，所述造血干/祖细胞为脐带血造血干/祖细胞，优选CD34+细胞。专利技术人通过实验发现，外泌体在促进脐带血造血干/祖细胞尤其是CD34+细胞的增殖方面具有更加显著的作用，尤其是脐带间充质干细胞来源的外泌体在促进脐带造血干/祖细胞的增殖方面，不仅具有显著的作用，而且安全性更高。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒进一步包括重组人干细胞生长因子、重组人血小板生成素和重组FMS样酪氨酸激酶3配体。专利技术人在实验中发现，外泌体和重组人干细胞生长因子、重组人血小板生成素和重组FMS样酪氨酸激酶3配体组合作用于造血干/祖细胞，促进造血干/祖细胞增殖的效率更高、更显著。需要说明的是，本申请所述的试剂盒需要低温保存，以保持外泌体及任选的人干细胞生长因子、重组人血小板生成素和重组FMS样酪氨酸激酶3配体的活性，优选采用-70℃～-80℃保存。另外，外泌体适于采用生理盐水为保存基质。在本专利技术的第四方面，本专利技术提出了一种促进造血干/祖细胞增殖的方法。根据本文档来自技高网...

【技术保护点】
外泌体在促进造血干/祖细胞增殖中的用途。

【技术特征摘要】
1.外泌体在促进造血干/祖细胞增殖中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述外泌体由间充质干细胞形成，优选由脐带间充质干细胞形成。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述造血干/祖细胞为脐带血造血干/祖细胞，优选CD34+细胞。4.外泌体在制备培养基中的用途，所述培养基用于促进造血干/祖细胞增殖。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述外泌体由间充质干细胞形成，优选由脐带间充质干细胞形成。6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述造血干/祖细胞为脐带血造血干/祖细胞，优选CD34+细胞。7.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述培养基中包含2～50微克/ml外泌体，任选地，所述培养基为添加了20～100ng/mL重组人干细胞生长因子、20～100ng/mL重组人血小板生成素和20～100ng/mL重组FMS样酪氨酸激酶3配体的Stemspan培养基，优选地，所述培养基中包含10微克/ml外泌体，优选地，所述培养基为添加了50ng/mL重组人干细胞生长因子、50ng/mL重组人...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴雪涛，何丽娟，张博文，李艳华，岳文，谢小燕，陈琳，刘一鸣，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11