一种多指标联检化学发光试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了基于量子点标记酶形成量子点‑酶复合物的多指标联检化学发光免疫分析法。本发明专利技术基于量子点标记酶形成量子点‑酶复合物的多指标联检化学发光免疫分析法，在酶表面或距酶5‑10 nm的聚合物层表面分别标记不同粒径或种类的量子点，形成不同的量子点‑酶复合物，利用不同粒径或种类量子点的吸收光谱与酶催化其发光底物所产生的发射光谱充分重叠且量子点具有较大斯托克斯位移的特点，可以高效地将酶催化底物产生的400‑600 nm波长的发射光转化为波长在500‑750 nm之间的发射光，并在不同滤光片的作用下进行检测，实现了化学发光平台上以少量样本进行快速高效的多指标联检。

A Chemiluminescence Kit for Multi-index Joint Detection and Its Preparation Method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种多指标联检化学发光试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术属于化学发光免疫
，特别涉及一种基于量子点标记酶形成量子点-酶复合物的多指标联检化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
化学发光免疫分析（Chemilμminescenceimmμnoassay,CLIA）是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。比起传统的酶免分析法，CLIA具有灵敏度更高、检测时间更短、标记方法更简单以及原料成本更低的特点。尽管如此，随着分析检验技术的逐渐普及，我们迫切需要能在CLIA基础上系统性进一步提升样本检测通量以及便捷性来适应临床。样本多种组分联合同步检测具有非常重要意义。传统上测定混合体系中样本多种组分含量，多采用平行单组分分析法，即每个分析流程只测定其中一种组分含量，多次平行执行该流程，最后得到所有所需组分含量。分析所需时间长，消耗试剂多，分析通量低，劳动量大。已有文献报道，量子点具有较大的斯托克斯位移，不同粒径和种类的量子点偶联在酶表面后，可吸收酶催化其底物产生的同一波长的发射光，并分别转化为不同波长的发射光，非常适用于样本多组分分析。研究者发现，量子点的发射光相比酶底物的发射光具有更窄的光谱半高宽（大约为60-80nm），是一种更为纯净的检测信号，降低了杂光对检测的干扰。而该种光信号的转换存在临界距离，即仅当量子点和酶表面之间的距离在10nm以内时，量子点才能对酶底物的发射光进行转换，由于10nm以内的距离可存在的杂质很少，因此这种限制条件反过来又在一定程度上提高了检测的信噪比。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供了一种化学发光免疫分析试剂盒，实现化学发光试剂盒以少量样本进行高速高效多指标的联检；本专利技术还提供了该化学发光免疫分析试剂盒的制备方法；本专利技术还提供了该化学发光免疫分析试剂盒在化学发光免疫分析中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种化学发光免疫分析试剂盒，包括不同的量子点-酶-标记分子复合物、直接或间接包被了不同捕获分子的固相载体和化学发光底物液，其中：将不同的量子点连接到酶表面形成不同的量子点-酶复合物或将不同的量子点连接到包覆于酶表面的聚合物层表面形成不同的量子点-酶复合物，标记分子连接到不同的量子点-酶复合物上形成不同的量子点-酶-标记分子复合物；所述标记分子能够与待测样本中的目标分析物特异性结合，所述捕获分子能够与标记分子配对，并且能够与待测样本中的目标分析物特异性结合；或所述捕获分子能够与待测样本中的目标分析物相结合，所述捕获分子能够与标记分子特异性结合。所述量子点分为三类，包括一元量子点例如C量子点、Si量子点等；二元量子点例如不含重金属的ZnO、SiO2等和含有重金属CdS、PbS等；三元量子点例如CdSexTe1-x、CuInS2等；所述量子点为上述类型中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，或由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核-壳型纳米复合粒子；所述量子点的粒径大小为1-100nm；优选地，所述量子点为ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，或由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核-壳型纳米复合粒子；所述量子点的粒径大小为1-100nm；所述酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶在内的和底物作用产生化学发光的物质；当采用辣根过氧化物酶时，底物为含有鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物的溶液；当采用碱性磷酸酶时，底物为含有（金刚烷）-1，2-二氧乙烷或其衍生物的溶液。所述固相载体为免疫分析固相载体，所述固相载体为磁性微粒、酶标板、微孔板、金电极或尼龙；所述目标分析物为样本中的待测物；所述试剂盒还包括清洗液。在夹心法中，所述标记分子为与目标分析物特异性结合的抗体、或其活性片段、抗原或半抗原、或它们的活性片段，所述抗体或其活性片段为单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、Fab、(Fab’)2、抗体重链或抗体轻链；所述捕获分子为与标记分子配对，并且能够与目标分析物特异性结合的抗体、或其活性片段、抗原或半抗原、或它们的活性片段，所述抗体或其活性片段为单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、Fab、(Fab’)2、抗体重链或抗体轻链；或在竞争法中，所述标记分子为与目标分析物具有相同或相似结构、或相同或相似结合结构域的物质且能与捕获分子结合的物质，所述标记分子为小分子、半抗原、大分子或抗原；所述捕获分子为能与标记分子特异性结合的物质；或在竞争法中，所述捕获分子为与目标分析物具有相同或相似结构、或相同或相似结合结构域的物质且能与捕获分子结合的物质，所述捕获分子为小分子、半抗原、大分子或抗原；所述标记分子为能与捕获分子特异性结合的物质。一种化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，包含以下步骤：S1、制备量子点-酶复合物：使用无机材料制备量子点，并在量子点表面引入巯基、氨基或羧基，将量子点连接到酶表面，反应完成后对反应物通过层析或者电泳的方式进行纯化，除去没有连接上的量子点，得到纯净的量子点-酶复合物；或使用无机材料或有机分子包覆在酶表面形成聚合物层，纯化后将量子点连接到聚合物层表面，反应完成后再次对反应物通过层析或者电泳进行纯化，除去没有连接上的量子点，得到纯净的量子点-酶复合物；S2、制备量子点-酶-标记分子复合物：标记分子通过共价偶联方式或物理吸附方式连接到步骤S1中制备好的量子点-酶复合物，反应完成后对反应物进行纯化，得到纯净的量子点-酶-标记分子复合物；所述共价偶联方式为活化酶表面的巯基、氨基或羧基共价偶联至抗体的氨基；S3、制备直接或间接包被了捕获分子的固相载体：捕获分子通过共价偶联、结合对、物理吸附方式直接或间接包被到固相载体；S4、配制化学发光底物液：底物液为含有鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物的溶液，或含有（金刚烷）-1，2-二氧乙烷或其衍生物的溶液。一种化学发光免疫分析试剂盒应用于化学发光免疫分析法，包括夹心法：将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在酶表面，或利用有机大分子或无机材料在酶表面形成聚合物层，将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在聚合物层表面，形成不同的量子点-酶复合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，包括不同的量子点‑酶‑标记分子复合物、直接或间接包被了不同捕获分子的固相载体和化学发光底物液，其中：将不同的量子点连接到酶表面形成不同的量子点‑酶复合物或将不同的量子点连接到包覆于酶表面的聚合物层表面形成不同的量子点‑酶复合物，标记分子连接到不同的量子点‑酶复合物上形成不同的量子点‑酶‑标记分子复合物；所述标记分子能够与待测样本中的目标分析物特异性结合，所述捕获分子能够与标记分子配对，并且能够与待测样本中的目标分析物特异性结合；或所述捕获分子能够与待测样本中的目标分析物相结合，所述捕获分子能够与标记分子特异性结合。

【技术特征摘要】
1.一种化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，包括不同的量子点-酶-标记分子复合物、直接或间接包被了不同捕获分子的固相载体和化学发光底物液，其中：将不同的量子点连接到酶表面形成不同的量子点-酶复合物或将不同的量子点连接到包覆于酶表面的聚合物层表面形成不同的量子点-酶复合物，标记分子连接到不同的量子点-酶复合物上形成不同的量子点-酶-标记分子复合物；所述标记分子能够与待测样本中的目标分析物特异性结合，所述捕获分子能够与标记分子配对，并且能够与待测样本中的目标分析物特异性结合；或所述捕获分子能够与待测样本中的目标分析物相结合，所述捕获分子能够与标记分子特异性结合。2.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述量子点包括一元量子点、二元量子点、三元量子点中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，或由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核-壳型纳米复合粒子；所述量子点的粒径大小为1-100nm。3.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶在内的和底物作用产生化学发光的物质；当采用辣根过氧化物酶时，底物为含有鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物的溶液；当采用碱性磷酸酶时，底物为含有（金刚烷）-1，2-二氧乙烷或其衍生物的溶液。4.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述固相载体为免疫分析固相载体，所述固相载体为磁性微粒、酶标板、微孔板、金电极或尼龙；所述目标分析物为样本中的待测物；所述试剂盒还包括清洗液。5.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：在夹心法中，所述标记分子为与目标分析物特异性结合的抗体、或其活性片段、抗原或半抗原、或它们的活性片段，所述抗体或其活性片段为单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、Fab、(Fab’)2、抗体重链或抗体轻链；所述捕获分子为与标记分子配对，并且能够与目标分析物特异性结合的抗体、或其活性片段、抗原或半抗原、或它们的活性片段，所述抗体或其活性片段为单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、Fab、(Fab’)2、抗体重链或抗体轻链；或在竞争法中，所述标记分子为与目标分析物具有相同或相似结构、或相同或相似结合结构域的物质且能与捕获分子结合的物质，所述标记分子为小分子、半抗原、大分子或抗原；所述捕获分子为能与标记分子特异性结合的物质；或在竞争法中，所述捕获分子为与目标分析物具有相同或相似结构、或相同或相似结合结构域的物质且能与捕获分子结合的物质，所述捕获分子为小分子、半抗原、大分子或抗原；所述标记分子为能与捕获分子特异性结合的物质。6.根据权利要求1-5任一所述的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：S1、制备量子点-酶复合物：使用无机材料制备量子点，并在量子点表面引入巯基、氨基或羧基，将量子点连接到酶表面，反应完成后对反应物通过层析或者电泳的方式进行纯化，除去没有连接上的量子点，得到纯净的量子点-酶复合物；或使用无机材料或有机分子包覆在酶表面形成聚合物层，纯化后将量子点连接到聚合物层表面，反应完成后再次对反应物通过层析或者电泳进行纯化，除去没有连接上的量子点，得到纯净的量子点-酶复合物；S2、制备量子点-酶-标记分子复合物：标记分子通过共价偶联方式或物理吸附方式连接到步骤S1中制备好的量子点-酶复合物，反应完成后对反应物进行纯化，得到纯净的量子点-酶-标记分子复合物；所述共价偶联方式为活化酶表面的巯基、氨基或羧基共价偶联至抗体的氨基；S3、制备直接或间接包被了捕获分子的固相载体：捕获分子通过共价偶联、结合对、物理吸附方式直接或间接包被到固相载体；S4、配制化学发光底物液：底物液为含有鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物的溶液，或含有（金刚烷）-1，2-二氧乙烷或其衍生物的溶液。7.根据权利要求1-5任一所述的化学发光免疫分析试剂盒应用于化学发光免疫分析法，其特征在于，包括夹心法：将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在酶表面，或利用有机大分子或无机材料在酶表面形成聚合物层，将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在聚合物层表面，形成不同的量子点-酶复合物；将能够与待测样本中的不同目标分析物特异性结合的相对应标记分子标记不同的量子点-酶复合物，形成不同的量子点-酶-标记分子复合...

【专利技术属性】
技术研发人员：金晶，王西龙，张誉严，
申请(专利权)人：南京迪格诺斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32