一种酶联免疫法检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种酶联免疫法检测试剂盒及其制备方法，包括亲和素包被的微孔板、生物素标记的HbsAb、生物素标记的HCV基因重组抗原、生物素标记的HIV基因重组抗原、辣根过氧化物酶标记的HbsAb、辣根过氧化物标记的鼠抗人IgG、辣根过氧化物酶标记的HIV基因重组抗原、底物A液、底物B液、浓缩洗涤液和终止液；本发明专利技术可以用一个试剂盒同时检测样本中的HBsAg、HCV病毒IgG抗体和HIV病毒抗体。血源筛查酶联免疫法检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需2个小时就可判读结果，适用范围广，非常适合进行血源筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种酶联免疫法检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及一种血源筛查的试剂盒及其制备方法，具体来说是涉及一种酶联免疫法检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
在严重出血时或者患有严重贫血、白血病、骨髓纤维化等疾病时，人们不得不接受输血。但在输血的同时也承担着被感染其它疾病的危险。引致输血传播性疾病中，HBV、HCV、HIV是对输血安全性构成严重威胁的主要病毒，HBV在我国人群中感染率高达10.3％，因此，严重威胁我国的输血安全。HCV在我国人群中感染率为1.0％～3.1％，由于技术原因，对供血者还存在一定的漏检率，致使70％输血传播性肝炎是由HCV引起。HIV的传播途径之一是经血传播，输入了带HIV的血液感染HIV的可能性估计超过90％(相反，一次性交的风险为百分之几到小于1％)，一次输血带入HIV病毒量是非常大的，通过这种方式感染后，很快就会发展为AIDS，平均时间是3－5年(儿童约为2年)，全球HIV感染者中，约5％～10％为经血感染，我国也应重视HIV对输血安全的威胁。因此如何有效地控制和预防上述三种病毒性疾病在人群中的扩散和传播是关系到人类健康和未来的大事，同时也得到了各国政府和卫生部门的高度重视。由于以上三种病毒都可经携带病毒的血液及血液制品传播，而全球每年因输血及使用污染的血制品罹患以上三种病毒性疾病的事件时有发生。因此，如何筛查血液及血制品中以上三种病毒，以增加输血和血制品安全性的问题是关系到千家万户幸福的大事，也是临床检验医学研究的重大课题之一。总之，严格筛查血源及血制品中HBV，HCV，HIV，是杜绝以上三种病毒经输血及使用污染血制品传播最为关键的一个环节。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决上述所存在的缺陷，提供一种可定性检测人血清或血浆中的HBsAg、HCV病毒IgG抗体和HIV病毒抗体的酶联免疫法检测试剂盒及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，包括亲和素包被的微孔板、生物素标记的HbsAb、生物素标记的HCV基因重组抗原、生物素标记的HIV基因重组抗原、辣根过氧化物酶标记的HbsAb、辣根过氧化物标记的鼠抗人IgG、辣根过氧化物酶标记的HIV基因重组抗原、底物A液、底物B液、浓缩洗涤液和终止液。作为优选的技术方案，所述微孔板为聚苯乙烯微孔板。作为优选的技术方案，所述底物A液为含2％过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液。作为优选的技术方案，所述底物B液为含0.02％TMB的柠檬酸盐缓冲液。作为优选的技术方案，所述浓缩洗涤液为含5％NaCl、0.05％KCl和5％Tween-20的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3±0.1)。作为优选的技术方案，所述终止液为1MH2SO4溶液。一种酶联免疫法检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)包被板的制备和封装；b)酶结合物的制备和分装：将辣根过氧化物酶标记的HBsAb、鼠抗人IgG、HIV基因重组抗原分别用含0.12‰绿色素的酶标稀释液，质检合格后用平头盖塑料瓶(蓝色)，按11ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；c)样品稀释液制备和分装：按样品稀释液配方配制好样品稀释液，质检合格后用平头盖塑料瓶(白色)，按11ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；d)底物A液制备和分装：含2％过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液，质检合格后用绿盖滴瓶按6ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；e)底物B液制备和分装：含0.02％TMB的柠檬酸盐缓冲液，质检合格后用黑盖滴瓶(黑色)按6ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；f)浓缩洗涤液制备和分装：含5％NaCl、0.05％KCl和5％Tween-20的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3±0.1)；用平头盖塑料瓶(透明)按30ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；g)终止液制备和分装：1MH2SO4溶液，用黄盖滴瓶按6ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存。h)对半成品库中的包被板及各封装液进行QA取样并装盒至成品库中保存，待进一步QA取样合格后放行。作为上述制备方法中的优选技术方案，所述步骤a)中包被板的制备和封装包括以下步骤：1)包被：将亲和素按确定的工作浓度用0.05M碳酸盐缓冲液(pH9.6±0.1)稀释。经检验合格的微孔板划棕色标记后包被，包被量100±5μl/孔，于33～37℃吸附过夜(16～26小时)；2)洗板：用工作浓度洗液按300±50μl/孔不浸泡连续洗板2次；3)封闭：用封闭液以120±5μl/孔33～37℃封闭3～6小时；4)干燥及封装：甩板，扣干，干燥；经干燥处理确认干透后立即用复合膜卷材或铝膜袋加干燥剂进行封装，并保证铝膜袋封袋密实，完整，并贴上标签，置2～8℃半成品库保存。作为上述制备方法中的优选技术方案，所述封闭液按质量比由以下材料制成：硼酸(H3BO3)3.92g、硼砂(Na2B4O7.10H2O)3.26g、蔗糖50g、BSA10g、Proclin3001ml、加纯化水至1000ml。作为上述制备方法中的优选技术方案，所述步骤b)中酶标稀释液按质量比由以下材料制成：硼酸(H3BO3)3.92g、硼砂(Na2B4O7·10H2O)3.26g、蔗糖50g、小牛血清200ml、Proclin3001ml，加纯化水至1000ml。作为上述制备方法中的优选技术方案，所述步骤c)中样品稀释液按质量比由以下材料制成：Na2HPO4·12H2O3.0g、NaH2PO4·2H2O4.2g、NaCl8.5g、Proclin3001ml，纯化水加至1000ml。进一步，本试剂盒采用酶联免疫法，微孔板上包被亲和素；检测时，固相中的亲和素将结合生物素标记的HBsAb/HCV基因重组抗原/HIV基因重组抗原；生物素标记的HBsAb/HCV基因重组抗原/HIV基因重组抗原病毒IgG抗体/HIV病毒抗体结合，形成抗原/抗体-抗体/抗原复合物，通过洗涤洗去其他未结合的物质；再加入辣根过氧化物酶标记HBsAb/鼠抗人IgG/HIV基因重组抗原，将形成“三明治”夹心复合物，通过洗涤洗去其他未结合的物质；加入底物后，底物被辣根过氧化物酶催化变成有色产物；加入浓硫酸终止反应后，用酶标仪在450nm或450nm/630nm波长测吸光度(A值)，从而定性检测样本中的HBsAg、HCV病毒IgG抗体和HIV病毒抗体。本专利技术的有益效果为：可以用一个试剂盒同时检测样本中的HBsAg、HCV病毒IgG抗体和HIV病毒抗体。血源筛查酶联免疫法检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需2个小时就可判读结果，适用范围广，非常适合进行血源筛查。附图说明图1为本专利技术一种酶联免疫法检测试剂盒及其制备方法的生产工艺流程图。具体实施方式为使对本专利技术的结构特征及所达成的功效有更进一步的了解与认识，用以较佳的实施例及附图配合详细的说明，说明如下：如图1所示，一种酶联免疫法检测试剂盒，包括亲和素包被的微孔板、生物素标记的HbsAb、生物素标记的HCV基因重组抗原、生物素标记的HIV基因重组抗原、辣根过氧化物酶标记的HbsAb、辣根过氧化物标记的鼠抗人IgG、辣根过氧化物酶标记的HIV基因重组抗原、底物A液、底物B液、浓缩洗涤液和终止液。在本实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，包括亲和素包被的微孔板、生物素标记的HbsAb、生物素标记的HCV基因重组抗原、生物素标记的HIV基因重组抗原、辣根过氧化物酶标记的HbsAb、辣根过氧化物标记的鼠抗人IgG、辣根过氧化物酶标记的HIV基因重组抗原、底物A液、底物B液、浓缩洗涤液和终止液。

【技术特征摘要】
1.一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，包括亲和素包被的微孔板、生物素标记的HbsAb、生物素标记的HCV基因重组抗原、生物素标记的HIV基因重组抗原、辣根过氧化物酶标记的HbsAb、辣根过氧化物标记的鼠抗人IgG、辣根过氧化物酶标记的HIV基因重组抗原、底物A液、底物B液、浓缩洗涤液和终止液。2.根据权利要求1所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述微孔板为聚苯乙烯微孔板。3.根据权利要求2所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述底物A液为含2％过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液。4.根据权利要求3所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述底物B液为含0.02％TMB的柠檬酸盐缓冲液。5.根据权利要求4所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为含5％NaCl、0.05％KCl和5％Tween-20的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3±0.1)。6.根据权利要求5所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述终止液为1MH2SO4溶液。7.一种如权利要求1～6任一所述的酶联免疫法检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)包被板的制备和封装；b)酶结合物的制备和分装：将辣根过氧化物酶标记的HBsAb、鼠抗人IgG、HIV基因重组抗原分别用含0.12‰绿色素的酶标稀释液，质检合格后用平头盖塑料瓶(蓝色)，按11ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；c)样品稀释液制备和分装：按样品稀释液配方配制好样品稀释液，质检合格后用平头盖塑料瓶(白色)，按11ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；d)底物A液制备和分装：含2％过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液，质检合格后用绿盖滴瓶按6ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；e)底物B液制备和分装：含0.02％TMB的柠檬酸盐缓冲液，质检合格后用黑盖滴瓶(黑色)按6ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；f)浓缩洗涤液制备和分装：含5％NaCl、0.05％KCl和5％Tween-20的0...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙伟，
申请(专利权)人：江苏伯纳德生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32