CMPF均相酶免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法，试剂盒的CMPF抗体的免疫原由CMPF与蛋白质或多聚赖氨酸偶联物作为免疫原进行免疫获得。分别利用CMPF支链末端的‑COOH与蛋白质或多聚赖氨酸分子上的‑NH2进行偶联；接着利用这些偶联物免疫物作为免疫原进行免疫小鼠或家兔，最后获得特异性的抗CMPF的单克隆或多克隆抗体；并基于该抗CMPF的单克隆或多克隆抗体建立CMPF含量检测方法；该检测方法可在生化分析仪等大型自动化仪器上进行大样本自动化检测分析。检测方法具有检测灵敏度高，特异性强，检测重复性高和稳定性好等优点，本发明专利技术方法检测灵敏度0.5μg/L。

CMPF homogeneous enzyme immunoassay kit, preparation method and detection method

The invention discloses a CMPF homogeneous enzyme immunoassay kit, a preparation method and a detection method. The CMPF antibody immunogen of the kit is obtained by immunizing CMPF with protein or polylysine conjugate as an immunogen. COOH at the end of the branched chain of CMPF was used to couple with NH2 on protein or polylysine molecule, and then these conjugates were used as immunogens to immunize mice or rabbits. Finally, specific monoclonal or polyclonal antibodies against CMPF were obtained. Based on the monoclonal or polyclonal antibodies against CMPF, a method for detecting the content of CMPF was established. The automatic detection and analysis of large samples are carried out on large automated instruments such as biochemical analyzer. The detection method has the advantages of high detection sensitivity, strong specificity, high detection repeatability and good stability. The detection sensitivity of the method is 0.5 ug/L.

【技术实现步骤摘要】
CMPF均相酶免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法
本专利技术涉及临床生化检测
，具体为一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法,更具体为一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒、CMPF均相酶免疫检测试剂盒的制备方法，以及利用该试剂盒实现的呋喃脂肪酸代谢产物3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl--propyl-2-furanpropanoicacid，简称CMPF)含量的检测方法。
技术介绍
蛋白结合类毒素是尿毒症毒素中重要的一类物质，其本身均为小分子物质(分子量＜500Da)，人体内该类物质易与人血清蛋白(humanserumalbumin，HAS)结合，形成中大分子，马尿酸(hippuricacid，HA)、硫酸吲哚酚(indoxylsulfate，IS)、硫酸对甲酚(p-cresylsulfate，PCS)及3-羧基-4--甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionicacid，CMPF)为蛋白结合类毒素的典型代表。蛋白结合类毒素的蛋白结合率是研究蛋白结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：试剂R1,其含有CMPF抗体、NAD辅酶和G‑6‑P‑Na2；试剂R2，其含有G6PDH‑CMPF偶联物和载体；标准品溶液，其由CMPF与校准品稀释液梯度稀释而成，所述校准品稀释液含有缓冲液和载体。

【技术特征摘要】
1.一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：试剂R1,其含有CMPF抗体、NAD辅酶和G-6-P-Na2；试剂R2，其含有G6PDH-CMPF偶联物和载体；标准品溶液，其由CMPF与校准品稀释液梯度稀释而成，所述校准品稀释液含有缓冲液和载体。2.根据权利要求1所述的CMPF均相酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述CMPF抗体为抗CMPF的特异性鼠源性单克隆IgG型抗体或抗CMPF的兔源性多克隆IgG抗体，所述特异性鼠源性单克隆IgG型抗体包括IgG1和/或IgG2a和/或IgG2b和/或IgG3和/或IgG4型抗体；所述兔源性多克隆IgG抗体包含F(ab')2特异性抗体片段。3.根据权利要求2所述的CMPF均相酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述载体为载体蛋白质和/或多聚赖氨酸，所述载体蛋白质为BSA、OVA、KLH中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的CMPF均相酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液。5.根据权利要求4所述的CMPF均相酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1由如下组分和含量组成：所述试剂R2由如下组分和含量组成：所述标准品稀释液由如下组分和含量组成：磷酸盐缓冲液0.05-0.2M，BSA0.01-10g/L，稳定剂0.1-0.5g/L。6.根据权利要求5所述的CMPF均相酶免疫检测试剂盒，其特征在于，所述所述表面活性剂为TritonX-100、Tween-20、Tween-40、Tween-60、Tween-80中的一种或多种，所述稳定剂为甘露醇、PEG-4000、PEG-6000、PEG-8000中的一种或多种。7.一种权利要求6所述的CMPF均相酶免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，其中G6PDH-CMPF偶联物的制备，包括如下步骤：将CMPF与G6PDH混合，并加入碳二亚胺，在碳二亚胺作用下，CMPF的羧基与G6PDH的氨基结合进行偶联反应，将反应液上柱，然后分离纯化得到G6PDH-CMPF偶联物。8.一种权利要求7所述的CMPF均相酶免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，其中抗CMPF的特异性鼠源性单克隆IgG型抗体的制备，包括如下步骤：S1.CMPF-蛋白质偶联物或CMPF-多聚赖氨酸偶联物的制备将CMPF与载体蛋白质混合，并加入碳二亚胺，在碳二亚胺作用下，CMPF与载体蛋白质进行偶联反应，然后透析得到CMPF-蛋白质偶联物；或者载体蛋白质用多聚赖氨酸代替，得到CMPF-多聚赖氨酸偶联物；S2.动物免疫以CMPF-蛋白质偶联物或CMPF-多聚赖氨酸偶联物/次/只小鼠的浓度与等量的完全福氏佐剂混匀，皮下多点注射免疫Balb/c雌性小鼠，第1次与第2次间隔10-14天，以后每次间隔7天，连续5次，第2-5次CMPF-蛋白质偶联物或CMPF-多聚赖氨酸偶联物与等量的不完全福氏佐剂乳化混匀，间隔1周后采用尾静脉/腹腔注射无菌的CMPF-蛋白质偶联物或CMPF-多聚赖氨酸偶联物，以加强免疫1次，3天后细胞融合；S3.杂交瘤细胞的制备取步骤S2免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按体积比1:6在50％PEG的作用下融合，融合细胞先在次黄嘌呤-氨甲喋呤-胸腺嘧啶选择培养基中，在37℃、5％CO2及饱和湿度条件下培养，2周后换为次黄嘌呤-胸腺嘧啶培养基，继续在37℃、5％CO2及饱和湿度条件下培养；待克隆孔长至1/3-1时，取培养上清液进行抗体检测筛选；S4.特异性克隆孔筛选用50mM的碳酸盐缓冲液稀释CMPF-蛋白质偶联物至100L/孔包被反...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱永良，王轶雄，程小龙，
申请(专利权)人：杭州博谱医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33