一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法技术

本发明专利技术公开了一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法，包括如下步骤：先将抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原活化；然后，用包被缓冲液稀释包被抗原，将其加入酶标板中，在适宜环境中孵育2小时以上；接着，向每凹孔加入被检血清；接着，向每个凹孔中加入稀释缓冲液稀释的酶结合物，在37℃氛围中处理0.5‑1小时；最后，向每个凹孔中加入0.15ml的显色溶液，然后在37℃氛围中处理10‑30分钟，然后加入终止剂观察实验结果。本方法提升了检测方法的准确性，准确的对抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原进行定性的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法
本专利技术涉及一种抗原检测方法，尤其涉及一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法。
技术介绍
针对中性粒细胞和单核粒细胞的细胞浆成分。目前临床检测方法有酶联免疫吸附法、间接免疫荧光法，其中间接免疫荧光法是一种初筛方法。ANCA是鉴别诊断自身免疫性血管炎的重要标记物，而抗MPO抗体则与血管炎相关，可见于多种疾病中。现有技术中存在的检测手段存在检测准确率低，检测过程复杂的缺点。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法，以解决现有技术中存在的技术问题。为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本专利技术通过以下技术方案实现：一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法，包括如下步骤：a)将抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原加入在PH=5-6.8的100mmol/L的活化液中，然后放置于40C环境中活化25分钟以上；b)用包被缓冲液稀释包被抗原至5-20ug/ml的浓度后，将其以每孔40-100ul的量加入酶标板中，在适宜环境中孵育2小时以上，然后清洗；c)向每凹孔加入用含有0.05%稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2ml，在适宜环境中孵育1-2小时，然后清洗；d)向每个凹孔中加入稀释缓冲液稀释的酶结合物0.2ml，然后在37℃氛围中处理0.5-1小时，然后用清洗液清洗；e)向每个凹孔中加入0.15ml的显色溶液，然后在37℃氛围中处理10-30分钟，然后加入终止剂观察实验结果。优选的，经经步骤c处理后的物质中先加入0.1-0.5ml的辅助溶剂后，在适宜温度处理1-3小时后再进行步骤d的操作。优选的，所述辅助溶剂由以下按重量份数配比组成：酪蛋白钠1-2份，柠檬酸钠10-25份，庆大霉素0.1-0.3份，胱氨酸2-5份，牛血清白蛋白0.2-0.8份，0.2mol/L的KH2PO4溶液1-3份，加入适量去离子水调匀。优选的，所述辅助溶剂由以下按重量份数配比组成：酪蛋白钠1份，柠檬酸钠15份，庆大霉素0.15份，胱氨酸3份，牛血清白蛋白0.3份，0.2mol/L的KH2PO4溶液1份，加入适量去离子水调匀。优选的，抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原可以是纯化的天然抗原、重组抗原或者人工合成多肽。优选的，所述活化液由以下按重量份数配比组成：甘油2-6份，维他命C1-10份，黄原胶0.2-0.8份，透明质酸钠0.1-0.2份。优选的，所述包被缓冲液选自50mMpH9.6的碳酸盐缓冲液、20mMpH8.5的Tris-HCl或者10mMpH7.2PBS溶液。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的检测方法由于采用了抗原活化手段和辅助溶液处理等手段进一步提升了检测方法的准确性，准确的对抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原进行定性的检测。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术技术方案作进一步的详细描述，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。实施例1本专利技术提供一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法，包括如下步骤：a)将抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原加入在PH=5-6.8的100mmol/L的活化液中，然后放置于40C环境中活化2小时；b)用包被缓冲液稀释包被抗原至6ug/ml的浓度后，将其以每孔60的量加入酶标板中，在适宜环境中孵育3小时，然后清洗；c)向每凹孔加入用含有0.05%稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2ml，在适宜环境中孵育1小时，然后清洗；d）向每个凹孔中加入稀释缓冲液稀释的酶结合物0.2ml，然后在37℃氛围中处理1小时，然后用清洗液清洗；e)向每个凹孔中加入0.15ml的TMB显色溶液，然后在37℃氛围中处理25分钟，然后加入2MH2SO4终止剂观察实验结果。实施例2实施例1中，经步骤c处理后的物质中先加入0.3ml的辅助溶剂后，在适宜温度处理2小时后再进行实施例1中步骤d的操作。辅助溶剂：所述辅助溶剂由以下按重量份数配比组成：酪蛋白钠1份，柠檬酸钠15份，庆大霉素0.15份，胱氨酸3份，牛血清白蛋白0.3份，0.2mol/L的KH2PO4溶液1份，加入适量去离子水调匀。辅助溶剂的制备：首先，将酪蛋白钠加入去离子水中，在25℃下以搅拌3h，再以滤膜过滤，加入庆大霉素，制得溶液混合液X，将混合溶液X存放于4℃保存待用；然后，柠檬酸钠、胱氨酸、KH2PO4溶液以100rpm的搅拌速度加入0.2mol/Lde碳酸氢钠子水中，等上一份物质完全溶解后加入下一种物质，得到Y溶液；再后，将混合液X、Y溶液混合后，以80rpm的搅拌速度搅拌搅拌1小时，再向其中加入牛血清白蛋白，以100rpm的搅拌速度搅拌3小时；最后，用0.5μm滤膜过滤后溶液加入Tris-磷酸盐缓冲液调节PH=6.8即可制得辅助溶剂。活化溶液：活化液由以下按重量份数配比组成：甘油3份，维他命C6份，黄原胶0.3份，透明质酸钠0.2份。活化溶液的制备：先将甘油倒入25度的0.1mol/L的碳酸氢钠溶液中，搅拌30分钟；然后，缓慢加入维他命C，继续搅拌至容器中物质分散开；接着依次加入黄原胶和透明质酸钠搅拌2小时后用0.5μm滤膜过滤后备用。实施例3从临床上收集300位患者的血清，分别用实施例1中方法和实施例2中方法分别检测300位患者的血清，统计检测结果如下：，根据上述的统计结果可知：实施例1中诊断的灵敏性（%）=222/（78+222）=74%；实施例2中的诊断灵敏性（%）=238/（62+238）=79.3%。以上仅为本专利技术的优选实施例，并非因此限制本专利技术的专利范围，凡是利用本专利技术说明书及内容所作的等效结构或者等效流程变换，或者直接或间接运用在其他相关的
，均同理包括在本专利技术的专利保护范。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法，包括如下步骤：将抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原加入在PH=5‑6.8的100mmol/L的活化液中，然后放置于4

【技术特征摘要】
1.一种抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法，包括如下步骤：将抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原加入在PH=5-6.8的100mmol/L的活化液中，然后放置于40C环境中活化25分钟以上；用包被缓冲液稀释包被抗原至5-20ug/ml的浓度后，将其以每孔40-100ul的量加入酶标板中，在适宜环境中孵育2小时以上，然后清洗；向每凹孔加入用含有0.05%稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2ml，在适宜环境中孵育1-2小时，然后清洗；向每个凹孔中加入稀释缓冲液稀释的酶结合物0.2ml，然后在37℃氛围中处理0.5-1小时，然后用清洗液清洗；向每个凹孔中加入0.15ml的显色溶液，然后在37℃氛围中处理10-30分钟，然后加入终止剂观察实验结果。2.根据权利要求1所述的抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法，其特征在于，经经步骤c处理后的物质中先加入0.1-0.5ml的辅助溶剂后，在适宜温度处理1-3小时后再进行步骤d的操作。3.根据权利要求2所述的抗中性粒细胞髓过氧化物酶抗原检测方法，其特征在于，所述辅助溶剂由以下按重量份数配比组成：酪蛋白钠1-2份，柠檬...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆上苏，
申请(专利权)人：镇江金太医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32