凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用制造技术

技术编号:21523797 阅读:52 留言:0更新日期:2019-07-06 16:30
本发明专利技术公开了凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用,具体是用凝结芽孢杆菌为主要活性成分,制成药品等生物制剂,并联合免疫检查点抑制剂治疗癌症。该制剂能够有效诱导抗肿瘤免疫,增加免疫检查点抑制剂应答率和治疗效果,降低副作用,延长生存期。

【技术实现步骤摘要】
凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用
本专利技术涉及凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用,具体是用凝结芽孢杆菌制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂,并提供该制剂联合免疫检查点抑制剂治疗癌症的方法,属于生物医药领域。
技术介绍
免疫检查点阻断治疗是目前肿瘤免疫疗法的热点,CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原)、PD-1(程序性细胞死亡蛋白1)和PD-L1(PD-1配体1)是目前研究较清楚的免疫检查点分子,针对这些免疫检查点分子的抗体能阻断相关信号通路,增强内源性抗肿瘤免疫效应,这些抗体分子即为免疫检查点抑制剂。虽然免疫检查点阻断治疗在临床应用中带来持久的肿瘤抑制作用,但仅对部分患者有效,目前通常在未经挑选的实体瘤中,单独使用的应答率为15-20%,如何提高免疫检查点抗体药物应答率是目前面临的主要难题。目前医学研究认为,免疫检查点阻断治疗的持续治疗能带来更好的治疗效果,然而在有限的免疫检查点应答患者中,强烈的副反应如严重的消化道不良反应、皮肤剧烈瘙痒、肝损伤、肺炎、肾功能损害等使得这些患者不得不中止免疫治疗,从而无法获得预期的临床受益。本专利技术人经过研究发现,凝结芽孢杆菌能够有效诱导抗肿瘤免疫,增加免疫检查点抑制剂应答率和治疗效果,降低副作用,延长生存期,效果优于双歧杆菌,且未见相关研究报道,特申请此专利技术专利。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够有效诱导抗肿瘤免疫、增加免疫检查点抑制剂应答率和治疗效果并降低副作用的制剂,该制剂主要由凝结芽孢杆菌制成。本专利技术的微生态制剂的制备优选是通过下述步骤实施的,但不局限于此制备工艺,公知的能实现的制备工艺均可以:采取可能含凝结芽孢杆菌的样品,然后将样品置于灭菌瓶内,研究时从中取一定量的样品加入18mL灭菌的稀释液中,充分混匀,在无菌操作台内,进行10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7梯度稀释,取10-5、10-6、10-7三个稀释梯度,分别涂布于凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基上,置于培养箱,37℃下培养48小时,选择长势良好的单菌落分别接种于液体扩增培养基中,置于培养箱内,37℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后,将菌体冷冻真空干燥,调制出干燥菌粉,然后根据《伯杰细菌鉴定手册》、相关细菌鉴定文献或16SrRNA序列对比分析进行凝结芽孢杆菌鉴定和毒性试验,将无毒性的凝结芽孢杆菌干燥菌粉按需要比例添加辅料制成片剂、胶囊、散剂、粉剂或液体制剂等各种剂型,也可加入其他活菌或低聚果糖、低聚木糖等低聚糖起到协同作用。凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于:纯化水1000mL,蛋白胨10g,牛肉浸取物10g,柠檬酸二铵2g,乙酸钠5g,酵母粉5g,葡萄糖5g,磷酸二氢钾2g,吐温801.0ml,碳酸钙20g,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,琼脂15g,调pH6.2-6.5,115℃高压灭菌20min。凝结芽孢杆菌液体扩增培养基优选但不局限于:纯化水1000mL,蛋白胨10g,牛肉浸取物3g,氯化钠5g,葡萄糖5g,调pH7,115℃高压灭菌20min。为进一步具体说明本专利技术,专利技术人利用上述方法通过凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基分离鉴定出了无毒性的凝结芽孢杆菌,本专利技术所述凝结芽孢杆菌并不局限于为说明本专利技术所述的菌,只要无毒性的凝结芽孢杆菌均是本专利技术所述,均在本专利技术的保护范围内。本专利技术所述凝结芽孢杆菌优选但不限于凝结芽孢杆菌TBC169保藏编号CGMCCNo.1207或凝结芽孢杆菌DH156保藏编号CGMCCNo.13136。本专利技术实施说明中优选使用的凝结芽孢杆菌的细菌学性质:1、菌落形态显微镜观察:杆状,革兰氏染色阳性。平板形态:菌落呈白色、圆形、边缘整齐、大小2-3mm。2、生理生化鉴定明胶液化:-;过氧化氢酶:+;VP试验:+;苯丙氨酸脱氨酶试验-。3、糖酵解实验鉴定葡萄糖:+;麦芽糖:+;蔗糖:+;木糖:-;果糖:+;鼠李糖:-;乳糖:+;菊粉:+;半乳糖:+;糊精:+。4、分离的菌进行16SrRNA基因测序,测得序列用BLAST与GenBank和RDP数据库中的基因序列进行相似性分析,确定分离的菌为凝结芽孢杆菌Bacilluscoagulans。本专利技术所述的凝结芽孢杆菌指活的生物个体。本专利技术是以有效剂量按上述方法分离的凝结芽孢杆菌作为主要活性成份,按照一定的制剂工艺,加入常规的赋形剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、黏合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等辅料,制成任何一种适合于使用的剂型,如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体制剂、粉剂等剂型。本专利技术所述凝结芽孢杆菌作为主要药物活性成份制成活菌制剂。本专利技术所指有效剂量是指按上述方法分离的凝结芽孢杆菌根据上面所述单独或组合作为主要药物活性成份制成的固体活菌制剂包含的总活菌数不能低于1×106CFU/g,一般在1×108CFU/g以上,最高可达到1×1012CFU/g或1×1012CFU/g以上,或液体活菌制剂包含的总活菌数不能低于1×106CFU/mL,一般在1×108CFU/mL以上,最高可达到1×1012CFU/mL或1×1012CFU/mL以上。本专利技术所述制剂包括凝结芽孢杆菌单独应用或与其他药物联合应用,尤其包括凝结芽孢杆菌单独应用或与双歧杆菌联合应用。本专利技术所述双歧杆菌指活的生物个体。本专利技术所述双歧杆菌联合应用的制剂中,固体制剂包含的双歧杆菌总活菌数不低于1×106CFU/g,一般在1×107CFU/g以上,最高可达到1×1012CFU/g或1×1012CFU/g以上;或液体制剂包含的双歧杆菌总活菌数不低于1×106CFU/mL,一般在1×107CFU/mL以上,最高可达到1×1012CFU/mL或1×1012CFU/mL以上。本专利技术所述免疫检查点抑制剂包括PD-1、PD-L1、PD-L2、PDL3、PD-L4、CTLA-4、LAG3、B7-H3、B7-H4、KIR或TIM3的抑制剂,进一步地,所述免疫检查点抑制剂包括纳武利尤单抗(Nivolumab)、帕博利珠单抗(Pembrolizumab)、阿特珠单抗(Atezolizumab)、得瓦卢单抗(Durvalumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、Avelumab、Cemiplimab-rwlc、特瑞普利单抗(Toripalimab)、信迪利单抗、替雷丽珠单抗(tislelizumab)、卡瑞利珠单抗或以上抑制剂的任何组合。本专利技术还公开了一种癌症的治疗方法,所述方法将有效量的凝结芽孢杆菌作为主要活性成份制成的制剂和有效量的免疫检查点抑制剂共同施用至有需要的对象,进一步地,所述共同施用包括将两类制剂同时、分别或顺序施用。本专利技术所述癌症包括肺癌、肠癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫颈癌、头颈癌、黑色素瘤、胶质母细胞瘤、骨髓瘤、淋巴瘤或白血病,进一步地,所述肺癌包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌,所述肠癌包括结肠癌和直肠癌,所述肾癌包括肾细胞癌,所述黑色素瘤包括恶性黑色素瘤,所述淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤。由于本专利技术首次公开了凝结芽孢杆菌作为主要活性成份制成制剂在诱导抗肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用。2.按权利要求1所述应用,其特征在于所述制剂包括凝结芽孢杆菌单独应用或与其他药物联合应用。3.按权利要求1所述应用,其特征在于所述免疫检查点抑制剂包括PD-1、PD-L1、PD-L2、PDL3、PD-L4、CTLA-4、LAG3、B7-H3、B7-H4、KIR或TIM3的抑制剂,进一步地,所述免疫检查点抑制剂包括纳武利尤单抗(Nivolumab)、帕博利珠单抗(Pembrolizumab)、阿特珠单抗(Atezolizumab)、得瓦卢单抗(Durvalumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、Avelumab、Cemiplimab-rwlc、特瑞普利单抗(Toripalimab)、信迪利单抗、替雷丽珠单抗(tislelizumab)、卡瑞利珠单抗或以上抑制剂的任何组合。4.按权利要求1所述应用,其特征在于所述凝结芽孢杆菌指活的生物个体。5.按权利要求1所述应用,其特征在于所述凝结芽孢杆菌包括凝结芽孢杆菌TBC169保藏编号CGMCCNo.1207或凝结芽孢杆菌DH156保藏编号CGMCCNo.13136。6.按权利要求2所述应用,其特征在于所述制剂包括凝结芽孢杆菌单独应用...

【专利技术属性】
技术研发人员:崔云龙赵婀姿李洪福
申请(专利权)人:青岛东海药业有限公司
类型:发明
国别省市:山东,37

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