一种含凝结芽孢杆菌的复合菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种含凝结芽孢杆菌的复合菌剂,该复合菌剂含有凝结芽孢杆菌、粪肠球菌及酿酒酵母菌混合发酵的活性菌泥和稳定化保护剂，所述活性菌泥与稳定化保护剂质量比0.3‑1.0：1.0‑3.0，该复合菌剂中前述三种菌的有效活菌数分别为≥4.5×1010CFU/g、≥1.0×1010CFU/g、≥4.0×109CFU/g。本发明专利技术的复合益生菌剂不但能促进动物对饲料的消化吸收、节约成本，而且还可调节动物肠道内环境，从而提高动物免疫力、促进动物健康生长，显著提高了动物的生产性能，降低了生产成本。本发明专利技术提供了该复合菌剂的制备方法，解决了单菌发酵生产的能耗高、容易污染、工艺繁琐等问题，提高了各菌种生物活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物发酵
，具体地说，涉及一种含凝结芽孢杆菌的复合菌剂及其制备方法。
技术介绍
随着我国畜牧业的快速发展，其数量与质量、生产与环境以及效益与资源之间的矛盾越来越突出。尤其是畜禽排泄物对环境造成的污染日趋严重，大量的有害物排放使得畜禽场污染物中的BOD(生化需氧量)和COD(化学需氧量)值急剧上升，同时也成为一些疾病发生和传播的潜在诱因。另一方面，食品安全问题正引起越来越多的关注，在造成食品安全问题的诸多原因中，重要原因之一是饲料中使用抗生素作为促生长剂。客观上，抗生素自20世纪50年代以来广泛应用于畜禽养殖业，在促进动物生长，保证动物健康，节约饲料成本，提高经济效益等方面做出了巨大贡献。但由于抗生素在动物养殖业中的长期使用，近些年来，由其所致的毒副作用和药物残留问题已引起人们的关注。2006年，欧盟已经全面禁止了饲料中抗生素的使用，美国和日本等国家也对其做出了严格的限制。2011年，韩国全国禁止在动物饲料中添加抗生素。随着人们对畜产品安全和环境保护意识的不断加强，作为抗生素的替代品，益生菌越来越多的应用于动物营养和饲料中。益生菌是一类能改善动物胃肠道微生态平衡，有益于动物健康和生产性能发挥的微生物添加剂。其主要作用效果体现在改善动物新陈代谢，提高营养物质吸收和利用，提高免疫力，减少环境污染等方面发挥重要作用。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，利用各菌株之间互利共生、寄生及拮抗等关系，本专利技术提供了一种复合菌剂及复合菌剂的制备方法。本专利技术提供的一种含凝结芽孢杆菌的复合菌剂，含有凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)及酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)和稳定化保护剂。在本专利技术的实施例中，使用保藏编号为CGMCC No.12553的凝结芽孢杆菌HEW-B379，但本专利技术不局限于该菌，本专利技术的复合菌剂中的三种菌不限于特定编号的凝结芽孢杆菌、粪肠球菌及酿酒酵母菌，本领域技术内公知的属于上述菌的微生物均可适用于本专利技术的复合菌剂。本专利技术的复合菌剂中有效活菌数分别为：凝结芽孢杆菌≥4.5×1010CFU/g、粪肠球菌≥1.0×1010CFU/g，酿酒酵母菌≥4.0×109CFU/g。本专利技术的复合菌剂中，所述稳定化保护剂通过以下方法制备得到：将多维素0.1-10份、羧甲基纤维素0.5-5份、麦芽糖0.5-4份和多聚糖2-6份加入35-50份水中，800-1200r/m转速搅拌均匀得混合物，然后将混合物加入20-50份水中，边加边搅拌，并依次加入30-50份可溶性淀粉和1-8份甘油，搅拌，充分溶解，混合10-20min即得稳定化保护剂。本专利技术的复合菌剂是将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)及酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)分别发酵得到二级发酵液后，将三种菌的二级发酵液按照体积比2:1:1的比例接种到三级发酵培养基中发酵，当发酵液中凝结芽孢杆菌≥5.0×109cfu/mL、粪肠球菌≥4.0×109cfu/mL、酵母菌≥4.0×109cfu/mL时发酵结束，将发酵液离心得到复合菌剂活性菌泥，再将活性菌剂和稳定化保护剂按照质量比0.3-1.0：1.0-3.0混合均匀即得。本专利技术提供了含有上述复合菌剂的动物饲料。本专利技术提供了含有上述复合菌剂的饲料添加剂。本专利技术提供了上述复合菌剂在畜禽养殖中的应用。上述在畜禽养殖中的应用是将复合菌益生菌剂添加到饲料和动物饮水中。其中，所述复合菌益生菌剂在饮水中的添加量为107-109CFU/L饮水；在饲料中的添加量为106-109CFU/kg饲料。本专利技术提供了上述复合菌剂在提高动物生产性能，促进动物生长发育中的应用。本专利技术提供了上述复合菌剂在制备动物饲料中的应用。本专利技术还提供了制备上述复合菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)及酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)分别进行一级种子发酵、二级种子发酵，得到二级发酵液；(2)将凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、酿酒酵母菌的二级发酵液分别按照与三级发酵培养基的体积比2％、1％、1％的比例接种到三级发酵培养基中发酵，当发酵液中凝结芽孢杆菌≥5.0×109cfu/mL、粪肠球菌≥4.0×109cfu/mL、酵母菌≥4.0×109cfu/mL时发酵结束；离心三级发酵液得到复合菌剂活性菌泥；(3)将活性菌剂和稳定化保护剂按照质量比0.3-1.0：1.0-3.0混合均匀即得。上述方法中，步骤(1)中凝结芽孢杆菌发酵时采用的一级、二级种子培养基为：红糖1％-5％，大豆蛋白胨0.5％-1.5％，酵母膏0.3％-1.0％，NaCl 0.1％-0.5％，K2HPO4 0.2％-0.5％，硫酸镁0.01％-0.1％，MnSO4 0.05％-0.15％，余量为水，pH7.0±0.2；优选地，凝结芽孢杆菌发酵时采用的一级、二级种子培养基为：红糖3％，大豆蛋白胨1％，酵母膏0.5％，NaCl 0.5％，K2HPO4 0.3％，硫酸镁0.05％，MnSO4 0.1％，余量为水，pH7.0±0.2。粪肠球菌发酵时采用的一级、二级种子培养基为：蔗糖1％-3％％，黄豆粉0.5％-1％，玉米浆干粉0.5％-1.5％，柠檬酸氢二铵0.2％-0.7％，硫酸亚铁0.02％-0.1％，吐温-80 0.1％-0.3％，K2HPO4 0.05％-0.15％，MgSO4·7H2O 0.01％-0.03％，MnSO4·4H2O 0.01％-0.05％，余量为水，pH7.0±0.2。优选地，粪肠球菌发酵时采用的一级、二级种子培养基为：蔗糖2％，黄豆粉0.5％，玉米浆干粉1％，柠檬酸氢二铵0.5％，硫酸亚铁0.05％，吐温-80 0.1％，K2HPO4 0.1％，MgSO4·7H2O 0.01％，MnSO4·4H2O 0.03％，余量为水，pH7.0±0.2。酿酒酵母菌发酵时采用的一级、二级种子培养基为：糖蜜1.5％-2.5％，酵母粉0.5％-1.5％，麦芽粉0.5％-1.5％，蛋白胨1％-3％，余量为水，pH7.0±0.2；上述％为质量百分比。优选地，酿酒酵母菌发酵时采用的一级、二级种子培养基为：糖蜜2％，酵母粉1％，麦芽粉1％，蛋白胨2％，余量为水，pH7.0±0.2。步骤(1)中凝结芽孢杆菌发酵方法为：取凝结芽孢杆菌甘油管保藏的菌种，接种于300mL一级种子培养基中，进行摇瓶发酵培养，发酵温度为37±5℃、转速200r/min，发酵时间15～25h，得到一级种子液(活菌浓度为109CFU/mL)。将一级种子液转接到50L发酵罐二级种子培养基中，接种量为2％，装液量为20L、发酵温度为37±5℃、搅拌转速150r/min，培养7-15h得到二级种子液，备用。粪肠球菌发酵方法为：将经活化的粪肠球菌甘油管保藏的菌种，直接接种于液体种子培养基，30±5℃、180r/min培养5-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含凝结芽孢杆菌的复合菌剂，其特征在于，含有凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)及酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)和稳定化保护剂。

【技术特征摘要】
1.一种含凝结芽孢杆菌的复合菌剂，其特征在于，含有凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)及酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)和稳定化保护剂。2.如权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，有效活菌数分别为：凝结芽孢杆菌≥4.5×1010CFU/g、粪肠球菌≥1.0×1010CFU/g，酿酒酵母菌≥4.0×109CFU/g。3.如权利要求1或2所述的复合菌剂，其特征在于，所述稳定化保护剂通过以下方法制备得到：将多维素0.1-10份、羧甲基纤维素0.5-5份、麦芽糖0.5-4份和多聚糖2-6份加入35-50份水中，800-1200r/m转速搅拌均匀得混合物，然后将混合物加入20-50份水中，边加边搅拌，并依次加入30-50份可溶性淀粉和1-8份甘油，搅拌，充分溶解，混合10-20min即得稳定化保护剂。4.如权利要求1或2所述的复合菌剂，其特征在于，是将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)及酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)分别发酵得到二级发酵液后，将三种菌的二级发酵液按照体积比2:1:1的比例接种到三级发酵培养基中发酵，当发酵液中凝结芽孢杆菌≥5.0×109cfu/mL、粪肠球菌≥4.0×109cfu/mL、酵母菌≥4.0×109cfu/mL时发酵结束，将发酵液离心得到复合菌剂活性菌泥，再将活性菌剂和稳定化保护剂按照质量比0.3-1.0：1.0-3.0混合均匀即得。5.权利要求1-4任一所述复合菌剂在提高动物生产性能或畜禽养殖中的应用。6.制备权利要求1-4任一所述复合菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)及酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Hansen)分别进行一级种子发酵、二级种子发酵，得到二级发酵液；(2)将凝结芽孢杆菌、粪肠球菌、酿酒酵母菌的二级发酵液分别按照与三级发酵培养基的体积比2％、1％、1％的比例接种到三级发酵培养基中发酵，当发酵液中凝结芽孢杆菌≥5.0×109cfu/mL、粪肠球菌≥4.0×109...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪平，
申请(专利权)人：北京好实沃生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11