一种水产益生菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种水产益生菌剂，包括沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW‑GJ106，所述沼泽红假单胞菌HEW‑GJ106于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.17021。所述水产益生菌剂还包括粪肠球菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、枯草芽孢杆菌或酿酒酵母菌中的一种或几种。本发明专利技术还提供上述水产益生菌剂的制备方法和应用。本发明专利技术的益生菌剂不但可以提高水产动物的饲料利用效率，节约成本，而且大大改善了动物体内消化道内环境的稳态，促进营养的吸收利用，促进动物生长，显著提高了动物的生产性能、免疫性能和抗逆性。

A kind of aquatic probiotics and its preparation method and Application

The invention relates to an aquatic probiotic agent, including Rhodopseudomonas palustris HEW GJ106, which is stored in the General Microbial Center of the China Microbial Species Preservation and Management Committee on December 21, 2018, and the storage number is CGMCC NO. 17021. The aquatic probiotics also include one or more of Enterococcus faecalis, Lactobacillus plantarum, Staphylococcus lactis, Bacillus subtilis or Saccharomyces cerevisiae. The invention also provides the preparation method and application of the aquatic probiotics. The probiotic agent of the invention can not only improve the feed utilization efficiency of aquatic animals and save costs, but also greatly improve the stability of the internal environment of the digestive tract in animals, promote the absorption and utilization of nutrients, promote the growth of animals, and significantly improve the production performance, immune performance and stress resistance of animals.

【技术实现步骤摘要】
一种水产益生菌剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及益生菌剂，具体涉及一种水产益生菌剂及其制备方法和应用，更具体涉及一种含沼泽红假单胞菌的水产益生菌剂及其制备方法和应用。
技术介绍
益生菌作为饲用添加剂的积极作用已被公认，但也存在急待解决的问题：(1)目前国内已确认的适宜作益生菌的菌种仅有乳酸杆菌、链球菌、芽孢杆菌、双歧杆菌以及酵母菌等12种；(2)活菌制剂在饲料加工、运输、贮存过程中容易失去活性，降低生物活性作用；(3)活菌制剂进入动物消化道后多难以经受低pH值的盐酸、胆汁酸等的作用，难以有足够的活菌数量到达肠道或定植肠道而发挥作用；(4)活菌制剂进入肠道后生长速度慢，难以在微生物竞争中处于优势地位，形成优势菌群。因此，有些益生菌剂在实验室条件下虽具有良好的效果，但在生产条件下往往难以达到预期效果。为了提高益生菌剂的利用率，人们正在积极探索提高益生菌剂有效性的方法。随着养殖业的发展，由于养殖水体恶化、化学药品长期使用导致药物残留等都会影响养殖动物的生长，甚至会对养殖动物造成伤害，间接危害人类健康。而且水产动物的养殖难免要面临各种应激因素的刺激如水污染、长途运输、缺氧、气候骤变等，不同的应激反应会影响动物的正常发育，并导致机体免疫力下降，诱发疾病甚至死亡。现有的水产益生菌剂成分单一，功能单一，达不到治理养殖水体的作用，仅对一种恶劣环境应激反应有效，效果不理想。因此，越来越多的人开始关注益生菌对水产养殖环境的修复作用，这样既能降低成本，又不会产生二次污染，还能解决水体中剩余饵料、排泄物、及其他有害物质大量积累的问题，达到净化水质的目的，从而使水产动物处于健康状态。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于，提供一种水产益生菌剂及其制备方法和应用，以解决水产益生菌剂中菌种生物活性低等问题。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种水产益生菌剂，包括沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106，所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCCNO.17021，分类命名为沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonaspalustris。作为优选，其中所述水产益生菌剂还包括粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)中的一种或几种。作为优选，其中当所述水产益生菌剂由沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)组成时，所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)混合的质量比为(1-3):(1-2):(1-2):(0.5-1):(1-4):(0.5-1)。作为优选，其中所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106是从河北某水产养殖场的养殖水底泥中分离的光合细菌沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种上述水产益生菌剂的制备方法，包括如下步骤：1)将菌种的发酵液进行离心分离获得其的活性菌泥；2)将步骤1)得到的活性菌泥与稳定化保护剂按(0.5-3):(1-4)的质量比均匀混合，得菌湿粉；将该菌湿粉进行预冷冻，然后进行冷冻干燥，以得到所述水产益生菌剂。作为优选，其中所述均匀混合的时间为15-30min，搅拌转速为25-65r/m。作为优选，其中所述预冷冻的温度为-20～-45℃，冷冻干燥的温度为-40～-70℃。作为优选，其中所述菌种包括沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106。作为优选，其中所述菌种还包括包括粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)中的一种或几种。作为优选，其中当所述菌种由沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)组成时，所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)混合的质量比为(1-3):(1-2):(1-2):(0.5-1):(1-4):(0.5-1)。作为优选，其中所述沼泽红假单胞菌HEW-GJ106通过以下培养方法得到：S11.将-20℃冷冻保存(20wt％甘油)的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106解冻后，在无菌条件下于光合细菌培养基上划线，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106单菌落，挑取1-2环单菌落于种子培养基中，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液，活性达到4.2×108-1.0×1010CFU/mL；S12.取步骤S11得到的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液接种于35L二级发酵培养基，进行二级发酵；S13.将步骤S12得到的二级发酵培养液接种于三级发酵培养基中，进行三级发酵。作为优选，其中所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水产益生菌剂，其特征在于，包括沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW‑GJ106，所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW‑GJ106于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.17021。

【技术特征摘要】
1.一种水产益生菌剂，其特征在于，包括沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106，所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.17021。2.如权利要求1所述的水产益生菌剂，其特征在于，所述水产益生菌剂还包括粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)中的一种或几种。3.如权利要求1所述的水产益生菌剂，其特征在于，当所述水产益生菌剂由沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)组成时，所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)混合的质量比为(1-3):(1-2):(1-2):(0.5-1):(1-4):(0.5-1)。4.一种权利要求1-3任一项所述的水产益生菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将菌种的发酵液进行离心分离获得其的活性菌泥；2)将步骤1)得到的活性菌泥与稳定化保护剂按(0.5-3):(1-4)的质量比均匀混合，得菌湿粉；将该菌湿粉进行预冷冻，然后进行冷冻干燥，以得到所述水产益生菌剂。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述均匀混合的时间为15-30min，搅拌转速为25-65r/m；所述预冷冻的温度为-20～-45℃，冷冻干燥的温度为-40～-70℃；所述菌种包括沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述菌种还包括包括粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或酿酒酵母菌(SaccharomycescerevisiaeHansen)中的一种或几种。7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，当所述菌种由沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalu...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪平，
申请(专利权)人：北京好实沃生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11