人脐带间充质干细胞在制备脑瘫药物中的应用及培养方法技术

本发明专利技术涉及一种人脐带间充质干细胞在制备脑瘫药物中的应用及培养方法，通过对人脐带分离得到的华通氏胶体进行培养，得到细胞克隆团，随后对所得细胞克隆团进行胰蛋白酶消化得到P0代细胞，将P0代细胞传代培养至P4代，通过对P4代细胞表面抗原鉴定筛选得到合格的人脐带间充质干细胞。人脐带间充质干细胞组织融合性好，免疫原性弱，其迁徙能力强，在体内外扩增迅速，具有多向分化潜能，能向神经细胞方向分化，所以能够应用于制备作为治疗儿童脑瘫疾病药物中。本发明专利技术所述方法简单、安全、创伤小、患者依从性好，并且本发明专利技术建立了治疗儿童脑性瘫痪的人脐带间充质干细胞制备及临床应用标准和操作规程，安全有效，具有良好的应用前景。

Application and culture of human umbilical cord mesenchymal stem cells in preparation of cerebral palsy drugs

The present invention relates to the application and culture method of human umbilical cord mesenchymal stem cells in the preparation of cerebral palsy drugs. Cell clones are obtained by culturing Walton's colloid separated from human umbilical cord, then P0 cells are digested by trypsinase, P0 cells are subcultured to P4 cells, and surface antigens of P4 cells are identified and screened. Qualified human umbilical cord mesenchymal stem cells. Human umbilical cord mesenchymal stem cells have good tissue fusion, weak immunogenicity, strong migration ability, rapid expansion in vivo and in vitro, multi-directional differentiation potential, and can differentiate into nerve cells, so they can be used to prepare drugs for the treatment of cerebral palsy in children. The method of the invention is simple, safe, minimally invasive and has good patient compliance. The preparation and clinical application standards and operating procedures of human umbilical cord mesenchymal stem cells for treating children with cerebral palsy are established, which are safe and effective, and have good application prospects.

【技术实现步骤摘要】
人脐带间充质干细胞在制备脑瘫药物中的应用及培养方法
本专利技术属于干细胞培养和应用
，具体涉及人脐带间充质干细胞在制备脑瘫药物中的应用及培养方法。
技术介绍
儿童脑性瘫痪(CerebralPalsy，CP)指从出生前到生后1年内，各种原因引起的非进行性脑损伤所致的中枢性运动功能障碍及姿势异常，常伴有智力低下、语言障碍、癫痫、听力低下、视觉异常等，临床尚无任何有效的治疗手段。该疾病病因较为复杂，其主要病因是早产、产伤、围产期窒息及核黄疸等造成新生儿脑组织缺血缺氧。传统的治疗方法以支持治疗为主，临床上通常采用传统的脑瘫治疗方法，如康复训练、高压氧、神经营养药物、细胞因子、针灸治疗等，这些治疗手段对于损伤程度相对较轻的神经细胞有一定的效果，但对于年龄大于3岁的儿童和/或对于损伤较重的神经细胞，则收效甚微，其关键就在于所有的治疗方式中均没有针对性的对脑病变本身的神经修复和/或干预方案。如何及尽快的使脑瘫儿童损伤的功能得到恢复成为其日后独立和融入社会的关键因素。因此，开发新的有效治疗策略尤为迫切。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术提供了人脐带间充质干细胞在制备脑瘫药物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将人脐带经冲洗后置于脐带保存液中，恒温保存；(2)从步骤(1)所述人脐带中分离得到华通氏胶体，之后将所述华通氏胶体剪成组织匀浆块，加入培养基中进行培养，得到细胞克隆团；(3)将所述细胞克隆团用胰蛋白酶进行消化，得到P0代细胞；(4)将所述P0代细胞进行传代培养，传至P4代时进行收获并冻存；(5)对所述P4代细胞进行细胞表面抗原鉴定，筛选得到合格P4代细胞，即为所述人脐带间充质干细胞。

【技术特征摘要】
1.人脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将人脐带经冲洗后置于脐带保存液中，恒温保存；(2)从步骤(1)所述人脐带中分离得到华通氏胶体，之后将所述华通氏胶体剪成组织匀浆块，加入培养基中进行培养，得到细胞克隆团；(3)将所述细胞克隆团用胰蛋白酶进行消化，得到P0代细胞；(4)将所述P0代细胞进行传代培养，传至P4代时进行收获并冻存；(5)对所述P4代细胞进行细胞表面抗原鉴定，筛选得到合格P4代细胞，即为所述人脐带间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述人脐带取用的是无感染性疾病产妇胎儿娩出后结扎的人脐带；冲洗人脐带用的是经消毒后的PBS溶液。3.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述人脐带保存液为含900-1100U/mL庆大霉素的PBS溶液；所述恒温保存温度为2～8℃。4.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，所述组织匀浆块体积为1-4mm3；所述培养基为人脐带间充质干细胞无血清培养基，培养条件为3％-7％二氧化碳、36-38℃恒温、湿度90％-100％。5.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张澈，顾教伟，
申请(专利权)人：十堰市太和医院，
类型：发明
国别省市：湖北,42