The invention relates to a method for high throughput screening of monoclonal antibody product cell lines by two-dimensional liquid chromatography, including the detection of monoclonal antibody products by two-dimensional liquid chromatography. The monoclonal antibody product is bevacizumab, which includes the following steps: (1) separation by first-dimensional liquid chromatography; (2) detection by second-dimensional liquid chromatography: cut the first-dimensional liquid chromatography according to retention time. The cut fraction was drained to the two-dimensional liquid chromatography for detection. The invention improves the screening efficiency, saves manpower, avoids the lengthy sample processing and storage steps, avoids the possibility of sample degradation, and improves the accuracy of the analysis results.
【技术实现步骤摘要】
通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法
本专利技术涉及一种通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法,属于抗体类产品包括单克隆抗体与融合蛋白分析
技术介绍
现如今,单克隆抗体(简称“单抗”)得到了大规模生产与广泛应用,尤其是治疗性单抗,而如何在抗体工艺开发之前筛选出能够分泌物理化学性质均足够稳定的单克隆抗体的细胞株,成为工艺开发的关键起始点。现阶段,在抗体类产品研发及生产企业中,想要得到某细胞株所分泌的单抗的多聚物含量数据,必须依次手工先后完成两步实验:首先收集捕获细胞培养液中的单抗,其次再将捕获到的单抗作为样品,使用其它色谱分析,得出反应单抗理化性质的分析结果,整个过程耗时数天的时间,并伴随着大量人力与组织内协调的需求,费时费力,且由于冗长的样品处理与储存步骤,加大了样品发生降解的概率,降低了分析结果的准确性。
技术实现思路
为了解决上述现有技术中存在的问题,本专利技术的目的在于提供一种通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法,提高了筛选的效率,节省了人力,且由于避免了冗长的样品处理与储存步骤,避免了样品发生降解的可能,提高了分析结果的准确性。为达到上述目的,本专利技术提供如下技术方案:通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法,包括通过二维液相对单抗类产品进行检测,所述单抗类产品是贝伐珠单抗,具体包括以下步骤:(1)第一维液相色谱进行分离:色谱条件为:采用亲和色谱柱,以添加有洗脱剂的pH值为6.3-7.3的缓冲溶液为流动相A,以pH值为2.5-3.5的缓冲溶液为流动相B,流速为0.3-0.5mL/min,检测 ...
【技术保护点】
1.通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法,其特征在于,包括通过二维液相对单抗类产品进行检测,所述单抗类产品是贝伐珠单抗,具体包括以下步骤:(1)第一维液相色谱进行分离:色谱条件为:采用亲和色谱柱,以添加有洗脱剂的pH值为6.3‑7.3的缓冲溶液为流动相A,以pH值为2.5‑3.5的缓冲溶液为流动相B,流速为0.3‑0.5mL/min,检测波长为280nm,梯度洗脱条件为:0~3min,0%B;3~3.1min,0%~100%B;3.1~6min,100%B;6~6.1min,100%~0%B;6.1~10min,0%B;(2)第二维液相色谱进行检测:将第一维液相色谱按照保留时间切割所得的馏分引流到第二维液相色谱,进行检测:色谱条件为:采用尺寸排阻色谱柱,以有添加剂的pH值为5.5‑6.5的缓冲溶液为流动相,流速为0.5‑1.0mL/min,检测波长为280nm,等度洗脱。
【技术特征摘要】
1.通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法,其特征在于,包括通过二维液相对单抗类产品进行检测,所述单抗类产品是贝伐珠单抗,具体包括以下步骤:(1)第一维液相色谱进行分离:色谱条件为:采用亲和色谱柱,以添加有洗脱剂的pH值为6.3-7.3的缓冲溶液为流动相A,以pH值为2.5-3.5的缓冲溶液为流动相B,流速为0.3-0.5mL/min,检测波长为280nm,梯度洗脱条件为:0~3min,0%B;3~3.1min,0%~100%B;3.1~6min,100%B;6~6.1min,100%~0%B;6.1~10min,0%B;(2)第二维液相色谱进行检测:将第一维液相色谱按照保留时间切割所得的馏分引流到第二维液相色谱,进行检测:色谱条件为:采用尺寸排阻色谱柱,以有添加剂的pH值为5.5-6.5的缓冲溶液为流动相,流速为0.5-1.0mL/min,检测波长为280nm,等度洗脱。2.根据权利要求1所述的通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述尺寸排阻色谱柱的规格为2.1×150mm,填充粒径为1.7μm。3.根据权利要求1所述的通过二维液相对单抗类产品细胞株进行高通量筛选的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述尺寸排阻色谱柱的规格为...
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