一种同时测定禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药残留的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时测定禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药残留的方法，包括如下步骤：S1.称取待测样品，通过QuEChERs进行分散提取，上清液过滤后即得待测试样，绘制基质标准曲线；S2.将S1中所得待测试样经过液相色谱串联质谱同时测定6种拟除虫菊酯类农药的残留量，以保留和离子碎片丰度比时间定性，定量离子峰面积外标法定量；本发明专利技术通过对禽蛋样品进行QuEChERS净化，有效除去样品中的干扰测定的基质，空白样品基质配标，利用液相色谱串联三重四级杆质谱以保留和离子碎片丰度比时间定性，定量离子峰面积外标法定量同时测定6种拟除虫菊酯农药残留量。经过优化后，鸡蛋中目标农药化合物回收率达到77.1%～109.4%，24h内精密度和稳定性测试RSD≤15%，线性范围在0.005mg/kg～0.200mg/kg之间。

A Simultaneous Method for the Determination of Six Pyrethroid Pesticide Residues in Eggs

The invention discloses a method for simultaneous determination of six pyrethroid pesticides residues in poultry eggs, including the following steps: S1. Samples to be measured are weighed, dispersed and extracted by QuEChERs, samples to be tested are filtered and matrix standard curves are drawn after supernatant is filtered; S2. Six pyrethroid pesticides residues in S1 are simultaneously determined by liquid chromatography tandem mass spectrometry. Qualitative analysis of retention and ion fragment abundance ratio time and quantitative determination of ion fragment abundance ratio time by external standard method of ion peak area; The invention purifies the egg sample by QuEChERS, effectively removes the interfering matrix in the sample, matches the blank sample matrix, uses liquid chromatography tandem triple quadruple bar mass spectrometry to qualitative analysis of retention and ion fragment abundance ratio time, and quantifies the ion peak area external standard method. Six pyrethroid pesticide residues were determined simultaneously. After optimization, the recovery rate of target pesticide compounds in eggs reached 77.1%~109.4%. RSD of precision and stability test within 24 hours was less than 15%. The linear range was between 0.005 mg/kg and 0.200 mg/kg.

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药残留的方法
本专利技术涉及化学检测
，更具体地，涉及一种同时测定禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药残留的方法。
技术介绍
在家禽饲养，例如蛋鸡饲养过程中，母鸡会遭受寄生虫、虱子、螨类等病原物的侵害，从而对鸡生长发育均有不同程度的危害，导致的产蛋量下降。为了治疗这些疾病，鸡农通常会使用杀虫剂杜绝疾病蔓延；目前，鸡农常用的杀虫剂有以氟虫腈为首报道的杀虫剂外，更多还会使用到拟除虫菊酯类农药，用来兑水稀释喷撒消毒。拟除虫菊酯类农药是目前应用广泛的一类的仿生合成杀虫剂，其结构或生物活性与天然除虫菊类似。此类农药过去被认为高效、低毒、杀虫谱广，用来代替有机氯农药和其他剧毒长残留杀虫剂，其中，生物苄呋菊酯、氟胺氰菊酯、甲氰菊酯、苯醚菊酯、胺菊酯及醚菊酯已在家禽的外寄生虫(如：虱、螨、蜱、臭虫)、其他害虫(如：蚊、苍蝇)以及生活在鸡舍垫料中的一些昆虫的防治中得到了广泛应用。然而杀虫剂经食物链会进入鸡蛋、鸡肉当中，此外，由于环境的污染，也可能经过禽饲料进入禽类养殖食物链中，最终对人体造成危害，因此建立检测禽类鸡蛋中上述六种拟除虫菊酯类农药就显得十分必要。现有的文献和专利大多集中在植物源性食品的研究，动物源性食品中农药的测定方法的研究主要集中在有机氯和有机磷等农药，而拟除虫菊酯类农药的测定方法研究较少，且主要采用气相色谱-质谱联用的方法，液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪测定的方法较少(陈中祥,战培荣,覃东立,等.气相色谱-质谱法测定水产品中氟胺氰菊酯残留量[J].水产学杂志,2013,26(4):29-32.；沈燕,刘贤进,孙星,等.陈中祥,战培荣,覃东立,等.气相色谱-质谱法测定水产品中氟胺氰菊酯残留量[J].水产学杂志,2013,26(4):29-32.；邓武剑,吴卫东,赵旭,等.气相色谱-三重四极杆质谱法快速检测鸡蛋中氟虫腈及其代谢物[J].色谱,2018,36(6):547-551.；王秀丽.气相色谱法测定鸡蛋中有机氯农药残留[J].家禽科学,2005(1):34-35.)，而同时在鸡蛋中检测生物苄呋菊酯、氟胺氰菊酯、甲氰菊酯、苯醚菊酯、胺菊酯及醚菊酯这6种拟除虫菊酯类农药残留的方法还未见报道。液液萃取法和固相萃法取常用于样品中有机农药的前处理净化。但在禽蛋中，由于油脂、蛋白质含量较高，在萃取后还需要再除油脂、蛋白，因而使前处理的操作更加繁琐复杂，难以适用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服上述现有的禽蛋类样品前处理存在的缺陷和不足，提供一种QuEChERs分散萃取净化禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药的方法。本专利技术的第二个目的是针对现有技术中缺少检测禽蛋中拟除虫菊酯类方法的缺陷，提供一种利用液相色谱串联三重四级杆质谱同时测定禽蛋中生物苄呋菊酯、氟胺氰菊酯、甲氰菊酯、苯醚菊酯、胺菊酯及醚菊酯这6种拟除虫菊酯类农药残留的方法，可根据保留时间和离子丰度比值进行定性，定量离子进行定量，提高方法的准确度。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：一种QuEChERs分散萃取净化禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药的方法，包括如下步骤：S1.预处理：禽蛋去壳，将蛋清与蛋黄搅拌均匀，得待测样品；S2.提取：取待测样品，加入1％乙酸酸化乙腈提取液、氯化钠，混匀离心；S3.分散萃取净化：取S2上清液，加入C18和PSA的复合分散萃取填料，混匀、离心；所述6种拟除虫菊酯类农药为生物苄呋菊酯、氟胺氰菊酯、甲氰菊酯、苯醚菊酯、胺菊酯及醚菊酯。本专利技术针对鸡蛋中含有的脂肪、胆固醇以及蛋白质等可能产生基质效应物质，会干扰液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪对拟除虫菊酯类农药的分析，分别通过对比C18柱、PSA、Si和ALN分散萃取净化后的脂肪酸组成和浓缩后残留物剩余分量，分别找出了两种鸡蛋中6种拟除虫菊酯类农药较好的净化填料：C18和PSA；其中，碳十八烷基硅烷键合硅胶(C18)填料对非极性的组分具有吸附作用，能有效去除低极性杂质和高级脂肪酸酯类等大分子基质干扰物；N-丙基乙二胺(PSA)能有效地去除脂肪酸和有机酸。针对鸡蛋蛋白含量高，乙腈极性强，既能有效提取拟除虫菊酯农药，又能沉淀蛋白，通过乙酸、乙酸铵等调节，给方法提供弱酸等缓冲盐体系，提高拟除虫菊酯类农药的提取效率。通过对比乙腈、1％乙酸酸化乙腈、乙酸铵+乙腈(1g/20mL)三种提取剂对拟除虫菊酯类农药的提取效果，找到一种鸡蛋中拟除虫菊酯类农药较好的提取溶剂：1％乙酸酸化乙腈。再有，以1％乙酸酸化乙腈作为提取溶剂，C18和C18+PSA复合净化填料对鸡蛋中6种拟除虫菊酯类农药回收率进行对比分析，结果表明以C18+PSA作为分散萃取净化填料，对于鸡蛋中6种拟除虫菊酯类农药提取效率最佳。与传统的固相萃取方式相比，分散萃取净化试剂使用量少、快速，且能针对鸡蛋选择合适的净化方案，有效消除特殊样品的基质干扰。解决了鸡蛋按照常规检测方法出现回收率偏低的问题。优选地，S2中所述1％乙酸酸化乙腈提取液的体积是待测样品质量的2～4倍。优选地，S4中所述上清液与C18、PSA的质量体积比为每1mL上清液中加0.1gC18和0.1gPSA。一种同时测定禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药残留的方法，包括如下步骤：S1.按上述方法对待测样品进行预处理，上清液氮吹浓缩过滤后即得待测试样，空白样品基质配标；S2.将S1中所得待测试样经过液相色谱串联质谱同时测定6种拟除虫菊酯类农药的残留量，以保留和离子碎片丰度比时间定性，定量离子峰面积外标法定量；所述气相色谱条件为：色谱柱IntersiLODSC18；进样量：2μL；流速：0.4mL/min；梯度洗脱，流动相为体积百分比(5～90％)：(10％～95％)的A液和B液组成，A液为含0.1％甲酸的甲醇溶液，B液为含0.1％甲酸和0.5mmol/L乙酸铵的甲醇溶液；洗脱程序为梯度洗脱；所述梯度洗脱程序为：起始比例A相为90％，B相为10％，维持1min；1～3min，A相降至5％，B相升至95％，维持至4.5min；4.5～5.5min，A相升至90％，B相降至10％，维持至6min；所述质谱条件为：电喷雾离子源，正离子扫描(ESI+)；扫描方式：多反应监测(MRM)；离子源温度：150℃；脱溶剂温度450℃；脱溶剂气流量：1000L/Hr；锥孔气流量：20L/hr；毛细管电压0.5kV；所述6种拟除虫菊酯类农药为生物苄呋菊酯、氟胺氰菊酯、甲氰菊酯、苯醚菊酯、胺菊酯及醚菊酯。优选地，S1所述空白样品基质配标为称取不含6种拟除虫菊酯类农药的阴性样品，按照待测样品的提取方法提取得到提取液，将提取液与标准品溶液混合而成，用高效液相色谱串联质谱法测定6种拟除虫菊酯类农药与空白样品基质混合标准工作溶液中各农药组分的提取离子峰面积，以浓度为横坐标，以提取离子峰面积为纵坐标，绘制出6种拟除虫菊酯类农药的标准工作曲线。本专利技术检测方法为：高效液相色谱串联质谱法测定禽蛋QuEChERs分散萃取净化液中的6种农药残留量，记录提取离子峰面积，基质外标法定量，得到所述禽蛋样品提取净化液中6种农药的测定值；再将所述测定值带入到定量计算公式中，最终得到禽蛋样品中待测6种拟除虫菊酯类农药残留量；定量计算公式：w＝(p×v×f)/m，式中：w为样品中待测6种拟除虫菊酯类农药残本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种QuEChERs分散萃取净化禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.预处理：禽蛋去壳，将蛋清与蛋黄搅拌均匀，得待测样品；S2.提取：取待测样品，加入1%乙酸酸化乙腈提取液、氯化钠，混匀离心；S3.分散萃取净化：取S2上清液，加入C18和PSA的复合分散萃取填料，混匀、离心；所述6种拟除虫菊酯类农药为生物苄呋菊酯、氟胺氰菊酯、甲氰菊酯、苯醚菊酯、胺菊酯及醚菊酯。

【技术特征摘要】
1.一种QuEChERs分散萃取净化禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.预处理：禽蛋去壳，将蛋清与蛋黄搅拌均匀，得待测样品；S2.提取：取待测样品，加入1%乙酸酸化乙腈提取液、氯化钠，混匀离心；S3.分散萃取净化：取S2上清液，加入C18和PSA的复合分散萃取填料，混匀、离心；所述6种拟除虫菊酯类农药为生物苄呋菊酯、氟胺氰菊酯、甲氰菊酯、苯醚菊酯、胺菊酯及醚菊酯。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中所述1%乙酸酸化乙腈提取液的体积是待测样品质量的2～4倍。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S4中所述上清液与C18、PSA的质量体积比为每1mL上清液中加0.1gC18和0.1gPSA。4.一种同时测定禽蛋中6种拟除虫菊酯类农药残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.按权利要去1～3任一项所述方法对待测样品进行预处理，上清液氮吹浓缩过滤后即得待测试样，空白样品基质配标；S2.将S1中所得待测试样经过液相色谱串联质谱同时测定6种拟除虫菊酯类农药的残留量，以保留和离子碎片丰度比时间定性，定量离子峰面积外标法定量；所述液相色谱条件为：色谱柱IntersiLODSC18；进样量：2μL；流速：0.4mL/min；梯度洗脱，流动相为体积百分比（5～90%）：（10%～95%）的A液和B液组成，A液为含0.1%甲酸的甲醇溶液，B液为含0.1%甲酸和0.5mmol/L乙酸铵...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹小彦，蓝梦哲，周九林，李金连，周敏，
申请(专利权)人：广州广电计量检测股份有限公司，广电计量检测湖南有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44