The invention discloses a method for analyzing the digestibility of protein-polysaccharide complex based on liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). The method is as follows: digestion of protein solution and protein-polysaccharide complex solution in simulated gastric juice in vitro; denaturation of digested protein and protein-polysaccharide complex, removal of low molecular weight polypeptide fragments by ultrafiltration tube, and use of large fragments of polypeptide retained in ultrafiltration tube to further complete water using endonuclease with clear digestion site of the second enzyme besides pepsin. Several polypeptide fragments were obtained. Finally, the composition and abundance of polypeptide were determined by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). The digestibility of pepsin was determined according to the polypeptide abundances of the second type of proteinase and pepsinized peptide segments. Furthermore, the binding sites of proteins and polysaccharides were deduced according to the high abundance of polypeptides in the protein-polysaccharide complexes of the two peptide segments.
【技术实现步骤摘要】
基于液质联用技术分析蛋白-多糖复合体消化率的方法
本专利技术属于分析方法
，具体涉及一种基于液相色谱-质谱联用技术分析蛋白-多糖复合体消化率的方法。
技术介绍
蛋白饮料类是我国国标GB/T10789-2015饮料通则中规定的一大类饮料产品。是指以乳或乳制品，或其他动物来源的可食用蛋白，或含有一定蛋白含量的植物的果实、种子或种仁等为原料，添加或不添加其他事物原辅料和(或)食品添加剂，经加工活发酵制成的液体饮料。蛋白饮料具有热量低、富含蛋白质等特点，近年来已成为大众关注的健康饮品，是新兴饮料市场的主角。以乳清蛋白饮料为例，因其有利于减脂、增肌受到了广泛的关注。蛋白类饮料制备过程中，尤其是在蛋白质浓度较高的情况下易产生沉淀的现象。其解决思路之一是加入可食用多糖，使其与蛋白形成可溶性复合体。以乳清蛋白饮料为例，食用菌多糖、卡拉胶、果胶以及壳聚糖等多糖与蛋白形成的可溶性复合体溶液中。对于蛋白饮料来说，适当降低蛋白的消化速率有助于提高饱腹感和满足感，因此对于蛋白-多糖饮料的消化率的研究非常重要。目前该领域的研究并没有充分开展，少数的研究使用的分析方式较为单一，主要以体外...
【技术保护点】
1.一种基于液质联用技术分析蛋白‑多糖复合体消化率的方法，该方法为：步骤1，配制蛋白溶液和多糖溶液，将多糖溶液和蛋白溶液混合，调节pH值至2‑6之间，得到蛋白‑多糖复合体溶液；步骤2，配制模拟胃液，对前述配制的蛋白溶液以及蛋白‑多糖复合体溶液进行消化；步骤3，经模拟胃液消化后的蛋白溶液组以及蛋白‑多糖复合体溶液组，分别加入蛋白变性剂进行变性处理，然后采用除胃蛋白酶外的第二种蛋白酶分别进一步水解所述蛋白溶液组以及蛋白‑多糖复合体溶液组，得到若干多肽片段；步骤4，采用液相色谱‑质谱联用分析前述水解后获得的若干多肽片段，根据蛋白数据库中乳清蛋白所包含的各种蛋白质的序列数据，获得所...
【技术特征摘要】
1.一种基于液质联用技术分析蛋白-多糖复合体消化率的方法，该方法为：步骤1，配制蛋白溶液和多糖溶液，将多糖溶液和蛋白溶液混合，调节pH值至2-6之间，得到蛋白-多糖复合体溶液；步骤2，配制模拟胃液，对前述配制的蛋白溶液以及蛋白-多糖复合体溶液进行消化；步骤3，经模拟胃液消化后的蛋白溶液组以及蛋白-多糖复合体溶液组，分别加入蛋白变性剂进行变性处理，然后采用除胃蛋白酶外的第二种蛋白酶分别进一步水解所述蛋白溶液组以及蛋白-多糖复合体溶液组，得到若干多肽片段；步骤4，采用液相色谱-质谱联用分析前述水解后获得的若干多肽片段，根据蛋白数据库中乳清蛋白所包含的各种蛋白质的序列数据，获得所述多肽片段的质谱响应强度和序列信息；步骤5，分别将蛋白-多糖复合体溶液组以及蛋白溶液组获得的多肽片段的质谱响应强度相除后取以2为底的对数作为定量数值，每组重复三次实验并进行双样本t检验，并将FDR0.05，定为确定两组显著性差异的阈值；对每条多肽而言，其定量数值大于等于1，同时p值小于0.05，则蛋白-多糖复合体溶液组中的二次水解肽段显著多于蛋白溶液组；定量数值小于等于-1，同时p值小于0.05，则蛋白-多糖复合体溶液组中的二次水解肽段显著少于蛋白溶液组；若定量数值小于1且大于-1，则该肽段在不同组别无显著性差异。2.如权利要求1所述的一种基于液质联用技术分析蛋白-多糖复合体消化率的方法，其特征在于：所述步骤1中，蛋白溶液中蛋白质与水的质量比为15％-25％，多糖溶液中多糖与水的质量比为2-5％。3.如权利要求2所述的一种基于液质联用技术分析蛋白-多糖复合体消化率的方法，其特征在于：所述多糖溶液和蛋白溶液以1:1体积比混合。4.如权利要求1所述的一种基于液质联用技术分析蛋白-多糖复合体消化率的方法，其特征在于，所述步骤2的具体过程为：1)模拟胃液的配制：在水中添加HCl和胃蛋白酶，HCl的浓度为0.04-0.06M，胃蛋白酶的浓度为0.4-0.6μg/L，溶液体系的pH值为1.4-1.6；2)含有模拟胃液的离心管置于恒温振荡器中，在35-38℃水浴，振荡5-10分钟，然后分别加入蛋白溶液、蛋白-多糖复合体溶液5-15毫升，在35-38℃水浴，振荡10-180分钟，用NaOH溶液调节反应液的pH至6-8，结束消化反应。5.如权利要求1所述的一种基于液质联用技术分析蛋白-多糖复合体消化率的方法，其特征在于，所述步骤3的具体过程为：1)经模拟胃液消化后的蛋白溶液组以及蛋白-多糖复合体溶液组，分别加入蛋白变性剂，80-95℃加热4-6分钟，置于冰上冷却；2)将变性后的蛋白碎片使用膜孔径为3-15kDa的超滤管，离心过滤分级，离心条件为3000-5000g，30-50分钟；保留截留在...
【专利技术属性】
技术研发人员：纪超凡，赵铁峰，胡静，税东宁，李胜杰，祁立波，林心萍，梁会朋，董秀萍，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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