本发明专利技术属于天然药物化学及其质量控制领域，涉及一种测定酸性糖可溶性盐重均分子量和含量的方法，包括使用酸性糖可溶性盐中的金属离子含量对分子筛色谱结合多角度激光散射检测器SEC‑MALS测定酸性糖的重均分子量和含量结果进行校正。利用本发明专利技术方法可更快速、准确地测定酸性糖可溶性盐的重均分子量和含量。
A Method for Determining the Weight Average Molecular Weight and Content of Acid Sugar Soluble Salt
The invention belongs to the field of natural pharmaceutical chemistry and quality control, and relates to a method for determining the weight average molecular weight and content of acid sugar soluble salt, including correcting the results of molecular sieve chromatography combined with multi-angle laser scattering detector SEC MALS in determining the weight average molecular weight and content of acid sugar soluble salt by using metal ion content in acid sugar soluble salt. The method of the invention can determine the weight average molecular weight and content of acid sugar soluble salt more quickly and accurately.
【技术实现步骤摘要】
一种测定酸性糖可溶性盐重均分子量和含量的方法
本专利技术属于天然药物化学以及其质量控制领域，具体地涉及酸性糖类物质的重均分子量和含量的测定和质量控制方法。
技术介绍
多糖是天然来源的主要的生物活性化合物，可来自植物、真菌等。多糖的分子量大，结构复杂，因此，多糖的分子量的准确测定是一个挑战。目前，中国药典中，高效液相凝胶渗透色谱法(GelPermeationChromatography,GPC)是测定分子量的常规做法，其是按照排阻色谱的原理，不同分子量的多糖按照其大小顺序先后流出色谱柱，通过一系列不同分子量标准多糖与保留时间的相关性测得的校正曲线并计算相应的待测多糖的相对分子量。但该常规方法必须要有相应的多糖标准品而有一定的局限性。此外，多糖和寡糖含量测定的常用方法为硫酸咔唑法，该方法首先以浓度及单糖标准品的显色做标准曲线，再在标准曲线上读出待测样品的含量。但是酸性糖的单糖甘露糖醛酸并没有标准品出售，若以葡萄糖醛酸为标准品，其与酸性糖的结构及显色效率存在差异，不能对酸性糖进行精确定量。近年来出现的尺寸排阻色谱联用多角度激光散射(Size-ExclusionChromatography/Multi-AngleLaserLightScattering，SEC-MALS)测定样品绝对重均分子量、分子量分布和含量在业界引起了广泛的关注。本领域中有研究人员将MALS和尺寸排阻色谱(SEC)联用，不必依赖泵的流速、校正曲线及其他错误的假设，即可直接求得分子量及分子量分布等数据。MALS利用色谱柱分离出的样品在不同角度的光散射量，由示差折光(RI)检测器得到洗脱液浓度及dn/dc值计算得到质量，综合两者即可计算出各个切片的分子量。该方法不需标准品校准，克服了样品与标准品的化学组成、分子结构及大小不同带来的相对分子量测定的误差。已有研究者采用这一方法测定了壳聚糖、透明质酸的平均分子量(MonicaFee,NeilErrington,KorneliaJumel,etal.CorrelationofSEC/MALLSwithultracentrifμgeandviscometricdataforchitosans.EurBiophysJ(2003)32:457～464；SanyaHokputsa,KorneliaJumel,CatherineAlexander,etal.ComparisonofmolecularmassdeterminationofHyaluronicacidusingSEC/MALLSandsedimentationequilibrium.EurBiophysJ(2003)32:450～456)，还有研究者采用该方法对天然中性多糖进行定量，(Kit-LeongCheong,DingtaoWu,JingZhao,etal.Arapidandaccuratemethodforthequantitativeestimationofnaturalpolysaccharidesandtheirfractionsusinghighperformancesizeexclusionchromatographycoupledwithmulti-anglelaserlightscatteringandrefractiveindexdetector.JournalofChromatographyA(2015)1400:98～106)。目前欧洲药典已经采用此方法作为羟乙基淀粉重均分子量及分子量分布的测定方法(Europeanpharmacopoeia8.0,p3307-3308,starcheshydroxyethyl)。综上，SEC-MALS可以测定中性多糖重均分子量及含量。
技术实现思路
但是，本专利技术的专利技术人发现，用SEC-MALS方法测定酸性糖类时常常无法准确获得的测定结果。为此，本专利技术的一个方面提供了一种准确且高效的酸性糖类重均分子量和含量的测定方法，包含以下步骤：(1)使用SEC-MALS测定酸性糖可溶性盐样品中酸性糖的重均分子量和含量；(2)测定酸性糖可溶性盐中成盐的金属离子的含量，由此对步骤(1)酸性糖的重均分子量和含量测定结果进行校正，即步骤(1)测得的重均分子量和含量分别除以酸性糖可溶性盐中糖链部分所占的质量分数，进而分别得到酸性糖可溶性盐的重均分子量和含量。在本专利技术的一个实施方案中，酸性糖可溶性盐的重均分子量和含量应在其SEC-MALS结果的基础上按如下公式1、公式2进行校正：以上公式(1)中：Mw1为SEC-MALS法直接得到酸性糖重均分子量(Da)；A为酸性糖可溶性盐中金属离子的含量；以上公式(2)中：X为图谱处理软件计算得到的质量(μg)；Y为进样的质量(μg)；A为酸性糖可溶性盐中金属离子的含量。利用本专利技术提供的测定方法，可以精确测定酸性糖可溶性盐的重均分子量和含量，成功解决了糖化学领域中酸性糖可溶性盐重均分子量测定偏差大、含量定量不准的问题。附图说明图1所示为溶剂(A)和甘露寡糖二酸钠盐(B)的SEC-ICP-MS谱图和甘露寡糖二酸钠盐的SEC-MALS示差谱图(C)。图2所示为氢型肝素(HeparinH，2A)肝素钠(Heparinsodium，2B)、依诺肝素钠(Enoxaparinsolium，2C)和那屈肝素钙(Nadroparincalcium，2D)的示差图(RI，虚线)、Na离子SEC-ICP-MS图(Na，实线)和Ca离子SEC-ICP-MS图(Ca，实线)。图3所示为甘露寡糖二酸五糖钠的总离子流图(A)、质谱图(B)和甘露寡糖二酸五糖H型理论质量数列表(C)。具体实施方式定义除非另外说明，否则所有的百分数、比例、比率或份数按重量计。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练技术人员所熟知的熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。如本文所用，术语“dn/dc”指折光指数增量，可使用本领域常用的方法进行测定(刘莉莉等.医用透明质酸钠凝胶的绝对分子量及其分布的测定方法[J]药物分析杂志2013，33(8)，1435-1438)；也可从本领域公开的相关技术文献中查询获得。如本文所用，术语“SEC-MALS”指尺寸排阻色谱联用多角度激光散射(Size-ExclusionChromatography/Multi-AngleLaserLightScattering)，近年来被广泛应用于测定样品绝对重均分子量、分子量分布和含量，具体测定方法可采用本领域公知的方法(MonicaFee,NeilErrington,KorneliaJumel,etal.CorrelationofSEC/MALLSwithultracentrifugeandviscometricdataforchitosans.EurBiophysJ(2003)32:457～464；SanyaHokputsa,KorneliaJumel,CatherineAlexander,etal.ComparisonofmolecularmassdeterminationofHyaluronicacidusingSEC/MALLSandsed本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种酸性糖可溶性盐的重均分子量和含量的测定方法，其特征在于，所述测定方法包含以下步骤：(1)使用SEC‑MALS测定酸性糖可溶性盐样品中酸性糖的重均分子量和含量；(2)测定酸性糖可溶性盐中成盐的金属离子的重量百分含量A，由此对步骤(1)酸性糖的重均分子量和含量测定结果进行校正，所述校正按公式1、公式2计算：重均分子量
【技术特征摘要】
1.一种酸性糖可溶性盐的重均分子量和含量的测定方法，其特征在于，所述测定方法包含以下步骤：(1)使用SEC-MALS测定酸性糖可溶性盐样品中酸性糖的重均分子量和含量；(2)测定酸性糖可溶性盐中成盐的金属离子的重量百分含量A，由此对步骤(1)酸性糖的重均分子量和含量测定结果进行校正，所述校正按公式1、公式2计算：重均分子量以上公式(1)中：Mw1为SEC-MALS法直接得到酸性糖重均分子量(Da)；A为酸性糖可溶性盐中金属离子的含量；以上公式(2)中：X为图谱处理软件计算得到的质量；Y为进样的质量；A为酸性糖可溶性盐中金属离子的含量。2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述酸性糖可溶性盐...
【专利技术属性】
技术研发人员：张真庆，曾洋洋，
申请(专利权)人：上海绿谷制药有限公司，苏州大学，
类型：发明
国别省市：上海,31
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