褐藻胶寡糖二酸的组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种褐藻胶寡糖二酸组合，其包含具有式(Ⅲ)的甘露糖醛二酸或其药学上可接受的盐，其中n为选自1‑9的整数，m选自0，1或2，m’选自0或1，并且其中n＝1‑5的褐藻胶寡糖二酸的重量总和占所述组合总重量的60％以上，古罗糖醛酸的重量总和占所述组合物重量的50％以下。

Composition of alginate oligosaccharide diacid

【技术实现步骤摘要】
褐藻胶寡糖二酸的组合物
本专利技术涉及通过生物活性筛选的方法得到褐藻胶寡糖二酸的最佳组合物，该方法采用老年痴呆动物模型评价褐藻胶寡糖的不同聚合度及其配比对生物活性的影响。最终筛选到具有最佳生物活性的组合物并通过超滤膜分离的办法制备得到所需的目标物质。
技术介绍
褐藻胶寡糖由于其潜在的药用价值已经受到广泛的重视。褐藻胶寡糖通常以海藻酸为原料经过多步骤制得。在褐藻胶寡糖分子中，有由甘露糖醛酸(D-mannuronicacid)通过β-1，4-糖苷键连接形成的M段、古罗糖醛酸(L-guluronicacid)通过α-1，4-糖苷键连接形成的G段，以及由这两种糖杂合形成的MG段。甘露糖醛酸和古罗糖醛酸的结构式如下(I)式和(II)式所示：褐藻胶寡糖的结构式如下(III)式所示：M段和G段可以从原料海藻酸中分离。通常的方法可以简单描述为：将海藻酸初步降解后得到聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的混合多糖，混合多糖再经酸法沉淀后，可以除去其中一定量的聚古罗糖醛酸。例如，可参见中国专利申请No.98806637.8以及CN02823707.2所披露的方法。制备寡聚甘露糖醛酸的做法如下：将上述得到的M段中间体在酸性条件下加热进一步酸解得到所需分子量范围的小片段甘露糖醛酸聚合物。另外，也有通过氧化降解的办法提升降解效率，同时可以将还原末端氧化为开环的糖二酸，详见耿美玉等人的中国专利申请200580009396.5(专利文献1)及美国专利US8835403B2(专利文献2)。为了方便叙述，专利文献1和2在下文中统称为在先专利，它们以引证的方式全部并入本文。在先专利披露的甘露糖醛二酸的反应过程可通过如下反应方程式(V)表示，即寡聚甘露糖醛酸多糖还原端的甘露糖醛酸C1-位醛基氧化成羧基。在上述氧化转化过程中，常用的氧化剂有碱性硫酸铜溶液，即菲林试剂，在先专利即采用了该氧化方法，具体为：在碱性条件下，将反应底物聚甘露糖醛酸即上文的M段中间体加入硫酸铜溶液中，在沸水浴中反应15分钟至2小时。该法是以Cu2+离子为氧化剂氧化醛基，反应中产生砖红色的氧化亚铜沉淀，这个反应常用于鉴定还原性糖。在先专利公开了甘露寡糖二酸具有抗阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)和抗糖尿病的作用，且聚合度为6的甘露寡糖二酸活性最佳。阿尔茨海默病与II型糖尿病的发病过程与淀粉样蛋白(β-amyloid及amylin)密切相关。淀粉样蛋白聚集以后产生蛋白寡聚体，进一步聚集形成纤维。这些蛋白聚集物有细胞毒性，在细胞内诱导氧化反应损伤线粒体以及引发炎症反应等级联反应，造成大量的神经元和β细胞损伤，最终导致阿尔茨海默病与II型糖尿病的发生。甘露寡糖二酸靶向淀粉样蛋白并拮抗其诱导的级联反应，由此具有预防和治疗阿尔茨海默病与II型糖尿病的作用。为了获得在先专利公开的具有抗阿尔茨海默病和抗糖尿病的作用甘露寡糖二酸，需将原料海藻酸中的古罗糖醛酸除去，而海藻酸中古罗糖醛酸的含量通常在30％以上，最高可达70％左右，因此为了获得高纯度的甘露寡糖二酸，实际生产成本非常之高。
技术实现思路
本专利技术的第一个方面涉及一种褐藻胶寡糖二酸的组合物，其包含具有式(IV)的甘露糖醛酸和/或古罗糖醛酸或其药学上可接受的盐：其中n为选自1-9的整数，m选自0，1或2，m’选自0或1，并且其中，n＝1-5的褐藻胶寡糖二酸的重量总和占所述组合总重量的60％以上；古罗糖醛酸二酸的重量总和占所述组合物重量的50％以下。本专利技术的另一个方面涉及一种药物组合物或保健品，其包含上文所述的褐藻胶寡糖二酸的组合物。本专利技术的其他方面还涉及褐藻胶寡糖二酸的组合物在治疗选自老年性痴呆、帕金森病、炎症、疼痛、糖尿病或血管性痴呆等疾病中的应用。特别地，本专利技术的褐藻胶寡糖二酸组合物是不同聚合度的甘露糖醛酸和古洛糖醛酸的混合物，其主要成分是由甘露糖醛酸通过β-1，4-糖苷键连接形成的M段、古罗糖醛酸通过α-1，4-糖苷键连接形成的G段，以及由这两种糖杂合形成的MG段，聚合度为2至10的寡糖。已知甘露糖醛二酸具有一定的抗阿尔茨海默病和抗糖尿病的药理活性。活性最高的糖为5-8糖，特别是6糖。但是，专利技术人发现，聚合度为2至10的甘露糖醛酸和古洛糖醛酸的寡糖二酸混合物，同样具有抗阿尔茨海默病和抗糖尿病的药理活性，但前提是需要将古洛糖醛酸的含量控制在一定范围内。也即，本专利技术的褐藻胶寡糖二酸组合物可以以大大降低生产成本来制备，在实际生产中更容易实现，更易于实现工业化大生产。附图说明图1中间体核磁图谱。图2是产品A中二糖、三糖和四糖的质谱图。图3是产品A中五糖、六糖和七糖的质谱图。图4是产品A中八糖、九糖和十糖的质谱图。图5表示产品A的核磁图谱。图6表示产品B的核磁图谱。图7表示产品C的核磁图谱。图8表示产品D的核磁图谱。图9表示不同寡糖组合物及甘露糖醛二酸六糖对AD动物穿越平台次数的影响；图中横坐标的编号分别对应的样品为：i：对照组；ii：模型组；iii：产品A；iv：产品B；v：产品C；vi：产品D；vii：甘露糖醛二酸六糖。图10表示不同寡糖组合物及甘露糖醛二酸六糖对AD动物游泳路程的影响；其中横坐标附图标记同图9。图11表示不同寡糖组合物及甘露糖醛二酸六糖对PD动物第11天爬下时间的影响；其中横坐标附图标记同图9。图12表示不同寡糖组合物及甘露糖醛二酸六糖对PD动物第11天潜伏期的影响；其中横坐标附图标记同图9。图13a和13b表示不同寡糖组合物及甘露糖醛二酸六糖对小鼠炎性肠炎的治疗作用；图中横坐标附图标记同图9。图14表示不同寡糖组合物、甘露糖醛二酸六糖对糖尿病小鼠餐后血糖的影响；图中横坐标附图标记同图9。图15表示寡不同糖组合物、甘露糖醛二酸六糖对醋酸所致小鼠扭体反应潜伏期的影响；图中横坐标的编号分别对应的样品为：i：模型组；ii：产品A；iii：产品B；iv：产品C；v：产品D；vi：甘露糖醛二酸六糖。图16表示不同寡糖组合物、甘露糖醛二酸六糖对醋酸所致小鼠扭体反应次数的影响；其中横坐标附图标记同图15。图17表示不同寡糖组合物、甘露糖醛二酸六糖对硝酸甘油致偏头痛大鼠挠头次数的影响；其中横坐标附图标记同图9。图18表示不同寡糖组合物、甘露糖醛二酸六糖对电刺激三叉神经节致偏头痛大鼠三叉神经脊束核尾侧c-fos阳性细胞数的影响；其中横坐标附图标记同图9。图19表示不同寡糖组合物、甘露糖醛二酸六糖对双侧颈总动脉结扎致血管性痴呆小鼠避暗实验潜伏期的影响；其中横坐标附图标记同图9。图20表示不同寡糖组合物、甘露糖醛二酸六糖对双侧颈总动脉结扎致血管性痴呆小鼠避暗实验错误次数的影响；其中横坐标附图标记同图9。图21表示不同寡糖组合物、甘露糖醛二酸六糖对双侧颈总动脉结扎致血管性痴呆小鼠水迷宫实验逃避潜伏期的影响；其中横坐标附图标记同图9。图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种褐藻胶寡糖二酸组合物，其包含具有式(IV)的甘露糖醛酸和/或古罗糖醛酸或其药学上可接受的盐：/n

【技术特征摘要】
1.一种褐藻胶寡糖二酸组合物，其包含具有式(IV)的甘露糖醛酸和/或古罗糖醛酸或其药学上可接受的盐：



其中n为选自1-9的整数，m选自0，1或2，m’选自0或1，
并且其中，
n＝1-5的褐藻胶寡糖二酸的重量总和占所述组合总重量的60％以上；
其中，古罗糖醛酸的重量总和占所述组合物重量的50％以下。


2.根据权利要求1的褐藻胶寡糖二酸组合物，其中m+m’＝1或2的褐藻胶寡糖二酸的重量总和不低于所述组合总重量的50％以上，优选60％-90％，更优选70％-90％。


3.根据权利要求2的褐藻胶寡糖二酸组合物，其中m+m’＝1的褐藻胶寡糖二酸的重量总和不低于所述组合总重量的10％，优选30-40％。


4.根据权利要求1的褐藻胶寡糖二酸组合物，其中m+m’＝2的褐藻胶寡糖二酸的重量总和不低于所述组合总重量的10％，优选30-50％。


5.根据权利要求1的褐藻胶寡糖二酸组合物，其中n＝1-5的褐藻胶寡糖二酸的重量总和占所述组合总重量的80-95％。


6.根据权利要求1的褐藻胶寡糖二酸组合物，其中n＝1-3的褐藻胶寡糖二酸的重量总和占所述组合总重量的20-70％。


7.根据权利要求1的褐藻胶寡糖二酸组合物，其中n＝1-3的褐藻胶寡糖二酸的重量总和与n＝4-7的褐藻胶寡糖二酸重量总和的比例在1.0-3.5之间。


8.根据权利要求7的褐藻胶寡糖二酸组合物，其中n＝1-3的褐藻胶寡糖二酸的重量总和与n＝4-7的褐藻胶寡糖二酸重量总和的比例在1.0-3.0之间。

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【专利技术属性】
技术研发人员：耿美玉，张真庆，晋迎申，肖中平，丁健，
申请(专利权)人：上海绿谷制药有限公司，中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31