一种芽孢杆菌液体复合微生物菌肥及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种芽孢杆菌液体复合微生物菌肥及其制备方法，属于农业微生物技术领域，以重量计，其组份配比如下：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis SEM‑9菌液40‑60重量％、营养复合体20‑40重量％、硫酸锰为1‑3重量％、亚甲基双萘磺酸钠为4‑8重量％，余量为水。本发明专利技术的芽孢杆菌液体复合微生物菌肥中枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis SEM‑9菌株来源于蚕沙，同时利用其发酵生产蚕沙液体生物菌肥，既能够给Bacillus subtilis SEM‑9菌株提供一个接近原生态的生长环境，提高活芽孢数量，也能更有利于蚕沙中各种营养物质的释放。本发明专利技术的复合微生物菌肥用于青瓜、小白菜等农作物，能够显著的提高作物的产量和对枯萎病的抵抗能力。

A Bacillus liquid compound microbial fertilizer and its preparation method

The invention discloses a Bacillus subtilis liquid compound microbial fertilizer and its preparation method, which belongs to the field of agricultural microbial technology. Its components are as follows: Bacillus subtilis SEM 9 bacterial liquid 40 60 weight, nutrient complex 20 40 weight, manganese sulfate 1 3 weight, sodium methylenedinaphthalene sulfonate 4 8 weight, residual water. \u3002 The Bacillus subtilis SEM 9 strain in the liquid compound microbial fertilizer of Bacillus subtilis of the invention is derived from silkworm sand, and the liquid biological fertilizer of silkworm sand is produced by fermentation of the strain, which can provide a growth environment close to the original ecology, increase the number of living spores, and be more conducive to the release of various nutrients in silkworm sand. The compound microbial bacterial fertilizer of the invention is used for cucumber, pakchoi and other crops, and can significantly improve the yield of crops and the resistance to Fusarium wilt.

【技术实现步骤摘要】
一种芽孢杆菌液体复合微生物菌肥及其制备方法
本专利技术涉及一种芽孢杆菌液体复合微生物菌肥及其制备方法，特别涉及一种芽孢杆菌BacillussubtilisSEM-9液体复合微生物菌肥及其制备方法，属于复合微生物菌肥领域。
技术介绍
枯萎病是一种世界性的植物真菌土传性病害，是造成作物减产的主要微生物病害之一。尖孢镰刀菌(FusariumoxysporumSchl)是其最主要的病原菌之一，寄主范围广。化学药物是防治枯萎病的有效快捷的方法，但化学药物使用导致土壤退化、破坏生态平衡，甚至危害人类健康。随着社会发展及政府引导，可持续发展的生态农业已成为主流趋势，选育抗病品种、轮作和间作及生物防治等成了防治枯萎病的主要手段。缺乏抗性基因、耗时长、稳定性差是抗病品种选育的主要缺点；轮作和间作能够有效地防治枯萎病，但是经济效益低。因此，开发既能保证作物连作又能防治枯萎病的生物防治方法是目前枯萎病防治的研究热点。目前已有研究从蚕沙中筛选到具有解磷、钾等无机元素，并具有拮抗尖孢镰刀菌的微生物，例如2017年9月12号公布的专利号为2017104163586的中国专利技术专利公开了一株来源于蚕沙的枯草芽孢杆菌菌株(BacillussubtilisSEM-9)。复合微生物菌肥是指含有大量植物根际促生菌(PGPR)的生物肥料，植物根际促生菌(PGPR)能合成植物营养物质或激素、抑制植物病原菌生长、释放环境胁迫、改善微量元素的存在形式、促进肥料的吸收；因而能促进植物生长、提高农作物产量。蚕粪便、桑叶残渣及蚕座中的垫料统称蚕沙，是蚕商产业的主要副产品，因其粗蛋白、碳水化合物等有机营养物质及磷、钾等无机元素含量丰富，是农作物基肥的首选，但直接将蚕沙作为基肥会导致对其营养利用不充分，例如磷、钾等无机元素的利用不充分，造成浪费。因此，提供一种兼具高效防治作物枯萎病和促长增产的液体复合微生物菌肥就成为该
急需解决的技术难题。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是以蚕沙作为发酵底物并利用枯草芽孢杆菌菌株(BacillussubtilisSEM-9)开发出一种高效防治作物枯萎病、促长增产的液体复合微生物菌肥。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案达到的：一种芽孢杆菌液体复合微生物菌肥，以重量计，其组份配比如下：枯草芽孢杆菌BacillussubtilisSEM-9菌液40％-60％、营养复合体20％-40％、硫酸锰为1％-3％、亚甲基双萘磺酸钠为4％-8％，余量为水；所述枯草芽孢杆菌BacillussubtilisSEM-9菌液通过发酵得到；其发酵配方如下，以质量浓度配比计，蚕沙10～90g/L、玉米淀粉20～30g/L、豆粕粉15～25g/L、(NH4)2SO4为0.5～1.5g/L、CaCO3为3～6g/L、K2HPO4为0.2～0.3g/L、MgSO4·7H2O为0.15～0.25g/L、MnSO4·H2O为0.15～0.25g/L、NaCl2为10-30g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；所述营养复合体为氨基酸、黄腐酸、海藻酸、腐植酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、尿素氨基酸螯合钙或乙二胺四乙酸钠镁中的一种或两种以上任意比例的混合。优选地，所述蚕沙的含量为30～70g/L。优选地，所述蚕沙的含量为50～70g/L。优选地，所述营养复合体中，黄腐酸占总菌肥量的7重量％、腐殖酸占总菌肥量的12重量％、乙二胺四乙酸二钠镁占总菌肥量的3重量％、磷酸氢二钾占总菌肥量的4重量％、磷酸二氢钾占总菌肥量的4重量％。本专利技术的另一目的是提供上述芽孢杆菌液体复合微生物菌肥的制备。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案达到的：一种芽孢杆菌液体复合微生物菌肥的制备，其步骤如下：(1)菌种活化：将4℃斜面保存的BacillussubtilisSEM-9菌种(保藏号是GDMCCNO.60619，广东省微生物菌种保藏中心保藏)转接于LB培养基平板，32～37℃培养60～72h；(2)一级种子制备：挑选平板上具有固定形态的单菌落于含有50～100mL的LB液体培养基中(250mL三角瓶)，在32～37℃、150～200rpm/min条件下恒温培养14～20h，得到一级种子液；(3)二级种子液制备：将一级种子液按1～4％的接种量接入种子罐，发酵温度为32～37℃，400rpm/min，通气量按与发酵罐体积1:1的比值通气，罐压0.06～0.07Mpa，培养7～10h，得到二级种子液；(4)BacillussubtilisSEM-9发酵菌液制备：1)发酵液制备：采用发酵配方如下：蚕沙10～90g/L、玉米淀粉20～30g/L、豆粕粉15～25g/L、(NH4)2SO4为0.5～1.5g/L、CaCO3为3～6g/L、K2HPO4为0.2～0.3g/L、MgSO4·7H2O为0.15～0.25g/L、MnSO4·H2O为0.15～0.25g/L、NaCL2为10-30g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；2)将步骤(3)制备的二级种子液按3～5％的接种量接入发酵罐，罐压0.06～0.07Mpa，通气量按与发酵体积1:1的比值通气，400rpm/min，32～37℃恒温发酵18～22h，得到BacillussubtilisSEM-9发酵菌液；(5)营养复合体的制备氨基酸、黄腐酸、海藻酸、腐植酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、尿素氨基酸螯合钙或乙二胺四乙酸钠镁中的一种或两种以上任意比例的混合，得到营养复合体；(6)蚕沙复合微生物菌肥的制备将步骤(4)得到的BacillussubtilisSEM-9发酵菌液40-60重量％与步骤(5)制备的营养复合体20-40重量％混合，再加入重量1-3％％的增效剂硫酸锰以及4-8％重量％的助剂亚甲基双萘磺酸钠或缩聚萘磺酸盐分散剂D-425，余量为水，得到蚕沙复合微生物菌肥。优选地，所述BacillussubtilisSEM-9发酵菌液为50重量％、营养复合体30重量％、硫酸锰为2.5重量％、亚甲基双萘磺酸钠为5重量％，余量为水。所述30重量％的营养复合体包括：占总菌肥量7重量％的黄腐酸、占总菌肥量12重量％的腐殖酸、占总菌肥量3重量％的乙二胺四乙酸二钠镁、分别占总菌肥量4重量％的磷酸氢二钾和磷酸二氢钾。优选地，所述步骤(4)之步骤1)发酵液制备中，蚕沙的含量为30～70g/L。优选地，所述步骤(4)之步骤1)发酵液制备中，蚕沙的含量为30～50g/L。本专利技术的另一目的是提供上述芽孢杆菌液体复合微生物菌肥的应用。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案达到的：上述芽孢杆菌液体复合微生物菌肥的应用，直接灌根。具体的施用方法：将本专利技术的芽孢杆菌液体复合微生物菌肥稀释500～1000倍后，用于灌根，施用量为：1000～2000g/亩。本专利技术的有益效果是：本专利技术将发酵液中的BacillussubtilisSEM-9活芽孢数量提高到9～15×109cfu/mL。蚕沙中含有丰富的粗蛋白、碳水化合物和水溶性维生素等生物活性物质，同时蚕沙也含有丰富的P、K等无机元素，其常作为中药、饲料及农用基肥来使用；本专利技术将蚕沙作为液体发酵底物进行发酵，生产液体复合微生物菌肥，充分释放了蚕沙中的有机和无机营养物质。本专利技术将B本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芽孢杆菌液体复合微生物菌肥，以重量计，其组份配比如下：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis SEM‑9菌液40‑60重量％、营养复合体20‑40重量％、硫酸锰为1‑3重量％、亚甲基双萘磺酸钠为4‑8重量％，余量为水；所述枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis SEM‑9菌液通过发酵得到；其发酵配方如下，以质量浓度配比计，蚕沙10～90g/L、玉米淀粉20～30g/L、豆粕粉15～25g/L、(NH4)2SO4 0.5～1.5g/L、CaCO3 3～6g/L、K2HPO4 0.2～0.3g/L、MgSO4·7H2O 0.15～0.25g/L、MnSO4·H2O 0.15～0.25g/L、NaCl2 10～30g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP‑101适量，余量为水；所述营养复合体为氨基酸、黄腐酸、海藻酸、腐植酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、尿素氨基酸螯合钙或乙二胺四乙酸钠镁中的一种或两种以上任意比例的混合。

【技术特征摘要】
1.一种芽孢杆菌液体复合微生物菌肥，以重量计，其组份配比如下：枯草芽孢杆菌BacillussubtilisSEM-9菌液40-60重量％、营养复合体20-40重量％、硫酸锰为1-3重量％、亚甲基双萘磺酸钠为4-8重量％，余量为水；所述枯草芽孢杆菌BacillussubtilisSEM-9菌液通过发酵得到；其发酵配方如下，以质量浓度配比计，蚕沙10～90g/L、玉米淀粉20～30g/L、豆粕粉15～25g/L、(NH4)2SO40.5～1.5g/L、CaCO33～6g/L、K2HPO40.2～0.3g/L、MgSO4·7H2O0.15～0.25g/L、MnSO4·H2O0.15～0.25g/L、NaCl210～30g/L、pH＝6.5～7.5、聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；所述营养复合体为氨基酸、黄腐酸、海藻酸、腐植酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、尿素氨基酸螯合钙或乙二胺四乙酸钠镁中的一种或两种以上任意比例的混合。2.根据权利要求1所述芽孢杆菌液体复合微生物菌肥，其特征在于：所述蚕沙的含量为30～70g/L。3.根据权利要求1所述芽孢杆菌液体复合微生物菌肥，其特征在于：所述蚕沙的含量为50～70g/L。4.根据权利要求1所述芽孢杆菌液体复合微生物菌肥，其特征在于：所述营养复合体中，黄腐酸占总菌肥量的7重量％、腐殖酸占总菌肥量的12重量％、乙二胺四乙酸二钠镁占总菌肥量的3重量％、磷酸氢二钾占总菌肥量的4重量％、磷酸二氢钾占总菌肥量的4重量％。5.权利要求1-4中任一项所述芽孢杆菌液体复合微生物菌肥的制备，其步骤如下：(1)菌种活化：将4℃斜面保存的BacillussubtilisSEM-9菌种转接于LB培养基平板，32～37℃培养60～72h；(2)一级种子制备：挑选平板上具有固定形态的单菌落于含有50～100mL的LB液体培养基中，32～37℃、150～200rpm/min条件下恒温培养14～20h，得到一级种子液；(3)二级种子液制备：将一级种子液按1～4％的接种量接入种子罐，发酵温度为32～37℃，通气，罐压0.06～0.07Mpa，培养7～10h，得到二级种子液；(4)BacillussubtilisSEM-9发酵菌液制...

【专利技术属性】
技术研发人员：支胡钰，李登勇，代燕丽，吴日章，
申请(专利权)人：广东植物龙生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44