核酸稳定试剂、试剂盒及其使用方法技术

描述了用于稳定生物细胞的核酸的试剂、组合物、试剂盒及其使用方法。稳定试剂可以准备在生物细胞内的核酸用于储存并保护代表性核酸群用于随后的分离和分析。

Nucleic acid stabilizing reagent, kit and its application

Reagents, compositions, kits and their use methods for stabilizing nucleic acids in biological cells are described. Stable reagents can prepare nucleic acids in biological cells for storage and protection of representative nucleic acid groups for subsequent separation and analysis.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸稳定试剂、试剂盒及其使用方法相关申请的交叉引用本申请是一项非临时申请，根据35U.S.C119(e)要求2016年3月31日提交的第62/316,514号美国临时申请的权益，其公开内容通过引用整体并入本文。
技术介绍
在生物科学和相关领域中，在从生物细胞中隔离核酸群体用于分析之前，将生物细胞储存数小时至过夜至数天的时间段可能是有用的。期望被分析的核酸群或其至少一部分代表储存前细胞的状态。优选使由于储存引起的核酸表达的变化最小化。本公开的一些实施例包括用于稳定生物细胞内的核酸用于后续隔离的试剂和方法，有利地降低由于干预储存而改变的核酸表达的发生率。
技术实现思路
本文描述了一种用于稳定生物细胞内的核酸的试剂盒，其中试剂盒包括至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、至少一种核糖核酸转录抑制剂、和选自电子传递链抑制剂和电子传递链解偶联剂的至少一种电子传递链剂。在另一方面，描述了一种用于稳定生物细胞中的核酸的方法，包括使生物细胞与至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、至少一种核糖核酸转录抑制剂、和包含电子传递链抑制剂和/或电子传递链解偶联剂的至少一种电子传递链剂接触，其中所述接触进行足以稳定核酸群的一段时间，从而将生物细胞转化为稳定的生物细胞。至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、至少一种核糖核酸转录抑制剂、包含电子传递链抑制剂和/或电子传递链解偶联剂的至少一种电子传递链剂可以是核酸稳定试剂的组分，其可以是本文所述的任何核酸稳定试剂。在各种实施例中，该方法可以进一步包括在存在至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、至少一种核糖核酸转录抑制剂和至少一种电子传递链剂中的每一种的情况下将稳定的生物细胞储存任何时间段，如本文所述。在一些实施例中，储存步骤可以在低于20℃的温度下进行。在各种实施例中，储存步骤可以在0℃至约4℃的温度下进行。在另一方面，描述了一种用于稳定位于具有封壳的微流体设备内的生物细胞中的核酸的方法，包括以下步骤：将生物细胞置于微流体设备的封壳内，其中封壳包括流动区域和至少一个腔室，并且至少一个腔室流体连接到流动区域，其中流动区域和至少一个腔室被配置为容纳流体介质；以及使生物细胞与至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、至少一种核糖核酸转录抑制剂、和包含电子传递链抑制剂和/或电子传递链解偶联剂的至少一种电子传递链剂接触，其中所述接触进行足以稳定生物细胞中核酸群的一段时间，从而将生物细胞转化为稳定的生物细胞。至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、至少一种核糖核酸转录抑制剂、包含电子传递链抑制剂和/或电子传递链解偶联剂的至少一种电子传递链剂可以是核酸稳定试剂的组分，其可以是本文所述的任何核酸稳定试剂。至少一个腔室可以是隔绝围栏。流动区域可以是微流体通道。附图说明图1A示出了根据本公开的一些实施例的与微流体设备和相关联控制设备一起使用的系统的示例。图1B和1C示出了根据本公开的一些实施例的微流体设备。图2A和2B示出了根据本公开的一些实施例的隔离围栏。图2C示出了根据本公开的一些实施例的详细的隔绝围栏。图2D-F示出了根据本公开的一些其他实施例的隔绝围栏。图2G示出了根据本公开的实施例的微流体设备。图2H示出了根据本公开的实施例的微流体设备的涂覆表面。图3A示出了根据本公开的一些实施例的与微流体设备和相关联控制设备一起使用的系统的具体示例。图3B示出了根据本公开的一些实施例的成像设备。图4是从示例1的五种储存制备方法的每个重复中回收的RNA和DNA的量的图示。图5A是从示例1中作为裂解对照(LC)处理的细胞中回收的cDNA的大小分布的图示。图5B是从用示例1中的本公开的稳定试剂(In)的实施例处理的细胞中回收的cDNA的大小分布的图示。图5C是从未用示例1中的本公开的稳定试剂(NA)的实施例处理的细胞中回收的cDNA的大小分布的图示。图6是用稳定试剂(In)处理的细胞与示例1中的裂解对照样本(LC)相比的差异表达(DE)的表格表示。图7是与在示例1中没有稳定试剂(NA)的4℃下储存的细胞相比，储存在-80℃的裂解对照细胞(LC)的差异表达(DE)的表格表示。图8是用于随后添加示例1的稳定试剂(WIn)并在4℃下储存的洗涤到PBS中的细胞与储存在-80℃的裂解对照细胞相比(LC)的差异表达(DE)的表格表示。图9是用于在4℃下储存的没有添加(W)的洗涤到PBS中的细胞与示例1的储存在-80℃的裂解对照样本(LC)相比的差异表达(DE)的表格表示。具体实施方式本说明书描述了本公开的示例性实施例和应用。然而，本公开不限于这些示例性实施例和应用，也不限于示例性实施例和应用在此处操作或描述的方式。此外，附图可以示出简化或部分视图，并且附图中的元件的尺寸可能被夸大或者不成比例。另外，当本文使用术语“在......上”、“附接到”、“连接到”、“耦合到”或类似的词时，一个元件(例如，材料、层、衬底等)可以“在”另一元件“上”、“附接到”、“连接到”或“耦合到”另一元件，不管该一个元件是否直接在另一元件上、附接到、连接到或耦合到该另一元件，还是在该一个元件和该另一个元件之间存在一个或更多个中间元件。此外，在提及元素列表(例如，元素a、b、c)时，这样的提及意图包括列出的元素中的任何一个、少于所有列出的元素的任何组合、以及/或所有列出的元素的组合。说明书中的章节划分仅为了便于查看，并不限制所讨论元素的任何组合。如本文所用，“基本上”意指足以用于预期目的。因此，术语“基本上”允许绝对或完美的状态、尺寸、测量、结果等的微小的、不显著的变化，例如本领域普通技术人员所预期的，但不会显著影响整体性能。当关于数值或参数或可以以数值表示的特征来使用时，“基本上”意味着在百分之十内。如本文所用，术语“多个”意味着不止一个。如本文所用，术语“多个”可以是2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个。如本文所用，术语“设置”在其含义内包括“位于”。如本文所用，“微流体设备”或“微流体装置”是包括被配置成保持流体的一个或更多个离散微流体回路的设备，每个微流体回路包括：流体互连的回路元件，包括但不限于区域、流动路径、通道、腔室和/或围栏；以及被配置为允许流体(以及可选地，悬浮在流体中的微物体)流动进入和/或离开微流体设备的至少两个端口。通常，微流体设备的微流体回路将包括至少一个微流体通道和至少一个腔室，并且将保持小于约1mL的流体体积，例如，小于约750、500、250、200、150、100、75、50、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3或2μL。在某些实施例中，微流体回路保持约1-2、1-3、1-4、1-5、2-5、2-8、2-10、2-12、2-15、2-20、5-20、5-30、5-40、5-50、10-50、10-75、10-100、20-100、20-150、20-200、50-200、50-250或50-300μL。如本文所用，“纳米流体设备”或“纳米流体装置”是一种具有微流体回路的微流体设备，所述微流体回路包含至少一个回路元件，所述回路元件被配置为容纳少于约1μL体积的流体，例如小于约750、500、250、200、150、100、75、50、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1nL或更少。通常，纳流体设备将包括多个回路元件(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于稳定生物细胞内核酸群的试剂盒，包括：至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂；至少一种核糖核酸转录抑制剂；以及至少一种电子传递链剂，包括电子传递链抑制剂和/或电子传递链解偶联剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.31 US 62/316,5141.一种用于稳定生物细胞内核酸群的试剂盒，包括：至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂；至少一种核糖核酸转录抑制剂；以及至少一种电子传递链剂，包括电子传递链抑制剂和/或电子传递链解偶联剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包含第二蛋白质翻译抑制剂。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中所述第二蛋白质翻译抑制剂是可逆蛋白质翻译抑制剂。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其中与所述不可逆蛋白质翻译抑制剂相比，所述第二蛋白质翻译抑制剂是快速作用的。5.根据权利要求2所述的试剂盒，其中所述第二蛋白质翻译抑制剂是细胞膜可渗透的。6.根据权利要求2所述的试剂盒，其中所述第二蛋白质翻译抑制剂是重氮氧化物、戊二酰亚胺抗生素和/或吐根生物碱。7.根据权利要求2所述的试剂盒，其中所述第二蛋白质翻译抑制剂是环己酰亚胺。8.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂是细胞膜可渗透的。9.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂是氨基糖苷类抗生素、D-半乳糖胺和/或依米丁。10.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种核糖核酸转录抑制剂是细胞膜可渗透的。11.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种核糖核酸转录抑制剂是CDK9抑制剂、金丝菌素、硫藤黄素、鹅膏霉素和/或雷公藤甲素。12.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种核糖核酸转录抑制剂是不可逆抑制剂。13.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种核糖核酸转录抑制剂是雷公藤甲素。14.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种电子传递链剂具有可逆活性。15.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种电子传递链剂是细胞膜可渗透的。16.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述电子传递链剂是电子传递链抑制剂。17.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述电子传递链剂是叠氮化钠。18.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、所述至少一种核糖核酸转录抑制剂和所述至少一种电子传递链剂中的至少一种以溶液提供。19.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述试剂盒不包含RNA酶抑制剂。20.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包含蛋白酶抑制剂。21.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包含裂解缓冲液。22.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、所述至少一种核糖核酸转录抑制剂和所述至少一种电子传递链剂中的多于一种以主混合物提供。23.一种稳定生物细胞中核酸群的方法，包括以下步骤：使生物细胞与至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、至少一种核糖核酸转录抑制剂、和包含电子传递链抑制剂和/或电子传递链解偶联剂的至少一种电子传递链剂接触，其中所述接触进行足以稳定核酸群的一段时间，从而将生物细胞转化为稳定的生物细胞。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述生物细胞同时与所述至少一种不可逆蛋白质翻译抑制剂、所述至少一种核糖核酸转录抑制剂和所述至少一种电子传递链剂中的每一种接触。25.根据权利要求23所述的方法，还包括：在所述至少一种不可逆蛋白质翻译...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·M·麦克尤恩，
申请(专利权)人：伯克利之光生命科技公司，
类型：发明
国别省市：美国,US