微流体装置中T淋巴细胞的选择和克隆制造方法及图纸

提供了微流体装置中T淋巴细胞的选择和克隆。具体而言，提供了在微流体装置中扩增T淋巴细胞的方法，其包括将一个或多个T淋巴细胞引入到微流体装置中；使所述细胞与活化剂接触；及通过微流体装置灌注培养基达一段时间足以使一个或多个T淋巴细胞经历至少一轮有丝细胞分裂的时间。扩增可以是非特异性的或抗原特异性的。性的。

【技术实现步骤摘要】
微流体装置中T淋巴细胞的选择和克隆
[0001]本申请是申请号为2017800242591，申请日为2017年3月16日，专利技术名称为“微流体装置中T淋巴细胞的选择和克隆”的中国专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请基于35 U.S.C.
§
119要求2016年3月17日提交的美国专利申请号62/309,454、2016年4月22日提交的美国专利申请号62/326,667、2016年10月24日提交的美国专利申请号62/412,212以及2017年3月13日提交的美国专利申请号62/470,744的权益，其每一个的全部内容均通过引用并入本文。
[0004]领域
[0005]本领域一般性地涉及用于在微流体环境中选择和扩增T淋巴细胞的方法、系统和装置。
[0006]专利技术背景
[0007]免疫疗法是使用患者的免疫系统帮助对抗疾病的迅速发展的领域。已经评估了多种对抗癌症的免疫疗法策略，包括刺激患者自身的免疫系统以攻击癌细胞和从外部来源施用免疫系统组分。例如，被设计用于体内攻击癌细胞的单克隆抗体已经单独或在基因工程构建体中施用。此外，已经研究了各种T细胞疗法。自体同源T细胞疗法涉及从受试者获得T细胞、离体扩增T细胞和将扩增的T细胞重新引入到受试者体内。嵌合抗原受体T细胞(CAR
‑
T)疗法涉及将T细胞基因工程化，以在其表面上表达含有嵌合抗体的融合蛋白，其靶向所讨论的癌症并允许T细胞杀死癌细胞。两种类型的T细胞疗法都具有优势。然而，疗法仍需要进一步改进。
[0008]自体同源T细胞疗法和CAR
‑
T疗法二者中的关键问题之一是缺乏以选择性扩增具有最高肿瘤杀灭潜力的T细胞的方式离体扩增T细胞的方法。本公开内容提供了离体选择性扩增T细胞的解决方案。本公开还提供了使用根据本文公开的方法离体扩增的T细胞来治疗患有癌症的受试者的改进的方法。

技术实现思路

[0009]公开了在微流体装置(或“芯片”)中扩增T淋巴细胞的方法。微流体装置可以包括微流体通道和与通道流体连接的隔离坞(sequestration pen)，其中隔离坞被配置为支持T淋巴细胞的培养和扩增。在某些实施方案中，微流体装置可以是纳米流体装置。隔离坞可以具有例如约0.5
×
106至约5.0
×
106立方微米或约0.5
×
106至约2.0
×
106立方微米的体积。此外，微流体装置可以具有超过一个微流体通道和与每个微流体通道流体连接的多个隔离坞，其中多个隔离坞中的每一个被配置为支持T淋巴细胞的培养和扩增。可以调节隔离坞的一个或多个表面。
[0010]扩增T淋巴细胞的方法可以包括：将一个或多个T淋巴细胞引入到微流体装置中的隔离坞中；以及使一个或多个T淋巴细胞与活化剂接触。在一些实施方案中，将20个或更少、10个或更少、6至10个、5个或更少、约5个、约4个、约3个、约2个或1个T淋巴细胞引入到隔离坞中。如果微流体装置包括多个隔离坞，则可以将一个或多个T淋巴细胞(例如，20个或更
少、10个或更少、6至10个、5个或更少、约5个、约4个、约3个、约2个或1个T细胞)引入到一个或多个隔离坞中的每一个中。扩增T淋巴细胞的方法可以进一步包括通过微流体装置的微流体通道灌注培养基。灌注可以是连续的或间歇的，并且可以持续达一段时间足以使引入到隔离坞(或多个隔离坞)中的一个或多个T淋巴细胞经历至少一轮有丝细胞分裂。
[0011]在某些实施方案中，一个或多个T淋巴细胞来自由受试者的外周血分离的T淋巴细胞群。在其他实施方案中，一个或多个T淋巴细胞来自由受试者的实体瘤样品分离的T淋巴细胞群。实体瘤样品可以是细针抽吸物(FNA)或肿瘤活组织检查样本(例如，核心活组织检查样本)。实体瘤可以是乳腺癌、泌尿生殖系统癌症(例如，源自泌尿道(例如肾脏(例如，肾细胞癌))、输尿管、膀胱或尿道的癌症)；男性生殖道的癌症(例如，睾丸癌、前列腺癌，或者精囊、精管或阴茎的癌症)；或女性生殖道的癌症(例如，卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、阴道癌或输卵管癌))、神经系统的癌症(例如，神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤)、肠癌(例如，结肠直肠癌)、肺癌、黑素瘤或其他类型的癌症。在具体的实施方案中，实体瘤可以是髓样乳腺癌、间皮瘤或黑素瘤。
[0012]在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD3
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD3
+
CD4
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD3
+
CD8
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD45RA
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD45RO
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CCR7
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD62L
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD45RA
+
/CD7
+
/CD62L
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD45RO
+
/CD7
+
/CD62L
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含PD
‑1+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含CD137
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群富含PD
‑1+
/CD137
+ T淋巴细胞。
[0013]在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CD4
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CD8
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CD45RO
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CD45RA
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CCR7
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CD62L
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CD45RO
+
/CD7
+
/CD62L
+
T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CD45RA
+
/CD7
+
/CD62L
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失PD
‑1+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失CD137
+ T淋巴细胞。在一些实施方案中，T淋巴细胞群缺失PD
‑1+
/CD137
+ T淋巴细胞。
[0014]在一些实施方案中，T淋巴细胞群中的主要细胞类型是初始T细胞记忆T细胞，例如中枢记忆T细胞(T
CM
)或效应记忆T细胞(T
EM
)或效应T细胞(T
EFF
)。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种在微流体装置中扩增T淋巴细胞的方法，所述微流体装置具有流动路径和与流动路径流体连接的隔离坞，其中所述流动路径包括微流体通道，其中所述隔离坞包括分离区域和将分离区域流体连接到通道的连接区域，并且其中隔离坞的分离区域是微流体通道的未扫描区域，所述方法包括：将一个或多个T淋巴细胞引入到微流体装置中的隔离坞中；使一个或多个T淋巴细胞与活化剂接触；通过微流体装置的流动路径灌注培养基达足以使被引入到隔离坞中的一个或多个T淋巴细胞经历扩增的一段时间；以及从微流体装置输出扩增的T淋巴细胞，其中隔离坞的至少一个内表面包含涂层材料，其中所述涂层材料共价结合到隔离坞的至少一个内表面，并且其中涂层材料包括含有亚烷基醚部分、糖部分、氨基酸部分或其组合的聚合物。2.如权利要求1所述的方法，其中隔离坞具有约5
×
105至约5
×
106立方微米的体积，和/或其中连接区域包括通向微流体通道的具有范围为约20微米至约100微米的宽度Wcon的近端开口和通向所述分离区域的远端开口，并且其中所述连接区...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y，
申请(专利权)人：伯克利之光生命科技公司，
类型：发明
国别省市：