本发明专利技术公开了一种通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其对映异构体的方法，以三(3,5‑二甲苯基)‑氨基甲酸酯直链淀粉为手性色谱柱的填料，以正己烷：低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液包含浓度为0.05～0.5％的三氟乙酸。该方法操作简单，可以快速准确地分离、测定出雷替曲塞原料药或其制剂中的对映异构体杂质，从而保证雷替曲塞的质量可控性。
Separation and Determination of Retitraxel and Its Enantiomers by High Performance Liquid Chromatography
The present invention discloses a method for separating and determining the enantiomers of ratitrexer by high performance liquid chromatography, in which tris (3,5 dimethylphenyl) carbamate amylose starch is used as the filler of chiral chromatographic column, n-hexane: low alcohol solution is used as mobile phase, and the low alcohol solution contains trifluoroacetic acid with a concentration of 0.05-0.5%. The method is simple in operation, and can quickly and accurately separate and determine enantiomeric impurities in the raw material or its preparations of ranititrazepam, so as to ensure the quality control of ranititrazepam.
【技术实现步骤摘要】
通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其对映异构体的方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其对映异构体的方法。
技术介绍
雷替曲塞是由英国的RoyalMarsden医院的癌症研究署与Zeneca共同合作开发的药物。它是一种胸腺核苷酸合成酶抑制剂，属于叶酸的衍生物，用于治疗晚期直肠结肠癌患者。1996年在英国首次上市，商品名Tomudex，同年在法国等国家上市。其作为晚期结直肠癌的一线治疗药物，具有毒副作用小、给药方便、价格便宜等优点，在中国的需求量大。雷替曲塞的结构式如下：雷替曲塞的结构中有一个手性碳中心，在化学合成中会产生R-对映异构体(式I)。R-对映异构体无药效作用，在雷替曲塞合成中作为杂质进行控制。对于手性药物而言，对光学异构体进行质量控制是药学研究工作的重点和难点。文献“注射用雷替曲塞的质量控制”(中国医院药学杂志，2009，29(12):1003-1005)公开了以缓冲液(含0.03mol/L磷酸氢二钾及0.03mol/L三乙胺，磷酸调pH7.2)-甲醇(68：32)为流动相用高效液相色谱法测定雷替曲塞制剂中有关物质的方法。文献“高效液相色谱法测定雷替曲塞的含量”(抗感染药学，2008，5(1)：19-21)公开了以甲醇：0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(42：58，用磷酸调节pH值2.5)为流动相用高效液相色谱法测定雷替曲塞含量及有关物质的方法。文献“高效液相色谱法测定大鼠血浆中雷替曲塞浓度”(药物分析杂志，2005，25(7):778-780)公开了以1％醋酸-甲醇-乙腈(60：25：15)为流动相用高效液相色谱法测定大鼠血浆中雷替曲塞浓度的方法。文献CN101221147A公开了一种毛细管电泳法检测雷替曲塞对映异构体的方法。目前尚未见文献报道通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其对映异构体的方法。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞与其对映异构体的方法。本专利技术是通过以下技术手段实现的：一种通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞与其对映异构体的方法，以三(3,5-二甲苯基)-氨基甲酸酯直链淀粉为填料的手性色谱柱，以正己烷：低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液包含体积百分比浓度为0.05～0.5％的三氟乙酸。上述所述的低级醇选自以下溶剂：甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇中的一种或多种，优选乙醇。上述所述的方法，其中流动相正己烷-低级醇溶液的体积比为40：60～60：40，优选55：45。上述所述的方法，三氟乙酸的体积百分比浓度优选为0.1％。本专利技术的方法具体可包括以下步骤：(1)取雷替曲塞或雷替曲塞制剂适量，用甲醇或乙醇溶解样品，配制成每1mL中含雷替曲塞50～250μg的溶液；(2)设置流动相速度为0.5～2.0mL/min，检测波长为210～310nm，柱温为20～35℃；(3)取步骤(1)的样品溶液5～20μL，注入高效液相色谱仪，完成雷替曲塞与其对映异构体的分离测定。其中，流动相速度优选1.0mL/min，检测波长优选226nm，柱温优选35℃。本专利技术的有益效果：本专利技术的方法能够有效分离测定雷替曲塞及其对映异构体，分离效果好，雷替曲塞与其对映异构体的分离度达4.5，理论塔板数按雷替曲塞峰计算为12501。本专利技术的方法解决了分离测定雷替曲塞与其对映异构体的问题，可快速、准确地分离、检测出雷替曲塞或其制剂中的对映异构体杂质，从而保证了雷替曲塞及其制剂的质量可控。附图说明图1：实施例1空白溶液的色谱图图2：实施例1对映异构体定位溶液的色谱图图3：实施例1系统适用性溶液的色谱图图4：实施例1雷替曲塞供试品溶液的色谱图图5：参考例1系统适用性溶液的色谱图图6：参考例2系统适用性溶液的色谱图图7：参考例3系统适用性溶液的色谱图图8：参考例4系统适用性溶液的色谱图具体实施方式以下实施例仅对本
技术实现思路
作进一步说明，并不限定本专利技术。雷替曲塞供试品及对映异构体为公司自制。实施例1专属性试验仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪检测器：VWD工作站：Empower3software色谱柱：DaicelCHIRALPAKAD-H(4.6mm×250mm，5μm)检测波长：226nm流速：1.0ml/min柱温：35℃进样量：10μL流动相：正己烷：0.1％三氟乙酸乙醇溶液(55:45)空白：甲醇雷替曲塞对映异构体对照品贮备液：取雷替曲塞对映异构体对照品约12.5mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇约50ml，超声使溶解后，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。(约125μg/mL)雷替曲塞对映异构体定位溶液：精密量取雷替曲塞对映异构体贮备液1.0mL，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。(约1.25μg/mL)供试品溶液：精密称取雷替曲塞约25.0mg，置100mL量瓶中，加甲醇约50mL，超声使溶解后，冷却，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。(约250μg/mL)系统适用性溶液：精密称取雷替曲塞约25.0mg，置100mL量瓶中，加甲醇约50mL，超声使溶解后，冷却，再向其中加入雷替曲塞对映异构体贮备液1.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分析测试：精密量取空白、雷替曲塞对映异构体定位溶液、系统适用性溶液、雷替曲塞供试品溶液各10μL分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，分别见图1、图2、图3、图4。图1表明空白溶液对测定无干扰；图2表明雷替曲塞对映异构体的保留时间为4.531min。图3表明雷替曲塞峰与雷替曲塞对映异构体峰可以完全分开，分离度达3.7，满足分析要求。图4表明在雷替曲塞原料药供试品中未检出对映异构体，其光学纯度符合原料药要求。本法可以用于雷替曲塞的质量监控。实施例2耐用性试验在实施例1的检测色谱条件的基础上改变流动相的比例、柱温、流速、波长等条件，考察对映异构体检测方法的耐用性。溶液配制及测定方法参照实施例3，各色谱条件见下表所示：结果如下表所示：结论：在不同色谱条件下，雷替曲塞峰与对映异构体峰均能达到基线分离，分离度均符合要求，本方法耐用性良好。实施例3检测限试验取雷替曲塞异构体定位溶液用0.1mol/L氢氧化钠水溶液稀释制成一系列低浓度的溶液，分别进样，直至S/N≥3，即为检测限。结果对映异构体的检测限为5.87ng/mL。实施例4加样回收率试验空白：流动相雷替曲塞光学异构体贮备液：精密称取雷替曲塞光学异构体工作对照品约12.5mg，置100ml量瓶中，加甲醇约50ml，超声使溶解后，冷却，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。雷替曲塞光学异构体对照品溶液：精密量取雷替曲塞光学异构体贮备液1.0ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；平行配制2份。供试品溶液：精密称取雷替曲塞约25.0mg，置100ml量瓶中，加甲醇约50ml，超声使溶解后，冷却，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。加标供试品溶液(低浓度)：精密称取雷替曲塞约25.0mg，置100ml量瓶中，加甲醇约50ml，超声使溶解后，冷却，再向其中加入雷替曲塞光学异构体贮备液0.8ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；平行配制3份。加标供试品溶液(中浓度)：精密称取雷替曲塞约25.0mg，置100ml量瓶中，加甲醇约50ml，超本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其对映异构体的方法，其特征在于：以三(3,5‑二甲苯基)‑氨基甲酸酯直链淀粉为手性色谱柱的填料，以正己烷：低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液包含体积百分比浓度为0.05～0.5％的三氟乙酸。
【技术特征摘要】
1.一种通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其对映异构体的方法，其特征在于：以三(3,5-二甲苯基)-氨基甲酸酯直链淀粉为手性色谱柱的填料，以正己烷：低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液包含体积百分比浓度为0.05～0.5％的三氟乙酸。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于低级醇选自以下的一种或多种：甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇，优选乙醇。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述正己烷：低级醇溶液的体积比为40：60～60：40，体积比优选为55：45。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于三氟乙酸的体积百分比浓度为0.1％。5.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：柴雨柱，许建良，储雪原，王足兵，兰公剑，王华萍，徐丹，朱春霞，田舟山，
申请(专利权)人：南京正大天晴制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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