【技术实现步骤摘要】
一种组织多肽抗原TPA检测试剂盒及其制备和使用方法
本专利技术涉及免疫检测分析
，具体涉及一种组织多肽抗原TPA检测试剂盒及其制备和使用方法。
技术介绍
组织多肽抗原(TPA)的分子量17,000-43,000，由B1、B2和C三个亚基组成，其活性主要在B1。TPA主要存在于胎盘和大部分肿瘤组织中，各种恶性肿瘤(卵巢癌、结肠癌、直肠癌、肝细胞癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、子宫内膜癌、睾丸肿瘤等)患者血清TPA的检出率(以>130U/L血清为阳性)可从20％至90％，有人认为高达80％-100％，它的存在与肿瘤发生部位、组织类型均无相关性,,然而在观察疗效上则有较高的敏感性。TPA最早于1957年在恶性肿瘤组织中被发现。目前认为TPA属于细胞骨架蛋白类，与细胞内的中间丝状体，细胞分裂素具同源性。在体外实验中，抗TPA抗体可与细胞分裂素8，18和19起抗原抗体反应。体外培养时有丝分裂期间的增殖细胞TPA分泌活跃，因此血液内TPA水平与细胞分裂增殖程度密切相关，恶性肿瘤细胞分裂，增殖活跃，所以血清中TPA水平增高，临床上常用于迅速增殖的恶性肿瘤的辅助诊断...
【技术保护点】
1.一种组织多肽抗原TPA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：TPA包被板条、TPA标准品及TPA质控品、TPA酶结合物、浓缩洗涤液、发光底物液A和发光底物液B；所述TPA包被板条为包被有抗TPA单克隆抗体的化学发光板，所述抗TPA单克隆抗体为鼠源的单克隆抗体，所述抗TPA单克隆抗体的包被浓度为1‑5μg/mL；所述TPA酶结合物为辣根过氧化酶标记的与包被配对的另一株TPA单克隆抗体，所述TPA酶结合物的浓度按照其与酶结合物稀释液1:2000‑1:3000的比例稀释；所述TPA标准品及TPA质控品分别由TPA标准品和标准品稀释液配制而成，所述TPA标准品的浓度分别为0n...
【技术特征摘要】
1.一种组织多肽抗原TPA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：TPA包被板条、TPA标准品及TPA质控品、TPA酶结合物、浓缩洗涤液、发光底物液A和发光底物液B；所述TPA包被板条为包被有抗TPA单克隆抗体的化学发光板，所述抗TPA单克隆抗体为鼠源的单克隆抗体，所述抗TPA单克隆抗体的包被浓度为1-5μg/mL；所述TPA酶结合物为辣根过氧化酶标记的与包被配对的另一株TPA单克隆抗体，所述TPA酶结合物的浓度按照其与酶结合物稀释液1:2000-1:3000的比例稀释；所述TPA标准品及TPA质控品分别由TPA标准品和标准品稀释液配制而成，所述TPA标准品的浓度分别为0ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL；所述TPA质控品的浓度分别为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL；所述TPA抗体的包被浓度为3μg/mL；所述TPA酶结合物的浓度按照其与酶结合物稀释液1:2500的比例稀释；所述浓缩洗涤液为pH7.4的磷酸盐缓冲液，每1L磷酸盐缓冲液中含有0.1％-0.2％v/v吐温-20和0.4％-0.6％v/vProclin-300；所述发光底物液A为每250ml溶液含有N,O-双三甲硅基乙酰胺2.3-2.6g、三羟甲基氨基甲烷1.3-1.6g、3-氨基邻苯二甲酰肼0.03-0.06和对位碘酚0.006-0.008g；所述发光底物液B为每250ml溶液含有N,O-双三甲硅基乙酰胺2.3-2.6g、三羟甲基氨基甲烷1.3-1.6g和过氧化氢0.15-0.3ml。2.一种组织多肽抗原TPA检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)配制浓缩洗涤液称取NaCl240g、Na2HPO4.12H2O107.4g、NaH2PO4.2H2O8.1g用纯水溶解，再量取1.5mL吐温-20、5mLProclin-300分别放入容量瓶，搅拌均匀，以纯水定容至1000mL，即得浓缩洗涤液；(2)制备TPA包被板条用pH7.4的磷酸盐缓冲液将抗TPA单克隆抗体稀释至浓度为1-5μg/mL作为包被缓冲溶液，按100μL/孔对微孔板进行包被，室温放置3-3.5h后在2～8℃条件下静置24h，将抗TPA单克隆抗体吸附于微孔板上，再用步骤(1)中浓缩洗涤液稀释后进行洗涤、用封闭液进行封闭和保护，经过干燥制得TPA包被板条；(3)配制TPA标准品品和TPA质控品用标准品品稀释液将TPA标准品按比例稀释成0ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的系列浓度，建立定量标准品；用标准品稀释液将T...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨致亭，李庭希，李峰，梁波，杨锋斌，
申请(专利权)人：潍坊市康华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37
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