一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用，该试纸条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，免疫硝酸纤维素膜上设有包被喹诺酮‑牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。本发明专利技术中的试纸条使用所需环境温度为4‑35℃，适合于个人及工厂、食品卫生质检部门等进行喹诺酮成分的快速检测，具有特异性强、灵敏性高、操作简单方便等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用
属于食品安全检测领域，具体涉及一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用。
技术介绍
喹诺酮类是人工合成的抗菌药，常用的药物有诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、氟罗沙星等。可用于治疗禽类的敏感菌和支原体所致的各种感染性疾病，如大肠杆菌病、鸡白痢、禽霍乱等。我国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》规定了喹诺酮类药物禁止使用于禽类产蛋期，故禽蛋不得检出喹诺酮类成分。喹诺酮类药物(quinolones，QNs)是一类新型、高效、广谱的人工合成抗菌药，在人医和兽医临床上都应用广泛。随着QNs在食品动物中大量使用，微生物的耐药性越来越严重，而且残留于食品中的药物会直接危害消费者健康及影响动物性产品的出口贸易，因此，世界各国近年来加强了QNs在动物性食品中的残留监控。在检测QNs残留的标准方法中，欧盟在1994年发布了检测环丙沙星和恩诺沙星在猪肉、熏肉和牛肉中残留的HPLC方法，中国在2003年公布了动物性食品中恩诺沙星和环丙沙星残留检测方法、噁喹酸和氟甲喹在鸡组织和鱼组织的残留检测方法—高效液相色谱法等3种方法。在常规分析方面，曾振灵等建立了9种FQs在鸡蛋中的多残留HPLC检测方法，此检测方法在色谱条件的筛选方面做了很多出色的工作，但只能检测恩诺沙星等呈两性的FQs，而不能检测氟甲喹等呈酸性QNs。Yang等建立了11种QNs在牛奶中的多残留HPLC检测方法，此方法采用了固相萃取净化样品、曲线梯度洗脱和波长变化等技术手段，但检测时间太长。另外，市面上还未发现有检测中药材、中药饮片及食品中，尤其是禽蛋中喹诺酮的快检试剂盒，若采用上述实验方法，操作过程都比较复杂，实验时间长、实验成本高，且并不适用于现场检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用，本专利技术中的检测试纸条及检测方法在检测步骤和检测成本上都有着明显的优势，适合于现场检测。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。本专利技术提出了一种检测喹诺酮类药物的试纸条，包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，免疫硝酸纤维素膜上设有包被喹诺酮-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。本专利技术还提出一种上述试纸条的制备方法，包括以下步骤：将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在衬底上，制得试纸条。本专利技术还提出一种快速检测喹诺酮类药物的试剂盒，包括盒体和检测卡，该检测卡包括壳体和上述的试纸条。本专利技术还提出一种利用上述试剂盒快速检测喹诺酮类药物的方法，包括以下步骤：样品制备：称取样品适量，进行预处理；标准品溶液制备：取喹诺酮标准品适量，用二氯甲烷溶解；待测液制备：向样品或标准品溶液中分别加入稀释液、提取液，充分振荡后离心，吸取离心后的上清液部分于试管中，吹干，再向吹干后的试管中加入复溶液，充分混匀；检测：取待测液滴加入金标微孔中，分析检测结果。本专利技术还提出了一种上述试剂盒在检测中药材、中药饮片及食品中残留的喹诺酮类药物中的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用，本专利技术中的试纸条通过免疫竞争抑制法来定性检测中药材、中药饮片及食品中出现的喹诺酮成分，具有特异性强、灵敏性高、操作简单方便等优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为喹诺酮胶体金检测试纸条示意图。附图标号：1-滤样纸；2-免疫胶体金纸片；3-免疫硝酸纤维素膜；4-吸水纸。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例提供的一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用进行具体说明。本专利技术实施例提供了一种检测喹诺酮类药物的试纸条，包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，免疫硝酸纤维素膜上设有包被喹诺酮-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。本专利技术实施例所提供的试纸条的检测原理：将待检样本滴加于微孔试剂中，混匀后，将试纸条插入孵育后的微孔试剂中，待检样品液与微孔中的金标抗体结合后一起向免疫硝酸纤维素膜扩散；若待检样品液中喹诺酮类药物的含量高，则扩散过程中待检样品液中的喹诺酮类药物可与金标抗体相结合，进而完全封闭金标抗体上喹诺酮类药物的抗原结合点，阻止金标抗体与免疫硝酸纤维素膜上喹诺酮类药物半抗原-牛血清白蛋白复合结合，检测线不显色，而羊抗兔IgG则可与金标抗体结合，质控线显色；若待检样品液中喹诺酮类药物的含量低或无，则金标抗体上的抗原结合位点不能被封闭，进而金标抗体会与免疫硝酸纤维素膜上喹诺酮类药物半抗原-牛血清白蛋白结合，检测线显色，同时羊抗兔IgG也可与金标抗体结合，质控线显色。如果质控线不显色，则试纸失效。本专利技术实施例还提供一种上述试纸条的制备方法，包括以下步骤：将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在衬底上，制得试纸条。在一些实施方式中，免疫胶体金纸片的制备包括以下步骤：制备免疫胶体金溶液；用预处理液浸泡玻璃纤维纸，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂预处理后的玻璃纤维纸，干燥，制得免疫胶体金纸片。在一些实施方式中，免疫胶体金溶液的制备包括以下步骤：用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，获得OD540值为1.9-2.1的免疫胶体金溶液，抗喹诺酮单克隆抗体与胶体金结合的标记浓度为20-30μg/ml，胶体金的粒径为30-40nm，优选的，胶体金的粒径为35nm。本专利技术实施例中的胶体金可以购自市售或者采用下述的两步还原法制备，胶体金的粒径为30-40nm，优选的，胶体金的粒径为35nm。采用本专利技术实施例中的两步还原法，得到胶体金分子呈大小均一的30nm球形颗粒，由于胶体金颗粒大小适中、整体均一，使其与单克隆抗体的结合效率更高、效果更稳定。在一些实施方式中，喷金缓冲液包括以下质量百分比的成分：8～12wt％1.0MTris液，0.2～0.3wt％NaOH，0.2～0.4wt％聚乙二醇30000，0.2～0.4wt％聚乙二醇6000，0.15～0.25wt％牛血清白蛋白，0.1～0.3wt％蔗糖，0.35～0.40wt％酪蛋白，以及0.02～0.08wt％海藻糖，余量为水，且喷金缓冲液pH为8.0±0.05。在一些实施方式中，预处理液包括以下质量百分比的成分：0.3～0.4wt％PVP-30k，6～10wt％蛋白质、双糖以及多糖，余量为水，优选的，预处理本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测喹诺酮类药物的试纸条，所述试纸条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于，所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；所述免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被喹诺酮‑牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。

【技术特征摘要】
1.一种检测喹诺酮类药物的试纸条，所述试纸条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于，所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；所述免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被喹诺酮-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。2.一种根据权利要求1所述的试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述滤样纸、所述免疫胶体金纸片、所述免疫硝酸纤维素膜、所述吸水纸依次粘贴在所述衬底上，制得所述试纸条。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述免疫胶体金纸片的制备包括以下步骤：制备免疫胶体金溶液；用预处理液浸泡玻璃纤维纸，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂预处理后的玻璃纤维纸，干燥，制得所述免疫胶体金纸片。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述免疫胶体金溶液的制备包括以下步骤：用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗喹诺酮单克隆抗体，获得OD540值为1.9-2.1的免疫胶体金溶液，所述抗喹诺酮单克隆抗体与胶体金结合的标记浓度为20-30μg/ml，所述胶体金的粒径为30-40nm，优选的，胶体金的粒径为35nm。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述喷金缓冲液包括以下质量百分比的成分：8～12wt％1.0MTris液，0.2～0.3wt％NaOH，0.2～0.4wt％聚乙二醇30000，0.2～0.4wt％聚乙二醇6000，0.15～0.25wt％牛血清白蛋白，0.1～0.3wt％蔗糖，0.35～0.40wt％酪蛋白，以及0.02～0.08wt％海藻糖，余量为水，...

【专利技术属性】
技术研发人员：毓志超，李丰，郝燕娟，陈仙月，
申请(专利权)人：广州智汇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44