检测化妆品中非法添加抗生素的方法以及试剂盒技术

本发明专利技术公开了检测化妆品中非法添加抗生素的方法以及试剂盒，包括以下：步骤a，样品前处理；步骤b，目标菌液制备；步骤c，试剂盒培养；步骤d，判定标准；步骤e，定性判定。本发明专利技术的检测方法检测范围可覆盖全部抗生素种类，操作简便，检测用时少，只需两个小时即可得到检测结果，不需要大型的分析仪器，分析成本低，便于操作，灵敏度高，准确率高，特别适用于对化妆品中非法添加抗生素进行大批量快速筛查检测。

【技术实现步骤摘要】
检测化妆品中非法添加抗生素的方法以及试剂盒
本专利技术涉及化妆品领域，特别是涉及检测化妆品中非法添加抗生素的方法以及试剂盒。
技术介绍
抗生素是一类处方药，长期使用，可引起接触性皮炎等不良反应，表现为红斑、水肿、糜烂、脱屑、渗出、瘙痒、灼热等。我国《化妆品卫生规范》（2007年版）规定，抗生素类成分为化妆品禁用组分，欧盟对此也规定化妆品中不得添加抗生素。因此，在化妆品中添加抗生素属于违规行为。但是国内化妆品中抗生素非法添加情况严重，滥用抗生素，容易产生耐药菌，照成抗生素的使用寿命大大缩短，催生了超级细菌，对广大群众的生命安全照成了极大威胁。现有技术常用方法包括色谱分析法和微生物检测法。色谱分析法样品需要进行复杂的前处理，分析速度慢，仪器要求高，对检测人员要求高。微生物检测法是根据样品对微生物的抑制作用，来定性或定量检测样品中是否添加有的抗生素，现有的微生物检测方法需要使用特定的菌种对特定的某些抗生素进行检测，菌种不易获得并且检测耗时长，检测结果需肉眼判断，易产生误差。而且以上两类现有方法均为一次检测实验只能检测某些特定种类的抗生素，无法对全部抗生素进行覆盖检测，漏检率高，容易造成假阴性，检测意义大打折扣。因此，需要开发一种检测范围可以覆盖全部抗生素种类、操作简便、耗时短，不需要大型的分析仪器，灵敏度高，检验结果正确率高，适用于检测化妆品中非法添加抗生素的方法以及使用的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供检测化妆品中非法添加抗生素的方法以及试剂盒。根据本专利技术的一个方面，提供了检测化妆品中非法添加抗生素的方法，包括以下：步骤a，前处理：待测样品前处理：随机抽取待检测样品，取一定量的所述样品置于试剂盒A中，振荡混匀，使样品充分分散，并过滤除菌，得到待测样液；空白对照前处理：取一定量的灭菌水置于另一试剂盒A中，振荡混匀，使灭菌水充分分散，并过滤除菌，得到空白对照样液，所述试剂盒A包括五指毛桃醇提取物和纯化水，所述五指毛桃醇提取物是以醇溶液作为提取剂得到的五指毛桃醇溶液提取物，所述试剂盒A为无菌试剂盒；步骤b，目标菌液制备：根据所要求检测的抗生素种类，选择一种或多种目标菌并制备相应的目标菌液，所述目标菌液中含有一种细菌或真菌，所述目标菌液的初始活菌浓度为100-10000cfu/ml；步骤c，试剂盒培养：取相同体积的所述待测样液和所述空白对照样液分别加入试剂盒B中，振荡混匀，得到加样试剂盒和空白对照试剂盒，向所述加样试剂盒与所述空白对照试剂盒中分别加入相同且等量的所述目标菌液，在相同的培养条件下，在培养30min、60min、90min和120min时，分别测定所述加样试剂盒中各目标菌的活菌浓度，分别测定所述空白对照试剂盒中各目标菌的活菌浓度，得到各所述目标菌的样品活菌浓度与空白对照活菌浓度，根据以下公式计算得到在培养30min、60min、90min和120min时各所述目标菌的活菌生长率，所述试剂盒B包括水杨梅水提取物、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠和纯化水，所述试剂盒B为无菌试剂盒，所述公式为：步骤d，判定标准：以含0.3%氯霉素的样品作为加标样品，以大肠杆菌为目标菌按照所述步骤a~c在相同培养条件下，进行培养，以计算得到培养30min、60min、90min和120min时的活菌生长率为标准生长率，作为判定标准，所述判定标准为：培养30min的标准生长率为75%，培养60min的标准生长率为50%，培养90min的标准生长率为46%，培养120min的标准生长率为41%；步骤e，定性判定：当各所述目标菌的活菌生长率之一小于等于对应培养时间的所述标准生长率，判定为阳性，即所对应的待测样品中非法添加抗生素，当各所述目标菌的活菌生长率均大于对应培养时间的所述标准生长率，则可判定阴性，即所对应的待测样品中没有非法添加抗生素。本专利技术的有益效果：本专利技术的试剂盒A和试剂盒B中的五指毛桃醇提取物和水杨梅水提取物可以去除化妆品中防腐剂对检测结果的干扰，使用两种试剂盒对样品进行二次稀释，可以去除化妆品中植物提取物对检测结果的干扰，保证检测结果的准确度更高；采用本专利技术的方法可以对全部种类的抗生素进行检测，使方法不受样品中添加对象的限制，解决了现有技术一次检测只能检测一种或几种特定抗生素的问题；本专利技术还提供了以0.3%氯霉素加标样品的大肠杆菌标准生长率这一固定值作为判定标准，定性判定时可以直接使用判定标准进行判定，简便快捷，减少工作量，同时缩短了检测时间，只需要两个小时的快速检测即可得到检测结果，适合对化妆品进行大批量快速检测和筛查。本专利技术的检测方法检测范围可覆盖全部抗生素种类，操作简便，检测用时少，只需两个小时即可得到检测结果，不需要大型的分析仪器，分析成本低，便于操作，灵敏度高，准确率高，特别适用于对化妆品中非法添加抗生素进行大批量快速粗筛检测。在一些实施方式中，检测化妆品中非法添加抗生素的方法，其特征在于，包括以下：步骤a，前处理：待测样品前处理：随机抽取待检测样品，取一定量的所述样品置于试剂盒A中，振荡混匀，使所述样品充分分散，并过滤除菌，得到待测样液；空白对照前处理：取一定量的灭菌水置于另一试剂盒A中，振荡混匀，使所述灭菌水充分分散，并过滤除菌，得到空白对照样液，所述试剂盒A包括五指毛桃醇提取物和纯化水，所述五指毛桃醇提取物是以醇溶液作为提取剂得到的五指毛桃醇溶液提取物，所述试剂盒A为无菌试剂盒；加标样品制备：向不含有抗生素的化妆品中分别添加氯霉素、甲硝唑、硝酸咪康唑和阿莫西林，制备得到含0.3%氯霉素加标样品、含0.05%甲硝唑加标样品、含0.03%硝酸咪康唑加标样品和含0.02%阿莫西林加标样品；加标样品前处理：根据所要求检测的抗生素种类，取一定量的一种或多种所述加标样品，分别置于相应的试剂盒A中，振荡混匀，使所述加标样品充分分散，并过滤除菌，得到加标样液。步骤b，目标菌液制备：根据所述步骤a中选择的加标样品，选择与所述加标样品对应的目标菌并制备相应的目标菌液，所述目标菌液中含有一种细菌或真菌，所述目标菌液的活菌浓度为100-10000cfu/ml；步骤c，试剂盒培养：取相同体积的所述待测样液、所述空白对照样液和所述加标样液分别加入试剂盒B中，振荡混匀，得到加样试剂盒、空白对照试剂盒和加标试剂盒，向所述加样试剂盒、所述空白对照试剂盒中分别加入相同体积的所述目标菌液，向所述加标试剂盒中加入相同体积的与所述加标样品相对应的所述目标菌液，在相同的培养条件下，培养相同时间后，分别测定所述加样试剂盒、所述空白对照试剂盒和所述加标试剂盒中各目标菌的活菌浓度，根据以下公式计算得到，所述待测样品与所述加标样品的各所述目标菌的活菌生长率，所述试剂盒B包括水杨梅水提取物、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠和纯化水，所述试剂盒B为无菌试剂盒，所述公式为：步骤d，校正后判定标准：以所述加标样品的目标菌的活菌生长率为该所述目标菌的标准生长本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测化妆品中非法添加抗生素的方法，其特征在于，包括以下：/n步骤a，前处理：/n待测样品前处理：随机抽取待检测样品，取一定量的所述样品置于试剂盒A中，振荡混匀，使样品充分分散，并过滤除菌，得到待测样液；/n空白对照前处理：取一定量的灭菌水置于另一试剂盒A中，振荡混匀，使灭菌水充分分散，并过滤除菌，得到空白对照样液，所述试剂盒A包括五指毛桃醇提取物和纯化水，所述五指毛桃醇提取物是以醇溶液作为提取剂得到的五指毛桃醇溶液提取物，所述试剂盒A为无菌试剂盒；/n步骤b，目标菌液制备：/n根据所要求检测的抗生素种类，选择一种或多种目标菌并制备相应的目标菌液，所述目标菌液中含有一种细菌或真菌，所述目标菌液的初始活菌浓度为100-10000cfu/ml；/n步骤c，试剂盒培养：/n取相同体积的所述待测样液和所述空白对照样液分别加入试剂盒B中，振荡混匀，得到加样试剂盒和空白对照试剂盒，向所述加样试剂盒与所述空白对照试剂盒中分别加入相同且等量的所述目标菌液，在相同的培养条件下，在培养30min、60min、90min和120min时，分别测定所述加样试剂盒中各目标菌的活菌浓度，分别测定所述空白对照试剂盒中各目标菌的活菌浓度，得到各所述目标菌的样品活菌浓度与空白对照活菌浓度，根据以下公式计算得到在培养30min、60min、90min和120min时各所述目标菌的活菌生长率，所述试剂盒B包括水杨梅水提取物、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠和纯化水，所述试剂盒B为无菌试剂盒，所述公式为：/n...

【技术特征摘要】
1.检测化妆品中非法添加抗生素的方法，其特征在于，包括以下：
步骤a，前处理：
待测样品前处理：随机抽取待检测样品，取一定量的所述样品置于试剂盒A中，振荡混匀，使样品充分分散，并过滤除菌，得到待测样液；
空白对照前处理：取一定量的灭菌水置于另一试剂盒A中，振荡混匀，使灭菌水充分分散，并过滤除菌，得到空白对照样液，所述试剂盒A包括五指毛桃醇提取物和纯化水，所述五指毛桃醇提取物是以醇溶液作为提取剂得到的五指毛桃醇溶液提取物，所述试剂盒A为无菌试剂盒；
步骤b，目标菌液制备：
根据所要求检测的抗生素种类，选择一种或多种目标菌并制备相应的目标菌液，所述目标菌液中含有一种细菌或真菌，所述目标菌液的初始活菌浓度为100-10000cfu/ml；
步骤c，试剂盒培养：
取相同体积的所述待测样液和所述空白对照样液分别加入试剂盒B中，振荡混匀，得到加样试剂盒和空白对照试剂盒，向所述加样试剂盒与所述空白对照试剂盒中分别加入相同且等量的所述目标菌液，在相同的培养条件下，在培养30min、60min、90min和120min时，分别测定所述加样试剂盒中各目标菌的活菌浓度，分别测定所述空白对照试剂盒中各目标菌的活菌浓度，得到各所述目标菌的样品活菌浓度与空白对照活菌浓度，根据以下公式计算得到在培养30min、60min、90min和120min时各所述目标菌的活菌生长率，所述试剂盒B包括水杨梅水提取物、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠和纯化水，所述试剂盒B为无菌试剂盒，所述公式为：



步骤d，判定标准：
以含0.3%氯霉素的样品作为加标样品，以大肠杆菌为目标菌按照所述步骤a~c在相同培养条件下，进行培养，以计算得到培养30min、60min、90min和120min时的活菌生长率为标准生长率，作为判定标准，所述判定标准为：培养30min的标准生长率为75%，培养60min的标准生长率为50%，培养90min的标准生长率为46%，培养120min的标准生长率为41%；
步骤e，定性判定：
当各所述目标菌的活菌生长率之一小于等于对应培养时间的所述标准生长率，判定为阳性，即所对应的待测样品中非法添加抗生素，当各所述目标菌的活菌生长率均大于对应培养时间的所述标准生长率，则可判定阴性，即所对应的待测样品中没有非法添加抗生素。


2.根据权利要求1所述的检测化妆品中非法添加抗生素的方法，其特征在于，包括以下：
步骤a，前处理：
待测样品前处理：随机抽取待检测样品，取一定量的所述样品置于试剂盒A中，振荡混匀，使所述样品充分分散，并过滤除菌，得到待测样液；
空白对照前处理：取一定量的灭菌水置于另一试剂盒A中，振荡混匀，使所述灭菌水充分分散，并过滤除菌，得到空白对照样液，所述试剂盒A包括五指毛桃醇提取物和纯化水，所述五指毛桃醇提取物是以醇溶液作为提取剂得到的五指毛桃醇溶液提取物，所述试剂盒A为无菌试剂盒；
加标样品制备：向不含有抗生素的化妆品中分别添加氯霉素、甲硝唑、硝酸咪康唑和阿莫西林，制备得到含0.3%氯霉素加标样品、含0.05%甲硝唑加标样品、含0.03%硝酸咪康唑加标样品和0.02%阿莫西林加标样品；
加标样品前处理：根据所要求检测的抗生素种类，取一定量的一种或多种所述加标样品，分别置于相应的试剂盒A中，振荡混匀，使所述加标样品充分分散，并过滤除菌，得到加标样液；
步骤b，目标菌液制备：
根据所述步骤a中选择的加标样品，选择与所述加标样品对应的目标菌并制备相应的目标菌液，所述目标菌液中含有一种细菌或真菌，所述目标菌液的初始活菌浓度为100-10000cfu/ml；
步骤c，试剂盒培养：
取相同体积的所述待测样液、所述空白对照样液和所述加标样液分别加入试剂盒B中，振荡混匀，得到加样...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丰，严晓明，毓志超，文永贤，
申请(专利权)人：广州智汇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44