一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有放置包被抗肿瘤特异性生长因子（Tumor Specific Growth Factor,TSGF）单克隆抗体的酶标板的隔层和包被抗晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end‑products,RAGE)单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：装有分析液的试剂瓶；装有清洗液的试剂瓶；装有增强液的试剂瓶；装有TSGF、RAGE校准品的试剂瓶；装有标记的抗TSGF单克隆抗体和抗RAGE单克隆抗体的试剂瓶。本发明专利技术试剂盒的灵敏度高、准确性好、检测范围广、稳定性好、操作简单省时，且无辐射污染。

A Time-resolved Immunofluorescence (TRFIA) Kit for Composition of Tumor Markers

The invention discloses a time-resolved immunofluorescence (TRFIA) kit for tumor marker composition, which comprises a box cover above the box body and the box body. The box body is provided with a separator of an enzyme-labeled plate coated with anti-tumor specific growth factor (TSGF) monoclonal antibody and a receptor for advanced glycation end product receptor (receptor for advanced glycation en). D products, RAGE) Enzyme Label of Monoclonal Antibody; The box body is provided with container holes for placing reagent bottles, which are: reagent bottles containing analytical solution; reagent bottles containing cleaning solution; reagent bottles containing enhancement solution; reagent bottles containing TSGF and RAGE calibration products; reagent bottles containing labeled anti-TSGF monoclonal antibodies and anti-RAGE monoclonal antibodies. The kit has high sensitivity, good accuracy, wide detection range, good stability, simple and time-saving operation, and no radiation pollution.

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒
本专利技术涉及体外免疫诊断试剂领域，尤其涉及一种检测诊断肿瘤标志物TSGF与RAGE组合物的时间分辨免疫荧光试剂盒，实现对肿瘤确准、高效诊断。
技术介绍
肿瘤特异性生长因子（TumorSpecificGrowthFactor,TSGF）是恶性肿瘤及其周边毛细血管大量扩增的结果，并随着肿瘤的形成和增长逐渐释放到外周血液。恶性肿瘤病人血沮中存在TSGF，对恶性肿瘤血管增生起重要作用，在肿瘤形成早期即明显升高。血清TSGF是一种新的、敏感性和特异性较高的广谱肿瘤标志物，检测方法简便快捷，结果稳定。对恶性肿瘤的初筛、早期辅助诊断、疗效评价和预示肿瘤复发具有重要临床意义和应用价值。通过化学显色和分析技术,可以检测当细胞发生恶性转化时含量升高的TSGF。因此，这个指标可以用来做体检指标，是一种适合群体肿瘤普查的过筛试验。如何避免假阳性：据文献报道,临床使用中发现:急性炎症、部分自身免疫性疾病如红斑狼疮、类风湿病、病毒性肝炎等患者其TSGF值会有一过性升高,应间隔3周～5周进行2次～3次跟踪复检,以排除一过性升高造成的假阳性。这种测定方法还具有无需特殊设备，有成熟的试剂盒、无创伤性、操作简便、快速（1h即可出结果）,而且持续阳性者或进行性阳性增高者,特异性高。TSGF作为一种早期的恶性肿瘤标志物,其操作等特点,适宜各级医院测定。晚期糖基化终产物（theReceptorofAdvancedGlycationEnd-products,RAGE）是一种新的模式识别受体，广泛参与众多疾病的病理过程，如阿尔兹海默症、肺炎、肿瘤和糖尿病等。晚期糖基化终产物受体(receptorforadvancedglycationend-products,RAGE)是晚期糖基化终产物(advancedglycationendproducts,AGEs)最具特征的受体之一,通过与AGEs的结合,可促进炎症反应并参与多种病理过程.可溶性RAGE(solubleformsofRAGE,sRAGE)是RAGE的可溶性形式,可阻止RAGE与其相关的促炎配体(AGEs,高流变簇盒蛋白1,S100蛋白质)结合.目前越来越多的研究发现sRAGE可作为生物标志物或者内源性蛋白因子阻止RAGE介导的疾病发生,表明sRAGE在众多疾病的发生发展中有着举足轻重的作用。在肿瘤生病、病变过程中，都较典型涉及肿瘤特异性生长因子（TumorSpecificGrowthFactor,TSGF）、晚期糖基化终产物受体(receptorforadvancedglycationend-products,RAGE)变化。因此，可以作为联合检测的很好指征。本专利技术将肿瘤特异性生长因子（TumorSpecificGrowthFactor,TSGF）、晚期糖基化终产物受体(receptorforadvancedglycationend-products,RAGE)作为肿瘤标志物的组合物，采用时间分辨免疫荧光(TRFIA)法检测二者在血清中的含量比值，研制成试剂盒，其灵敏度高、准确性好、检测范围广、稳定性好、操作简单省时，且无辐射污染。时间分辨荧光免疫分析方法(Time-resolvedfluoroimmunoassay,TRFIA)是1982年发展起来的一种新型的非放射性标记技术。TRFIA利用镧系元素金属的三价离子及其螯合物作为荧光标记，常用的镧系元素为铕(Eu)、铽(Tb)、钐(Sm)和镝(Dy)，最常用的是铕、铽，镧系元素标记物比较稳定，可以保存1-2年，克服了同位素、酶标等不稳定的缺点。TRFIA现已成为免疫检测中一项非常有应用前景的分析手段，具有操作简便、灵敏度高、示踪物稳定、不受样品自然荧光干扰、多标记、无放射性污染等优点。在抗体检测方面，时间分辨荧光免疫分析方法的检测目标物通常是针对某一抗原包括小分子抗原的抗体，一般不会采用该方法来检测多个肿瘤标志物含量比值来临床诊断。目前，对于采用时间分辨荧光免疫分析方法定量同时检测肿瘤标志物TSGF、RAGE组合物尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术公开一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有放置包被抗TSGF单克隆抗体的酶标板的隔层和包被抗RAGE单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：装有分析液的试剂瓶；装有清洗液的试剂瓶；装有增强液的试剂瓶；装有TSGF、RAGE校准品的试剂瓶；装有标记的抗TSGF单克隆抗体和抗RAGE单克隆抗体的试剂瓶。本专利技术试剂盒的灵敏度高、准确性好、检测范围广、稳定性好、操作简单省时，且无辐射污染。本专利技术提供一种检测TSGF、RAGE肿瘤标志物组合物的时间分辨免疫荧光试剂盒，一方面解决免疫诊断技术中定量检测未有效包被到固体载体上的TSGF、RAGE浓度，从而计算有效包被到固体载体上的抗体包被率，以评估包被效果，该试剂盒能够定量检测TSGF、RAGE，具有检测灵敏度高，操作简单，操作流程短，储存时间长等优点；另一方面，采用时间分辨免疫荧光(TRFIA)分析法检测恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)及可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)血清含量，通过二者含量数值的比值法研制成时间分辨免疫荧光(TRFIA)分析法检测试剂盒，进行恶性肿瘤的初筛、早期辅助诊断、疗效评价和预示肿瘤复发的临床病理评判。本专利技术的原理是采用时间分辨免疫荧光(TRFIA)分析法，具体包括如下步骤：将TSGF、RAGE抗体包被到酶标板上，形成包被TSGF、RAGE抗体的酶标板，待测样品中的TSGF、RAGE抗体先与包被在酶标板上的TSGF、RAGE克隆抗体反应(震荡、洗板)，形成TSGF单克隆抗体/RAGE单克隆抗体免疫复合物，然后加入镧系元素标记的TSGF、RAGE单克隆抗体反应(震荡、洗板)形成TSGF单克隆抗体/RAGE多克隆抗体/镧系元素免疫复合物，加入增强液震荡反应，在荧光检测设备如AutoDELFIA1235上读荧光信号，从而确定标准品中TSGF、RAGE抗体的浓度。当镧系元素离子在荧光增强液中从TSGF、RAGE单克隆抗体上解离后发出强荧光，荧光强度与样品中的TSGF、RAGE抗体浓度成反比，对照标准曲线即可确定样品中TSGF、RAGE抗体的浓度，再按照公式“100％-TSGF、RAGE抗体浓度*待检样品体积/TSGF、RAGE抗体投入量*100％”计算TSGF、RAGE抗体的包被率。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是一种检测TSGF、RAGE肿瘤标志物组合物的时间分辨免疫荧光试剂盒，包括以下组分：包被TSGF、RAGE多克隆抗体的酶标板；镧系元素离子标记的鼠单克隆抗体标记物；TSGF、RAGE单克隆抗体校准品(浓度已知，用于建立标准曲线)；清洗液(市售商品)；分析液(市售商品)；增强液(市售商品)。作为本专利技术优选的技术方案，所述TSGF、RAGE多克隆抗体的包被浓度为1-100μg/ml。作为本专利技术优选的技术方案，所述镧系元素标记的TSGF、RAGE单克隆抗体标记物中抗体是TSGF、RAGE单克隆抗体，所述标记示踪物是镧系元素金属离子及其螯合物中的一种，包括铕Eu本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有放置包被抗肿瘤特异性生长因子（Tumor Specific GrowthFanctor,TSGF）单克隆抗体的酶标板的隔层和包被抗晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end‑products,RAGE)单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：装有分析液的试剂瓶；装有清洗液的试剂瓶；装有增强液的试剂瓶；装有TSGF、RAGE校准品的试剂瓶；装有标记的抗TSGF单克隆抗体和抗RAGE单克隆抗体的试剂瓶。

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有放置包被抗肿瘤特异性生长因子（TumorSpecificGrowthFanctor,TSGF）单克隆抗体的酶标板的隔层和包被抗晚期糖基化终产物受体(receptorforadvancedglycationend-products,RAGE)单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：装有分析液的试剂瓶；装有清洗液的试剂瓶；装有增强液的试剂瓶；装有TSGF、RAGE校准品的试剂瓶；装有标记的抗TSGF单克隆抗体和抗RAGE单克隆抗体的试剂瓶。2.按权利要求1所述的一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒，其特征在于：所述的肿瘤标志物组合物，是指肿瘤特异性生长因子（TumorSpecificGrowthFactor,TSGF）和晚期糖基化终产物受体(receptorforadvancedglycationend-products,RAGE)。3.按权利要求1所述的一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒，其特征在于：所述的盒体内设有放置包被抗TSGF单克隆抗体的酶标板的隔层和包被抗RAGE单克隆抗体的酶标板的隔层。4.按权利要求1、3所述的一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒，其特征在于：所述镧系元素标记的TSGF单克隆抗体标记物中抗体是TSGF单克隆抗体，所述标记示踪物是镧系元素金属离子及其螯合物中的一种，包括铕Eu、铽Tb、钐Sm和镝Dy。5.按权利要求1、3所述的一种肿瘤标志物组合物时间分辨免疫荧光(TRFIA)试剂盒，其特征在于：所述镧系元素标记的RAGE单克...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪志友，郑荣，温天文，王雪根，叶青，刘宝瑞，钱晓萍，
申请(专利权)人：江苏金甙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32