一种人类高血压风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种人类高血压风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用。所述试剂盒由分别用于扩增与人类高血压风险相关的CYP2C9、CYP2D6、ADRB1、AGTR1和ACE 5个基因多态性的PCR预混反应液、阳性对照品及阴性对照品组成，所述PCR预混反应液包含用于扩增各位点的特异性引物序列组、探针组和PCR反应液，所述特异性引物组由普通的外引物和带荧光标签的特异性的ARMs引物组成。本发明专利技术所述试剂盒用于检测人类高血压风险基因多态性具有灵敏度高、特异性高、操作简便、结果可靠等优点，且能在1小时内完成检测，并且结果判读简单客观。

【技术实现步骤摘要】
一种人类高血压风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种人类高血压风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
我国高血压患者人数高达数亿，并且发病率仍呈上升趋势，导致的并发症成为我国第二大死因。目前通过药物治疗控制血压以减少高血压并发症成为了高血压的主要治疗手段。然而治疗高血压的药物在临床上出现个体反应差异十分普遍，有20～50％接受药物治疗的患者的血压并没有得到良好的控制。遗传药理和药物基因组的研究进展表明药物代谢酶、转运体和受体(药物靶点)的遗传变异是造成个体药物反应差异的主要原因。通过基因检测鉴定出与高血压或血压升高相关的易感基因或致病基因，在人群中筛选增加疾病风险的易感基因确定易感个体，将有助于高血压的发病风险预测、新药开发、诊断和个体化治疗。目前，与高血压风险评估及用药相关的基因主要有CYP2C9、CYP2D6、ADRB1、AGTR1和ACE基因(图1)，其主要影响β1受体阻滞剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB类药物)和血管紧张素转换酶(ACEI)抑制剂的疗效。具体的，ADRB1和CYP2D6与倍他乐克等β受体阻断药有关，ACE与依那普利等血管紧张素转化酶抑制剂有关，AGTR和CYP2C9与厄贝沙坦等血管紧张素II受体阻滞剂有关。目前临床上主要采取以下四种方式检测基因的多态性：1.PCR-测序法2.高分辨率溶解曲线法3.芯片杂交法4.Taqman-qPCR法PCR-测序法灵敏度低，实验耗时长，不适合临床推广；芯片杂交法，检测灵敏度低并且特异性差，容易出现假阳性结果；高分辨率溶解曲线法对设备要求特殊，不适合临床推广，且检测灵敏度不高。Taqman-qPCR法，检测灵敏度高，但往往由于位点序列原因，导致检测特异性不高，并且其通过Genotyping方法进行分型，对样本数量和多态性分布有一定要求，不适合检测突变频率过低的位点。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，目的在于提供一种人类高血压风险基因多态性检测试剂盒及其制备方法和应用。本试剂盒具有高灵敏度、高特异性、低成本高通量、操作简便、实验周期短等特点，可以快速精准的对人类基因组DNA中高血压风险基因多态性进行检测。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：一种人类高血压风险基因多态性检测引物组，所述引物组由普通的外引物和带荧光标签的特异性的ARMs引物组成，具体序列如下：CYP2C9-F1：5’-TTGTGGACTTCTCTTCCTTC-3’SEQIDNO.1CYP2C9-F2：5’-VIC-ATCCCTTGTCATCGTCAGAGATACA-3’SEQIDNO.2(特异性识别野生模板)CYP2C9-R1：5’-GTCACCCTGCCAGAAAT-3’SEQIDNO.3CYP2C9-R2：5’-FAM-AAGATACATTGATGAAGAAGATCAAG-3’SEQIDNO.4(特异性识别突变模板)CYP2D6-F1：5’-GAGAGTGTCCTGCCTGGT-3’SEQIDNO.5CYP2D6-F2：5’-VIC-ATCCCTTGTCATCGTCTGCACACTACC-3’SEQIDNO.6(特异性识别野生模板)CYP2D6-R1：5’-CCCAAACCTGCTTCCC-3’SEQIDNO.7CYP2D6-R2:5’-FAM-AAGATACATTGATGAGGCCTAGTGA-3’SEQIDNO.8(特异性识别突变模板)ADRB1-F1：5’-GACGCTGGGCATCATCATGG-3’SEQIDNO.9ADRB1-F2：5’-VIC-ATCCCTTGTCATCGTGGCCTTACAGG-3’SEQIDNO.10(特异性识别野生模板)ADRB1-R1：5’-TGCAGCCGGCCCAGGGCTCCAG-3’SEQIDNO.11ADRB1-R2:5’-FAM-AAGATACATTGATGACAGAGCATTCG-3’SEQIDNO.12(特异性识别突变模板)AGTR1-F1：5’-AATTTAAAAGATATTTTCTCCA-3’SEQIDNO.13AGTR1-F2：5’-VIC-ATCCCTTGTCATCGTACCAAATGAGCA-3'SEQIDNO.14(特异性识别野生模板)AGTR1-R1：5’-AGGGAGATTGCATTTCTGTC-3’SEQIDNO.15AGTR1-R2：5’-FAM-AAGATACATTGATGAAAGTACCTAAG-3’SEQIDNO.16(特异性识别突变模板)ACE-F1：5’-GGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’SEQIDNO.17ACE-F2：5’-VIC-ATCCCTTGTCATCGTAGGGGAGATCAG-3’SEQIDNO.18(特异性识别野生模板)ACE-R1：5’-AGTGAGCCGAGATCCCGC-3’SEQIDNO.19ACE-R2：5’-FAM-AAGATACATTGATGAAGAGAATCTCA-3’SEQIDNO.20(特异性识别突变模板)内控F：5’-CGGGACCTGACTGACTACCT-3’SEQIDNO.21内控R：5’-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3’SEQIDNO.22。一种人类高血压风险基因多态性检测探针组，所述探针组由特异性taqman-MGB探针和携带淬灭基团的锁核酸探针组成，具体序列如下：内控-P：5’-ROX-ACCACCACGGCCGAGC-MGB-BHQ-3’SEQIDNO.23野生型淬灭基团锁核酸：5’-BHQ-ACGATGACAAGGGAT-3’SEQIDNO.24突变型淬灭基团锁核酸：5’-BHQ-TCATCAATGTATCTT-3’SEQIDNO.25。一种人类高血压风险基因多态性检测试剂盒，所述试剂盒由分别用于扩增CYP2C9、CYP2D6、ADRB1、AGTR1、ACE位点的PCR预混反应液、阳性对照品及阴性对照品组成；所述PCR预混反应液的具体组分如下：(1)用于扩增CYP2C9位点的PCR预混反应液包括：所述用于扩增CYP2C9基因rs1057910位点的引物、引物序列如SEQIDNO.1～SEQIDNO.4所示，用于内控的引物序列、序列如SEQIDNO.21～SEQIDNO.22所示，所述探针组、序列如SEQIDNO.23～SEQIDNO.25所示，以及PCR反应液组成；(2)用于扩增CYP2D6位点的PCR预混反应液：所述用于扩增CYP2D6基因rs1065852位点的引物、引物序列如SEQIDNO.5～SEQIDNO.8所示，用于内控的引物序列、序列如SEQIDNO.21～SEQIDNO.22所示，所述探针组、序列如SEQIDNO.23～SEQIDNO.25所示，以及PCR反应液组成；(3)用于扩增ADRB1位点的PCR预混反应液：所述用于扩增ADRB1基因rs1801253位点的引物、引物序列如SEQIDNO.9～SEQIDNO.12所示，用于内控的引物序列、序列如SEQIDNO.21～SEQIDNO.22所示，所述探针组、序列如SEQIDNO.23～SEQIDNO.25所示，以及PCR反应液组成；(4)用于扩增AGTR1位点的PC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物组，其特征在于，所述引物组由普通的外引物和带荧光标签的特异性的ARMs引物组成，具体序列如下：用于扩增CYP2C9基因rs1057910位点的特异性引物序列如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.4所示，其中SEQ ID NO.2所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQ ID NO.4所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于扩增CYP2D6基因rs1065852位点的特异性引物序列如SEQ ID NO.5~SEQ ID NO.8所示，其中SEQ ID NO.6所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQ ID NO.8所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于扩增ADRB1基因rs1801253位点的特异性引物序列如SEQ ID NO.9~SEQ ID NO.12所示，其中SEQ ID NO.10所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQ ID NO.12所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于扩增AGTR1基因rs5186位点的特异性引物序列如SEQ ID NO.13~ SEQ ID NO.16所示，其中SEQ ID NO.14所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQ ID NO.16所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于扩增ACE基因rs4646994位点的特异性引物序列如SEQ ID NO.17~SEQ ID NO.20所示，其中SEQ ID NO.18所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQ ID NO.20所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于内控的引物序列如SEQ ID NO.21~SEQ ID NO.22所示。...

【技术特征摘要】
1.引物组，其特征在于，所述引物组由普通的外引物和带荧光标签的特异性的ARMs引物组成，具体序列如下：用于扩增CYP2C9基因rs1057910位点的特异性引物序列如SEQIDNO.1~SEQIDNO.4所示，其中SEQIDNO.2所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQIDNO.4所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于扩增CYP2D6基因rs1065852位点的特异性引物序列如SEQIDNO.5~SEQIDNO.8所示，其中SEQIDNO.6所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQIDNO.8所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于扩增ADRB1基因rs1801253位点的特异性引物序列如SEQIDNO.9~SEQIDNO.12所示，其中SEQIDNO.10所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQIDNO.12所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于扩增AGTR1基因rs5186位点的特异性引物序列如SEQIDNO.13~SEQIDNO.16所示，其中SEQIDNO.14所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQIDNO.16所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于扩增ACE基因rs4646994位点的特异性引物序列如SEQIDNO.17~SEQIDNO.20所示，其中SEQIDNO.18所示引物的5’端携带VIC荧光基团，SEQIDNO.20所示引物的5’端携带FAM荧光基团；用于内控的引物序列如SEQIDNO.21~SEQIDNO.22所示。2.探针组，其特征在于，所述探针组由特异性taqman-MGB探针和携带淬灭基团的锁核酸探针组成，核苷酸序列如SEQIDNO.23~SEQIDNO.25所示，具体形式如下：内控-P：5’-ROX-ACCACCACGGCCGAGC-MGB-BHQ-3’野生型淬灭基团锁核酸：5’-BHQ-ACGATGACAAGGGAT-3’突变型淬灭基团锁核酸：5’-BHQ-TCATCAATGTATCTT-3’。3.一种检测试剂盒，包含权利要求1所述引物组和权利要求2所述探针组，其特征在于，所述试剂盒由分别用于扩增CYP2C9、CYP2D6、ADRB1、AGTR1、ACE位点的PCR预混反应液、阳性对照品及阴性对照品组成；所述PCR预混反应液的具体组分如下：（1）用于扩增CYP2C9位点的PCR预混反应液包括：所述用于扩增CYP2C9基因rs1057910位点的引物、引物序列如SEQIDNO.1~SEQIDNO.4所示，用于内控的引物序列、序列如SEQIDNO.21~SEQIDNO.22所示，所述探针组、序列如SEQIDNO.23~SEQIDNO.25所示，以及PCR反应液组成；（2）用于扩增CYP2D6位点的PCR预混反应液：所述用于扩增CYP2D6基因rs1065852位点的引物、引物序列如SEQIDNO.5~SEQIDNO.8所示，用于内控的引物序列、序列如SEQIDNO.21~SEQIDNO.22所示，所述探针组、序列如SEQIDNO.23~SEQIDNO.25所示，以及PCR反应液组成；（3）用于扩增ADRB1位点的PCR预混反应液：所述用于扩增ADRB1基因rs1801253位点的引物、引物序列如SEQIDNO.9~SEQIDNO.12所示，用于内控的引物序列、序列如SEQIDNO.21~SEQIDNO.22所示，所述探针组、序列如SEQIDNO.23~SEQIDNO.25所示，以及PCR反应液组成；（4）用于扩增AGTR1位点的PCR预混反应液：所述用于扩增AGTR1基因rs5186位点的引物、引物序列如SEQIDNO.13~SEQIDNO.16所示，用于内控的引物序列、序列如SEQIDNO.21~SEQIDNO.22所示，所述探针组、序列如SEQIDNO.23~SEQIDNO.25所示，以及PCR反应液组成；（5）用于扩增ACE位点的PCR预混反应液：所述用于扩增ACE基因rs4646994位点的引物、引物序列如SEQIDNO.17~SEQIDNO.20所示，用于内控的引物序列、序列如SEQIDNO.21~SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：晏星，李倩，李雪梅，叶伦，程弘夏，陈刚，
申请(专利权)人：武汉康录生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42