TMEM63C在制备深静脉血栓诊断产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了TMEM63C或其表达产物在制备深静脉血栓诊断产品中的应用。本发明专利技术公开了一种与深静脉血栓有关的mRNATMEM63C，并进一步证实TMEM63C或该mRNA表达产物在深静脉血栓组织中表达上调。本发明专利技术进一步公开了一种用于检测深静脉血栓的诊断试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增深静脉血栓相关mRNA的引物和说明书，所述深静脉血栓相关mRNA是TMEM63C。利用TMEM63C基因及含有TMEM63C基因或表达产物的诊断试剂或试剂盒不仅能够快速有效的做到早期诊断，而且为深静脉血栓发病风险预测、新药开发、诊断和个体化治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。

【技术实现步骤摘要】
TMEM63C在制备深静脉血栓诊断产品中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及人TMEM63C在制备深静脉血栓诊断产品中的应用。
技术介绍
深静脉血栓是指血液在深静脉腔内不正常的凝结，并阻塞静脉腔，导致静脉回流障碍而引起的临床症状，多发于下肢，血栓脱落可引起肺动脉栓塞，每年造成大量的死亡。我国每年深静脉血栓人群发病率约为1/1000，且无性别和年龄差别，是骨折、大手术病人、肿瘤、及其他慢性病患者的主要合并症，尤其是严重创伤或大手术后的老年患者，卧床或制动时间较长，下肢静脉血流瘀滞，已发生深静脉血栓而阻塞静脉，严重者可发生缺血性坏死，若血栓脱落，可导致大面积肺栓塞而危及生命，慢性期常伴发深静脉形成后综合征。因此深静脉血栓的早期预测诊断和预防显得非常重要。深静脉血栓的形成机制很复杂，凝血功能亢进、血流停滞、静脉壁损伤是静脉栓塞形成的三要素。对于血栓形成早期，静脉内皮细胞调控、白细胞和血小板功能变化等机制均有影响。经过大量的临床和实验研究，深静脉血栓形成的病因及发病机制有了很大的进步，尤其是随着分子生物学的发展和DNA重组技术的发展，特别是人类基因组计划的逐步开展，致病基因的研究为深静脉血栓发病机制的研究提供了新的思路和方法，一些血栓易感基因成为研究热点，如纤维蛋白原(Fibrinogen，Fg)、激肽原、内皮细胞蛋白C受体(endothelialproteinCreceptor，EPCR)、5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetra-hydrofolatereductase，MTHFR)和血管紧张素转换酶(angiotensin-convertingenzyme，ACE)等。TMEM63C(transmembraneprotein63C，跨膜蛋白200c)是蛋白编码基因，位于第14号染色体上。目前，还没有关于TMEM63C与深静脉血栓相关的报道。因此，本领域迫切需要开发早期判断深静脉血栓的特异性标志物，并开发预防深静脉血栓的靶向药物。
技术实现思路
为了实现深静脉血栓的早期发现，早期干预，本专利技术的目的在于提供一种新的深静脉血栓相关mRNA，以及该mRNA的表达产物。本专利技术的目的还在于提供深静脉血栓相关mRNA或其表达产物在用于制备深静脉血栓诊断产品中的应用。为实现上述目的，本专利技术首先提供TMEM63C或其表达产物在用于制备深静脉血栓诊断产品中的应用。优选地，所述TMEM63C包含如SEQIDNO:1所示的特异核苷酸序列。优选地，所述TMEM63C或该mRNA的表达产物在深静脉血栓组织中表达上调。优选地，所述诊断产品包括检测试剂或试剂盒。进一步地，本专利技术提供一种诊断深静脉血栓的生物试剂，所述检测试剂包括TMEM63C的特异性引物对或抗TMEM63C蛋白的特异性抗体。优选地，所述TMEM63C的特异性引物对具有SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的核苷酸序列；所述引物对通过转录介导扩增技术来检测人体血白细胞内TMEM63C基因的表达水平，以判断深静脉血栓发生的风险。优选地，所述所述抗TMEM63C蛋白的特异性抗体为Anti-TMEM63Cantibody。进一步地，本专利技术提供了一种用于检测深静脉血栓的诊断试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增深静脉血栓相关mRNA的引物和说明书，所述深静脉血栓相关mRNA是TMEM63C。优选地，所述引物具有SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的核苷酸序列。所述说明书中记载所用试剂的用量和方法，以及判断检测样本患深静脉血栓风险的标准。优选地，所述试剂盒还包括10×Buffer、dNTP、MgCL2、Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂。本专利技术的有益效果如下：本专利技术公开了一种与深静脉血栓相关的TMEM63C，并进一步证实该TMEM63C或该mRNA的表达产物在深静脉血栓患者血白细胞中表达上调。利用TMEM63C基因及含有TMEM63C基因或表达产物的诊断试剂或试剂盒不仅能够快速有效的做到早期诊断，而且为深静脉血栓发病风险预测、新药开发、诊断和个体化治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。附图说明图1TMEM63C基因cDNA在各组中的表达；其中B/A＝血栓形成组/正常对照组；C/A＝无血栓形成组/正常对照组；a表示与其他两组相比P<0.05；图2WB分析各组中TMEM63C蛋白表达情况；其中B/A＝血栓形成组/正常对照组；C/A＝无血栓形成组/正常对照组；a表示与其他两组相比P<0.01。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试剂可以商业购买得到。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常为本领域常规方法，如按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆，实验手册(第三版)(科学出版社，2002)中的所述条件，或按照试剂制造厂家所建议的条件。本专利技术的专利技术人对深静脉血栓患者血白细胞、无血栓进行组血白细胞以及正常对照组血白细胞中的mRNA进行高通量转录组测序，通过生物信息学方法进行基因筛选，挑选出候选mRNATMEM63C，现有研究中并没有TMEM63C和深静脉血栓相关的报道，进一步，专利技术人进行了分子生物学方法验证，证实了TMEM63C在深静脉血栓患者血白细胞中表达上调。本专利技术的TMEM63C是在本专利技术之前的已知mRNA，其基本信息如下：Genbank登录号：TMEM63CGeneID:57156，NCBI参考序列:NM_020431.3，来源于人类基因组。本专利技术还采用RT-PCR方法和Western-BLot方法检测上述mRNA在深静脉血栓患者、无血栓进行组和正常对照组血白细胞中的表达，并验证了该mRNA在深静脉血栓中表达上调。本文使用的术语“表达上调”指对应于所表达基因的序列，其中序列量的测量证明，与从正常个体或从通过深静脉血栓确认或无深静脉血栓进行的个体中分离的生物学样品中的同一基因相比，所述基因在从患深静脉血栓个体中分离的生物学样品中的表达水平增加。根据本专利技术，“表达上调”是指通过本专利技术方法杂交强度测量的至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或更高的表达增加，例如20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高或者高于1倍，最高为2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍或更高。实施例1高通量测序筛选差异表达基因1、研究对象与分组选取下肢静脉曲张患者65例为深静脉血栓观察对象，其中15例患者术前发生股静脉血栓者纳入血栓形成组，行抗凝加溶栓规范治疗，待血栓消退，深静脉血流通畅，能保证肢体静脉回流后，再行浅静脉抽剥术，50例术前未发现深静脉血栓者均行浅静脉抽剥术，术后5例发生深静脉血栓，亦纳入血栓形成组，故血栓形成组共纳入20例患者。45例未发生深静脉血栓者，随机选取20例纳入无血栓形成组。另选20名健康志愿者作为正常对照组。深静脉血栓观察、诊断考虑以下几个方面及要点：由一组高年资医生实施，系统掌握深静脉血栓相关理论；能够准确动态观察症状变化及进行正确的体格检查；掌握相关手术技术，能保证手术质量；结合相应情况及时行超声检查，筛查有无血栓形成；必要时再行静脉造影确诊，确保所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.TMEM63C或其表达产物在制备深静脉血栓诊断产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.TMEM63C或其表达产物在制备深静脉血栓诊断产品中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述TMEM63C包含如SEQIDNO:1所示的特异核苷酸序列。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述TMEM63C或其表达产物在深静脉血栓患者血白细胞中表达上调。4.如权利要求1-3任意一项所述的应用，其特征在于，所述诊断产品包括检测试剂或试剂盒。5.一种诊断深静脉血栓的生物试剂，其特征在于，所述检测试剂包括TMEM63C的特异性引物对或抗TMEM63C蛋白的特异性抗体。6.如权利要求5所述生物试剂，其特征在于，所述TMEM63C的特异性引物对具有SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的核苷酸序列；所述引物对...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘大海，胡宇博，王俊容，叶聪，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22