本发明专利技术公开了一种检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物及其检测引物和检测方法，其中，该LncRNAs生物标志物包括：HNF1A‑AS1和NONHSAT031260，前者的核苷酸序列如序列表中SEQ NO.4所示，后者的核苷酸序列如序列表中SEQ NO.5所示。本发明专利技术的有益之处在于：(1)首次发现2个与人体代谢酶CYP3A4表达高度正相关的LncRNAs生物标志物HNF1A‑AS1和NONHSAT031260，并提出了此标志物的检测引物和检测方法；(2)通过检测HNF1A‑AS1和NONHSAT031260的表达，我们可以评估机体CYP3A4代谢酶的活性，从而可以指导临床药师调节患者使用药物剂量。
【技术实现步骤摘要】
检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物及其检测引物和检测方法
本专利技术涉及基因治疗和医学诊断领域，具体涉及检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物及其检测引物、检测方法和用途。
技术介绍
药物代谢酶是药物在肝脏代谢最重要的酶类，其表达水平和活性的改变会导致药物疗效和安全性的变化。其中，细胞色素P4503A4(CYP3A4)是肝脏中最重要的药物代谢酶，50％以上的临床药物经其代谢(ZangerUM，TurpeinenM，KleinKandSchwabM.Functionalpharmacogenetics/genomicsofhumancytochromesP450involvedindrugbiotransformation.AnalBioanalChem.2008；392(6)：1093-1108.)。CYP3A4的表达和活性在不同个体间存在高达几十倍的差异，而这种巨大的差异在临床上经常引起严重的药物相互作用和不良反应(ZangerUMandSchwabM.CytochromeP450enzymesindrugmetabolism：regulationofgeneexpression，enzymeactivities，andimpactofgeneticvariation.PharmacolTher.2013；138(1)：103-141.)。CYP3A4的表达差异受遗传因素和环境因素的双重影响(ZangerUM，KleinK，ThomasM，RiegerJK，TremmelR，KandelBA，KleinMandMagdyT.Genetics，epigenetics，andregulationofdrug-metabolizingcytochromep450enzymes.ClinPharmacolTher.2014；95(3)：258-261.)。过去十几年的研究结果表明，CYP3A4基因多态性由于其较低的分布频率和种族差异并不能充分解释和预测CYP3A4活性的个体差异。因此，目前CYP3A4表达的调控机制仍未被完全阐明，而找出CYP3A4活性个体差异的主要原因对推动临床个体化用药和精准医疗有着非常重要的意义。长链非编码RNA(Longnon-codingRNAs，LncRNAs)，是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA，它们因缺少相应特异的开放阅读框而不具有编码蛋白质的功能。LncRNAs在基因组转录本中占有很大比例且具有多种形式，根据其在基因组的位置可以分为：双向LncRNA(bidirectionallncRNA)、外显子LncRNA(exonlncRNA)、内含子LncRNA(introniclncRNA)、基因间LncRNA(intergeniclncRNA)、正义链LncRNA(senselncRNA)以及反义链LncRNA(antisenselncRNA)(MaL，BajicVB，ZhangZ.Ontheclassificationoflongnon-codingRNAs.RNABiol.2013；10(6)：925-933.)。LncRNAs在胞核内可作为辅激活因子与转录因子发生直接相互作用而共同调控基因表达(ZhaoXY，LiS，WangGX，YuQandLinJD.AlongnoncodingRNAtranscriptionalregulatorycircuitdrivesthermogenicadipocytedifferentiation.MolCell.2014；55(3)：372-382.)。此外，lncRNs也能够通过募集一些染色质重塑复合物而抑制基因的表达(KanekoS，BonasioR，Saldana-MeyerR，YoshidaT，SonJ，NishinoK，UmezawaAandReinbergD.lnteractionsbetweenJARID2andnoncodingRNAsregulatePRC2recruitmenttochromatin.MolCell.2014；53(2)：290-300.)。LncRNAs可以在转录调控、转录后调控及表观遗传学调控等多个方面调控基因的表达。然而，LncRNAs对人体CYP3A4代谢酶表达的调控还处于未知阶段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：通过研究LncRNAs对人体CYP3A4代谢酶表达的影响，提供2个检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物，以及这2个LncRNAs生物标志物的检测方法和用途。为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物，其特征在于，前述LncRNAs生物标志物包括：HNF1A-AS1和NONHSAT031260，其中，前述HNF1A-AS1的核苷酸序列如序列表中SEQNO.4所示；NONHSAT031260的核苷酸序列如序列表中SEQNO.5所示。检测前述的LncRNAs生物标志物的方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：抽提肝脏组织总RNA；Step2：将mRNA反转录成cDNA；Step3：以GAPDH为内参基因，进行QPCR反应，具体如下(1)引物设计如下：(2)反应体系如下：反应程序设置为：50℃2min，95℃2min；95℃15s，60℃1min，循环数为40；溶解曲线反应为：95℃15s，60℃1min，95℃15s，60℃15s；在每个循环退火与延伸时读取荧光强度；Step4：对Real-timePCR数据进行分析，Real-timePCR数据以荧光强度ΔRn与循环数表示，logΔRn对循环数函数的中间值设为阈值，当某个样品的ΔRn值与该阈值有交点时，交点处的循环数记为Ct，采用相对定量的方法检测成人肝脏组织中HNF1A-AS1和NONHSAT031260的表达水平，目的基因cDNA相对于内参GAPDH增加的倍数用下面的公式表示：变化倍数＝2-ΔΔCt，ΔΔCt＝(Ct目的-CtGAPDH)Tx-(Ct目的-CtGAPDH)T0其中，Tx表示任意时间点，T0表示起始时间点；Step5：用标准曲线来检测用2-ΔΔCt方法表示的相对定量和基因绝对量的平行关系。检测前述的LncRNAs生物标志物的引物，其特征在于，序列如下：本专利技术的有益之处在于：(1)首次发现2个与人体代谢酶CYP3A4表达高度正相关的LncRNAs生物标志物HNF1A-AS1和NONHSAT031260，并提出了此标志物的检测引物和检测方法；(2)通过检测HNF1A-AS1和NONHSAT031260的表达，我们可以评估机体CYP3A4代谢酶的活性，从而可以指导临床药师调节患者使用药物剂量。附图说明图1是肝微粒体蛋白含量的标准曲线图；图2是以3号为例双倒数作图得到的线性回归方程曲线图；图3是芯片实验流程图；图4(A)是P＜0.05时6例成人肝脏中差异表达LncRNAs的聚类热图；图4(B)是P＜0.01时6例成人肝脏中差异表达LncRNAs的聚类热图；图5是筛选出的LncRNAs与HNF1A的相对位置关系图；图6是HNF1A-AS1与CYP3A4mRNA表达的相关性分析图；图7是N本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物，其特征在于，所述LncRNAs生物标志物包括：HNF1A‑AS1和NONHSAT031260，其中，所述HNF1A‑AS1的核苷酸序列如序列表中SEQ NO.4所示；NONHSAT031260的核苷酸序列如序列表中SEQ NO.5所示。
【技术特征摘要】
1.检测人体CYP3A4代谢酶表达用的LncRNAs生物标志物，其特征在于，所述LncRNAs生物标志物包括：HNF1A-AS1和NONHSAT031260，其中，所述HNF1A-AS1的核苷酸序列如序列表中SEQNO.4所示；NONHSAT031260的核苷酸序列如序列表中SEQNO.5所示。2.检测权利要求1所述的LncRNAs生物标志物的方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：抽提肝脏组织总RNA；Step2：将mRNA反转录成cDNA；Step3：以GAPDH为内参基因，进行QPCR反应，具体如下(1)引物设计如下：(2)反应体系如下：反应程序设置为：50℃2min，95℃2min；95℃15s，60℃1min，循环数为40；溶解曲线反应为：95℃15s，60℃1min，95℃15s，60℃15s...
【专利技术属性】
技术研发人员：张利荣，韩圣娜，聂亚莉，闫良，刘婧阳，孟祥光，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南,41
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