用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法技术

本发明专利技术公开用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，包括如下步骤：生物体液预处理；生物体液中咪唑啉类药物的提取和检测。建立了生物体液中四氢唑啉、赛洛唑啉、萘甲唑啉、安他唑啉、羟甲唑啉五种常见咪唑啉类药物的前处理方剂及液相色谱质谱分析方法，平均回收率达70％以上，检出限小于1ng/mL。

【技术实现步骤摘要】
用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法
本专利技术涉及法医毒物分析领域。更具体地，涉及一种生物体液中咪唑啉类药物的检测方法。
技术介绍
关于咪唑啉类药物的分析研究较少，国内只有关于药品中咪唑啉类药物有效成分的检测研究，没有生物体液中此类药物检测的报道；国外的研究也主要集中在药物质量控制上，对于生物样品中咪唑啉类药物的分析研究虽有涉及，但现有方法还远不能满足实际案件检验的需要。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种重复性好、灵敏度高、操作简便的提取和检测生物体液中咪唑啉类药物的方法。为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，包括如下步骤：(1)生物体液预处理：生物体液为血液或尿液；咪唑啉类药物为四氢唑啉、赛洛唑啉、萘甲唑啉、安他唑啉和羟甲唑啉中的一种或多种；(2)咪唑啉类药物的检测：使用液相色谱质谱LC-MS/MS检测咪唑啉类药物。本专利技术的有益效果如下：本专利技术建立了生物体液中四氢唑啉、赛洛唑啉、萘甲唑啉、安他唑啉、羟甲唑啉五种常见咪唑啉类药物的前处理方法及液相色谱质谱分析方法，平均回收率达70％以上，检出限小于1ng/mL。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明。图1四氢唑啉的结构示意图；图2赛洛唑啉的结构示意图；图3萘甲唑啉的结构示意图；图4安他唑啉的结构示意图；图5羟甲唑啉的结构示意图；图6使用50％甲醇-50％0.1％甲酸水等度洗脱所得到的液相色谱图；图710ng/mL咪唑啉类药物混合标准溶液的HPLC-MS/MS图；(四氢唑啉：1.40min；萘甲唑啉：1.74min；安他唑啉：2.68min；羟甲唑啉：2.95min；赛洛唑啉：3.26min)图8空白血样咪唑啉类药物LC-MS/MS图；图9添加血样咪唑啉类药物LC-MS/MS图；图10空白尿样咪唑啉类药物LC-MS/MS图；图11添加尿样咪唑啉类药物LC-MS/MS图；图12鼠空白血进行LC-MS/MS分析所得谱图；图13鼠空白尿进行LC-MS/MS分析所得谱图；图14体外给药3小时后指尖血进行LC-MS/MS分析所得谱图；图15体外给药1小时后所取尿液进行LC-MS/MS分析所得谱图；图16体外给药3小时后所取尿液进行LC-MS/MS分析所得谱图；图17体外给药6小时后所取尿液进行LC-MS/MS分析所得谱图。具体实施方式为了更清楚地说明本专利技术，下面结合优选实施例和附图对本专利技术做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本专利技术的保护范围。第一部分生物体液中四氢唑啉、赛洛唑啉、萘甲唑啉、安他唑啉、羟甲唑啉的检测方法一、实验方法1.1试剂、材料及仪器1.1.1试剂与材料：四氢唑啉、赛洛唑啉、萘甲唑啉、羟甲唑啉、安他唑啉均购自美国药典(USP)，纯度99.9％；甲醇、乙腈、甲酸、甲酸铵、乙酸铵(色谱纯，FisherScientific公司)；乙醇、二氯甲烷、正己烷、丙酮、乙酸乙酯、氨水、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠(分析纯，北京化学试剂公司)；0.22μm微孔有机滤膜(北京八方公司)；去离子水经由Milliporesimplicity纯水系统制备；OasisMCX(60mg，3cc)和OasisHLB(60mg，3cc)固相萃取柱，均购自Waters公司。1.1.2生物样品：空白人全血购自北京市红十字血液中心；空白尿采自一周内未服用任何药物的健康志愿者。1.1.3标准溶液的配制1.1.3.1储备液的配制：四氢唑啉储备液的配制：精确称取四氢唑啉标准品10.0mg于10mL容量瓶中，加少量甲醇溶解并定容至刻度，配制成含1.0mg/mL四氢唑啉储备液，4℃冰箱中保存，备用。赛洛唑啉、萘甲唑啉、羟甲唑啉、安他唑啉储备液的配制同四氢唑啉储备液的配制。1.1.3.2工作液的配制：单一标准工作液的配置：分别移取各标准储备液一定量，用甲醇稀释为100ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.1ng/mL浓度的四氢唑啉、赛洛唑啉、萘甲唑啉、羟甲唑啉、安他唑啉的单一标准工作溶液，4℃冰箱中保存。混合标准物质工作液的配置：移取1.0mg/mL四氢唑啉储备液1mL、1.0mg/mL赛洛唑啉储备液1mL、1.0mg/mL萘甲唑啉储备液1mL、1.0mg/mL安他唑啉储备液1mL及1.0mg/mL羟甲唑啉储备液1mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成5种咪唑啉类药物浓度均为100ng/mL的混合标准工作液。分别移取上述混合标准工作液一定量，用甲醇稀释为10ng/mL、1ng/mL、0.1ng/mL的混合标准工作液，4℃冰箱中保存。1.1.3.3pH6的磷酸盐缓冲液的配制量取1mol/L的磷酸二氢钠溶液877mL和1mol/L的磷酸氢二钠溶液，混匀，得到pH为6的磷酸盐缓冲液。1.1.4仪器：超高效液相色谱-质谱联用仪：岛津LC-30AD(日本)，ABSciexQtrap5500(美国)；吉尔森GX-274ASPEC四通道自动固相萃取仪(美国)；BP210s电子天平(德国Sartorius公司)；MilliporeSimLicity纯水净化系统(法国)；ScientificIndustries漩涡振荡器(USA)；SORVALL高速冷冻离心机(德国)；EYELA高速振荡器(日本)；DSY-Ⅱ自动快速浓缩仪(北京精华苑科技有限公司)；EYELACUTEMIXERCM100振荡器(日本京东)；10～100μL，10～1000μL自动移液枪(德国Eppendorf)1.2样品前处理方法本专利技术用乙腈沉淀蛋白、液-液萃取和固相萃取等三种方法对血液、尿液中五种常见咪唑啉类药物的提取进行了比较，具体操作如下：1.2.1乙腈沉淀蛋白法：取血液或尿液1mL于15mL塑料离心管中，加入2mL乙腈，振荡10min、离心(8000r/min，10min)，取上清液过0.22μm的有机系微孔滤膜，供LC-MS/MS分析。1.2.2液-液萃取法取血液或尿液1mL，用氢氧化钠溶液调pH＝10，5mL丙酮振荡提取，高速离心(8000r/min，10min)，转移有机相至尖底玻璃试管中，再用5mL丙酮重复提取一次，合并有机相，50℃空气流下挥干，残渣用200μL甲醇溶解定容，过0.22μm的有机系微孔滤膜，供LC-MS/MS分析。1.2.3固相萃取法1.2.3.1HLB柱固相萃取方法血样预处理：取1mL血液(尿液)，加入1mLpH6的磷酸盐缓冲液，混旋1分钟，高速离心(10min，8000r/min)后取上清液待过柱；柱活化：取HLB固相萃取柱，依次以2mL甲醇、2mL水活化；过柱：上清液分别过柱，流速1.0mL/min；淋洗：2mL5％甲醇-水淋洗(甲醇和水的体积比为5:95)；洗脱：用1mL甲醇洗脱，收集洗脱液；挥干定容：50℃空气吹干仪上吹干，残留物用200μL甲醇溶解，过0.22μm的有机系微孔滤膜，供LC-MS/MS分析。1.2.3.2MCX柱固相萃取方法血样预处理：取1mL血液(尿液)，加入1mLpH6的磷酸盐缓冲液，混旋1分钟，高速离心(10min，8000r/min)后取上清液待过柱；柱活化：取MCX固相萃取柱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)咪唑啉类药物的检测。

【技术特征摘要】
1.用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)咪唑啉类药物的检测。2.根据权利要求1所述用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，生物体液为血液或尿液；咪唑啉类药物为四氢唑啉、赛洛唑啉、萘甲唑啉、安他唑啉和羟甲唑啉中的一种或多种。3.根据权利要求2所述用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，生物体液预处理采用如下方法之一：乙腈沉淀蛋白法、液-液萃取法和固相萃取法。4.根据权利要求3所述用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述固相萃取法为HLB柱固相萃取方法或MCX柱固相萃取方法。5.根据权利要求4所述用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，使用液相色谱质谱LC-MS/MS检测咪唑啉类药物。6.根据权利要求5所述用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，其特征在于，步骤(1)中：所述乙腈沉淀蛋白法包括如下步骤：取生物体液1mL于15mL塑料离心管中，加入2mL乙腈，振荡10min；离心10min、转速为8000r/min，取上清液过0.22μm的有机系微孔滤膜，滤液即为乙腈沉淀蛋白法预处理液，留待LC-MS/MS检测；所述液-液萃取法包括如下步骤：取生物体液1mL，用氢氧化钠溶液调pH＝10，5mL丙酮振荡提取，离心10min、转速为8000r/min，转移有机相至尖底玻璃试管中，再用5mL丙酮重复提取一次，合并有机相，50℃空气流下挥干，残渣用200μL甲醇溶解定容，过0.22μm的有机系微孔滤膜，滤液即为液-液萃取法预处理液，留待LC-MS/MS检测；所述HLB柱固相萃取方法包括如下步骤：取生物体液1mL，加入1mLpH6的磷酸盐缓冲液，混旋1分钟，离心10min、转速8000r/min，后取上清液待过柱；柱活化：取HLB固相萃取柱，依次以2mL甲醇、2mL水活化；过柱：上清液分别过柱，流速1.0mL/min；淋洗：2mL甲醇-水淋洗，甲醇与水的体积比为5:95；洗脱：用1mL甲醇洗脱，收集洗脱液；挥干定容：50℃空气吹干仪上吹干，残留物用200μL甲醇溶解，过0.22μm的有机系微孔...

【专利技术属性】
技术研发人员：任昕昕，崔冠峰，王爱华，王瑞花，宋歌，张云峰，常靖，黄健，董林沛，于忠山，王芳琳，董颖，侯小平，魏春明，栾玉静，杜鸿雁，张蕾萍，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京,11