【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测领域，具体涉及一种毛干高丰度角蛋白去除试剂盒及其制备方法与应用。
技术介绍
1、毛干是在犯罪现场发现的最常见的生物物证之一，利用毛干进行个体识别将有利于案件的侦破。但毛干中核dna降解迅速，很难通过常规的dna分析来实现个体识别。然而，毛干中蛋白质稳定性高，并且包含大量的由基因组中的非同义单核苷酸多态性(nssnp)翻译而来的单氨基酸多态性(saps)位点，毛干蛋白质组有望成为实现个体识别的有力手段。然而一些高丰度蛋白质的存在，尤其是角蛋白，使得低丰度蛋白质的分辨率下降，严重影响低丰度蛋白质的鉴定和检测。提高对低丰度蛋白检测的灵敏度和分辨率，关键在于去除样品中的角蛋白。但目前还没有用于毛干中角蛋白的去除方法。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是如何提高对低丰度蛋白检测的灵敏度和分辨率，鉴定和检测低丰度蛋白质。
2、为了解决以上技术问题，本专利技术提供了一种去除毛干样品中角蛋白的试剂盒。
3、本专利技术提供的去除毛干样品中角蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括免疫亲和试剂，免疫亲和试剂包括是由固相载体和与其偶联的角蛋白抗体组成；所述角蛋白抗体是以角蛋白为免疫原得到的抗体。
4、所述角蛋白可由如下至少一种基因编码：kt33b、kt33a、krt86、krt85、krt83、krt82、krt81、krt38、krt36、krt35、krt34、kra99、kra96、kra93、kra91、kra43、kra33、kra32、
5、所述角蛋白抗体可为krt85兔多克隆抗体抗体。所述krt85兔多克隆抗体抗体可为普健生物科技有限公司的产品货号为ata32047的产品。
6、所述抗体可为多克隆抗体。
7、上述试剂盒中，所述角蛋白按照包括如下步骤的方法制备：使所述角蛋白的编码基因在生物中进行表达得到所述角蛋白，所述生物为微生物、植物或非人动物，所述角蛋白可由如下至少一种基因编码：kt33b、kt33a、krt86、krt85、krt83、krt82、krt81、krt38、krt36、krt35、krt34、kra99、kra96、kra93、kra91、kra43、kra33、kra32、kra31、kra24、kra22、kra13、kr411、kr241、kr161、kr132、kr131、kr111、kr10c、kr10a、k2c80、k2c75、k2c7、k2c6b、k2c5、k2c1、k22e、k1h1、k1c9、k1c40、k1c39、k1c23、k1c17、k1c16、k1c15、k1c14和k1c10。
8、所述生物为c1)-c4)中的任一种:
9、c1)原核微生物，
10、c2)革兰氏阴性细菌，
11、c3)埃希氏菌属细菌，
12、c4)大肠杆菌bl21(de3)。
13、上述试剂盒中，所述固相载体上偶联葡萄球菌a蛋白。
14、上述试剂盒中，所述免疫亲和试剂通过以下步骤获得：将葡萄球菌a蛋白偶联在所述固相载体，得到偶联有葡萄球菌a蛋白的固相载体，将所述角蛋白抗体与所述偶联有葡萄球菌a蛋白的固相载体进行偶联，得到名称为角蛋白抗体-spa-固相载体偶联有所述角蛋白抗体和葡萄球菌a蛋白的固相载体，用交联剂对所述角蛋白抗体-spa-固相载体进行交联后得到免疫亲和试剂。
15、所述固相载体可由多孔材料制成，多孔材料可选自琼脂糖凝胶微球、纤维微球、磁珠、硅胶微球、活性炭和树脂微球中的一种。
16、上述试剂盒中的所述免疫亲和试剂也属于本专利技术所要保护的范围。
17、所述的免疫亲和试剂为抗体-spa-固相载体进行交联后得到免疫亲和试剂。
18、所述的免疫亲和试剂为填料的免疫亲和色谱柱。
19、本专利技术还提供了去除毛干样品中角蛋白的试剂盒，所述试剂盒含有上述的免疫亲和色谱柱。
20、上述试剂盒、免疫亲和试剂、免疫亲和色谱柱在如下任一种中的应用：
21、1)去除毛干样品中的角蛋白；
22、2)富集毛干样品中的目的蛋白。
23、本专利技术还提供了一种毛干样品中去除角蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：
24、1)处理待测毛干样品，获得毛干蛋白溶液，
25、2)将步骤1)获得的毛干蛋白溶液用上述免疫亲和色谱柱进行层析，收集流出液，获得去除毛干样品中的角蛋白溶液。
26、本专利技术利用免疫亲和方法，利用抗原抗体特异性结合的原理，将角蛋白等高丰度蛋白的抗体联接在载体上去除样品中的高丰度蛋白。免疫亲和柱操作简单，特异性的高丰度蛋白抗体只识别角蛋白等高丰度蛋白，因此能够提高低丰度蛋白质的分辨率，进而提高毛干低丰度蛋白质的鉴定和检测。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种去除毛干样品中角蛋白的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括免疫亲和试剂，免疫亲和试剂包括是由固相载体和与其偶联的角蛋白抗体组成；所述角蛋白抗体是以角蛋白为免疫原得到的抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述固相载体上偶联葡萄球菌A蛋白。
3.根据权利要求1或2中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述免疫亲和试剂通过以下步骤获得：将葡萄球菌A蛋白偶联在所述固相载体，得到偶联有葡萄球菌A蛋白的固相载体，将所述角蛋白抗体与所述偶联有葡萄球菌A蛋白的固相载体进行偶联，得到名称为角蛋白抗体-SPA-固相载体的偶联有所述角蛋白抗体和葡萄球菌A蛋白的固相载体，用交联剂对所述角蛋白抗体-SPA-固相载体进行交联后得到免疫亲和试剂。
4.权利要求1至3中任一所述的试剂盒中的所述免疫亲和试剂。
5.以权利要求4所述的免疫亲和试剂为填料的免疫亲和色谱柱。
6.去除毛干样品中角蛋白的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求5所述的免疫亲和色谱柱。
7.权利要求1至3中任一所述的试剂盒、权利要求4所述的免疫亲和试剂
8.一种毛干样品中去除角蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种去除毛干样品中角蛋白的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括免疫亲和试剂，免疫亲和试剂包括是由固相载体和与其偶联的角蛋白抗体组成；所述角蛋白抗体是以角蛋白为免疫原得到的抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述固相载体上偶联葡萄球菌a蛋白。
3.根据权利要求1或2中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述免疫亲和试剂通过以下步骤获得：将葡萄球菌a蛋白偶联在所述固相载体，得到偶联有葡萄球菌a蛋白的固相载体，将所述角蛋白抗体与所述偶联有葡萄球菌a蛋白的固相载体进行偶联，得到名称为角蛋白抗体-spa-固相载体的偶联有所述角蛋白抗体和葡萄球菌a...
【专利技术属性】
技术研发人员：季安全，丰蕾，刘健慧，叶健，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：
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