一种α1- 抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种α1‑抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡及其制备方法，旨在提供一种快速简便，灵敏度高且检测结果可靠的α1‑抗胰蛋白酶检测方法；一种α1‑抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，包括盒体，所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗α1‑抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条α1‑抗胰蛋白酶抗体检测区T线和一条质控区C线，T线与C线平行排列。利用本发明专利技术的试剂盒和方法具有灵敏度高、特异性强、快速、简便、可实现对分析物进行定量或定性的测定等优点。

A reagent card for detection of alpha 1-antitrypsin by immunochromatography and its preparation method

The invention discloses an alpha 1 anti-trypsin immunochromatographic detection reagent card and a preparation method thereof, aiming at providing a fast, simple, sensitive and reliable alpha 1 anti-trypsin detection method, and an alpha 1 anti-trypsin immunochromatographic detection reagent card, including a box body, which is provided with a bottom plate and a reliable detection result. The box cover is provided with a sampling hole and a result detection window. The box body is provided with a test paper. The bottom plate is arranged under the test paper. The test paper is provided with a test area. The test area is provided with a sample pad, an anti-alpha 1 anti-trypsin antibody tracer marker pad, a coating film and a water absorption pad, and the coating film is covered with a sample pad. There is a T-line in the detection area of anti-trypsin antibody and a C-line in the quality control area. The T-line is parallel to the C-line. The kit and method of the invention have the advantages of high sensitivity, strong specificity, rapidity, simplicity, and can realize the quantitative or qualitative determination of the analyte.

【技术实现步骤摘要】
一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡及其制备方法
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种测定血液（血清、血浆、全血）中的α1-抗胰蛋白酶含量的检测试剂卡及其制备方法。
技术介绍
α1-抗胰蛋白酶(AAT)又称α1胰蛋白酶抑制剂，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员，为单链糖蛋白，由一条连接3个寡糖链的多肽链组成，分子量约为52kDa，PI值为4.8。作为人体内最重要的蛋白酶抑制物，α1-抗胰蛋白酶主要由肝细胞合成，在正常的血浆中能抑制90％以上的蛋白酶的活性，其主要能够抑制中性粒弹性蛋白酶，在所有的丝氨酸蛋白酶抑制剂中α1-抗胰蛋白酶的血管通透性较强，因此α1-抗胰蛋白酶在炎症局部往往浓度很高，而且对弹性蛋白酶的专一性更强，主要抑制胰蛋白酶和嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的活性，保护正常细胞不受蛋白酶的破坏和损害，可抑制感染和炎症，起到维持机体环境稳定的作用。α1-抗胰蛋白酶作为一种重要的急性期反应蛋白，其在正常人体内血清中浓度的参考范围是0.9-2.0g/L，在子宫内膜异位症、炎症反应（如：感染性疾病，类风湿疾病）、组织坏死、急性肝炎、肝硬化、肝坏死、恶性肿瘤、胶原病、妊娠、脑外伤、外科手术后、系统性红斑狼疮、斑疹伤寒、烧伤恢复期等疾病见升高；降低见于先天性缺乏症或减少症、新生儿呼吸窘迫综合征、重症肝炎、急性胰腺炎、肺气肿、十二指肠球部溃疡、肾病综合征、蛋白丧失性胃肠症、甲状腺功能亢进症、弥散性血管内凝血、营养不良、未成熟儿、肾移植早期排斥反应等疾病。目前，α1-抗胰蛋白酶检测的主要方法有：血清胰蛋白酶抑制容量试验、单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法和ELISA法，但均存在操作繁琐，耗时长的缺点，不适用于急诊病人和临床病人及时诊断。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术的目的在于提供一种操作简单、诊断迅速、检检测结果可靠的α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡。为了达到本专利技术的目的，本专利技术提供的技术方案如下：一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，包括盒体，所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条α1-抗胰蛋白酶抗体检测区T线和一条质控区C线，所述α1-抗胰蛋白酶抗体检测区T线与质控区C线平行排列。进一步，所述包被膜两端分别与吸水垫和抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫相互交叠连接，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫上压贴有样品垫，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物表面设有修饰活性基团，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物为量子点、镧系稀土络合物、纳米荧光微球或有色纳米颗粒，所述量子点为CdSe、ZnS，所述镧系稀土络合物为Eu(TTA)3Phen，所述纳米荧光微球为聚苯乙烯纳米荧光微球，所述有色纳米颗粒为胶体金、有色聚苯乙烯微球。进一步，所述样品垫为玻璃纤维样品垫，所述包被膜为硝酸纤维素膜，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫为涂布标记α1-抗胰蛋白酶抗体的玻璃纤维或聚酯纤维。一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡的制备方法，包括样品垫、抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫与包被膜的制备方法。进一步，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫包括量子点、稀土络合物标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体，聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体和胶体金标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体。进一步，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点与稀土络合物标记垫的制备步骤为：①用标记缓冲液将水溶性羧基量子点、镧系稀土络合物溶解；②在量子点、镧系稀土络合物溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液，室温反应1～2小时，超滤除去未反应的化学物质后加入标记缓冲液；③将抗α1-抗胰蛋白酶抗体加入上述活化的量子点、镧系稀土络合物溶液中，室温偶联反应1～2小时，加入封闭液反应30～60min，超滤除去未反应的化学物质后加入抗体保存液，即可得抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记溶液；④将上述所得的抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记垫；所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记垫的制备步骤为：①用标记缓冲液将羧基聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球稀释至固含量约0.2%；②在上述聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球溶液中加入EDC溶液和sulfo-NHS溶液，活化10～20min，高速离心30min，去上清后加入适量抗α1-抗胰蛋白酶抗体溶液，混合偶联反应1～2h；③将聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球溶液与抗α1-抗胰蛋白酶抗体偶联溶液，加入封闭液反应30～60min，高速离心20min，去上清，加入抗体保存液即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记溶液；④将上述所得的标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记垫；所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体胶体金标记垫的制备步骤为：②制备粒径在30nm左右的胶体金溶液；②在磁力搅拌下，胶体金溶液中逐滴加入0.05MK2CO3调节pH值为8.0～8.5，加入抗α1-抗胰蛋白酶抗体，减慢转速，充分混匀30min；按BSA终浓度质量比1%～2%，加入10％的BSA溶液进行封闭反应，充分混匀30min；③在冷冻离心机中(4～10)℃、高速离心30min，弃上清，按原初始标记时所用胶体金溶液体积的40％～100％加入抗体保存液复溶，即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体胶体金标记溶液；④将上述所得的标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体胶体金标记垫。进一步，所述包被膜的制备方法的步骤为：①将羊抗兔或羊抗鼠抗体用0.02M磷酸盐缓冲液稀释0.5～2mg/mL，加入3%的甲醇，即为质控区工作液；②将抗α1-抗胰蛋白酶抗体用0.02M磷酸盐缓冲液稀释至0.8～1.5mg/mL，加入3%的甲醇，即为检测区工作液；③将步骤①、步骤②所得的溶液，用喷金划膜仪以0.8～1.2μL/cm包被到硝酸纤维膜上，检测区与质控区间距为0.4～0.7cm，位于硝酸纤维素膜中间位置，将硝酸纤维膜放入37℃烘箱中，干燥即可。进一步，所述样品垫的制备方法为将样品垫用样品垫缓冲液浸泡，所述的样品垫缓冲液为含0.5～5wt%BSA、0.5～5wt%聚乙烯吡咯烷酮、0.5～5wt%聚乙二醇、0.1～5wt%吐温-20、1～5wt%曲拉通-100的0.01M磷酸盐缓冲液。进一步，所述标记缓冲液为pH5.0～9.0的0.1MMES缓冲液；所述抗体保存液为含1wt%BSA，20wt%蔗糖，10wt%海藻糖，0.1wt%吐温-20，0.1wt%聚乙烯吡咯烷酮的0.05MTris-HCl缓冲液。附图说明图1是本专利技术的检测试剂卡结构示意图；图2是本专利技术的检测试剂卡的盒盖俯视图；图3是本专利技术的检测试纸结构示意图；图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种α1‑抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，包括盒体，其特征在于：所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗α1‑抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条α1‑抗胰蛋白酶抗体检测区T线和一条质控区C线，所述α1‑抗胰蛋白酶抗体检测区T线与质控区C线平行排列。

【技术特征摘要】
1.一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，包括盒体，其特征在于：所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条α1-抗胰蛋白酶抗体检测区T线和一条质控区C线，所述α1-抗胰蛋白酶抗体检测区T线与质控区C线平行排列。2.根据权利要求1所述的一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，其特征在于：所述包被膜两端分别与吸水垫和抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫相互交叠连接，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫上压贴有样品垫，所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物表面设有修饰活性基团；所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物为量子点、镧系稀土络合物、纳米荧光微球或有色纳米颗粒，所述量子点为CdSe、ZnS；所述镧系稀土络合物为Eu(TTA)3Phen；所述纳米荧光微球为聚苯乙烯纳米荧光微球；所述有色纳米颗粒为胶体金、有色聚苯乙烯微球。3.根据权利要求1所述的一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维样品垫；所述包被膜为硝酸纤维素膜；所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫为玻璃纤维或聚酯纤维。4.一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述方法包括样品垫、抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫与包被膜的制备方法。5.根据权利要求4所述的一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体示踪物标记垫包括量子点标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体、稀土络合物标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体、聚苯乙烯纳米荧光微球标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体、有色聚苯乙烯微球标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体和胶体金标记抗α1-抗胰蛋白酶抗体。6.根据权利要求5所述的一种α1-抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点与稀土络合物标记垫的制备步骤为：①用标记缓冲液将水溶性羧基量子点、镧系稀土络合物溶解；②在量子点、镧系稀土络合物溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液，室温反应1～2小时，超滤除去未反应的化学物质后加入标记缓冲液；③将抗α1-抗胰蛋白酶抗体加入上述活化的量子点、镧系稀土络合物溶液中，室温偶联反应1～2小时，加入封闭液反应30～60min，超滤除去未反应的化学物质后加入抗体保存液，即可得抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记溶液；④将上述所得的抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗α1-抗胰蛋白酶抗体量子点、稀土络合物标记垫；所述抗α1-抗胰蛋白酶抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记垫的制备步骤为：①用标记缓冲液将羧基聚...

【专利技术属性】
技术研发人员：于龙波，于永涛，黎权，刘日俊，
申请(专利权)人：广州华澳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44