一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法技术

一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，所述胃癌风险标志物为胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ与胃泌素17，试纸条包括样品垫、胃癌风险标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，包被膜上设有三条胃癌风险标志物定量检测线和一条质控区C线。利用磁场将样本中的被测物质浓缩后，利用低背景、高灵敏度的荧光免疫层析法，进行检测被测物质，解决了POCT类产品灵敏度低的问题。可以避免免疫侧向层析试剂检测血液样本时，为降低血液中其他物质的干扰，通常将样本进行稀释后进行测试而造成的灵敏度偏低的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法
本专利技术属于生物医药领域，涉及基于用磁性稀土荧光微球作为示踪标记物的，胃癌风险标志物联合定量检测试纸及其制备方法，具体地说是，一种测定血液（血清、血浆、全血）中的胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ/胃泌素17含量的检测试剂卡。
技术介绍
胃蛋白酶原（PG）是胃蛋白酶的前体，依据其生化性质和免疫原性将其分成两个亚群。1-5组分的免疫原性相同称为PGI，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌，组分6-7称为PGⅡ，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原II。通常情况下，约有1%的PG透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，进入血液循环的PG在血液中非常稳定。血清PGI和PGII反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能。。胃泌素是一种重要的胃肠激素，它主要由G细胞分泌。G细胞是典型的开放型细胞，以胃窦部最多，其次是胃底、十二指肠和空肠等处。血清胃泌素17是由胃肠道G细胞分泌的多肽类激素,其与胆囊收缩素受体结合后通过一系列信号转导而发挥生物学效应,主要参与刺激胃酸分泌及营养胃肠道黏膜,近年来一些研究表明血清G17还有促进增殖和抑制凋亡的作用.血清G17可以提示患者胃黏膜的功能状态,用于胃癌及癌前疾病的筛查,因此在胃肠疾病的诊断中具有重要意义.目前常见的血清胃蛋白酶原I、胃蛋白酶原Ⅱ、胃泌素17的检测方法主要有：乳胶增强免疫比浊法、酶联免疫法、时间分辨荧光免疫分析法、胶体金免疫层析法等。乳胶增强免疫比浊法、酶联免疫法、时间分辨荧光免疫分析法，操作过程复杂，需要大量仪器与设备及专业员操作，检测时间较长，检测灵敏度高。胶体金免疫层析法操作简单，但灵敏度不高，无法精确定量。胃蛋白酶原Ⅰ与胃蛋白酶原Ⅱ联合检测可提高检测敏感性和特异性，对鉴别诊断提供更充分的依据，二者联合检测具有优势互补和临床增值的意义，比单独检测一个项目更有意义。
技术实现思路
为解决以上问题，方便测定血液（血清、血浆、全血）中的胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ/胃泌素17含量的检测需求，本专利技术提供了一种快速简便，灵敏度高且检测结果可靠的胃癌风险标志物定量检测方法及试纸。为了达到本专利技术的目的，本专利技术技术方案如下：一种胃癌风险标志物定量检测试纸，所述胃癌风险标志物为胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ与胃泌素17，所述胃癌风险标志物定量检测试纸包括盒体，所述盒体包括底板与盒盖，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，检测试纸上方与盒盖连接；所述盒盖设有通孔区；所述通孔区设有加样孔和结果检测窗口；所述检测试纸上方设有检测区，检测区与通孔区相对应；所述检测区包括样品垫、胃癌风险标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有三条胃癌风险标志物定量检测线和一条质控区C线，所述检测线与质控区C线平行排列。进一步，所述磁性稀土荧光微球标记垫上的磁性稀土荧光微球为高分子材料包裹磁性稀土荧光复合物的纳米微球，所述磁性稀土荧光微球的球径为10~500nm，荧光发射波长范围为400~800nm，磁性稀土荧光微球表面修饰活性基团为为氨基、羧基或巯基。进一步，所述包被膜两端分别与吸水垫和胃癌风险标志物抗体标记垫相互交叠连接，所述包被膜为硝酸纤维素膜；在胃癌风险标志物抗体标记垫上压贴有样品垫，所述样品垫为玻璃纤维样品垫。进一步，所述胃癌风险标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫为玻璃纤维或聚酯纤维。一种胃癌风险标志物定量检测试纸制备方法，包括胃癌风险标志物抗体标记与制备检测试纸，所述胃癌风险标志物抗体标记步骤：①用羧基化聚苯乙烯微球包裹Eu3+-Fe3O4复合物制备的磁性稀土荧光微球，粒径200nm，固含量为1%；②取上述微球1mL，加入5mLpH7.00.02M3-(N-玛琳代)丙磺酸缓冲液（MOPS），混匀，25000rpm离心10min，弃上清；再加入5mLMOPS，90W超声，工作2s，间歇5s，重复2次，25000rpm离心10min，弃上清；③再次加入5mLMOPS，90W超声，工作2s，间歇5s，重复2次，完成对微球的清洗；④在清洗后微球中加入15mgEDC和50mgsulfo-NHS，涡旋混匀后，37℃反应15min；⑤反应完成后，加入2-巯基乙醇8.6μl，终止羧基的活化；⑥分别加入胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ、胃泌素17对应抗体各1mg，置于旋转培养箱上，37℃反应90~120min；⑦然后加入100μL5%BSA和100μL1%PEG20000，对未标记的位点进行封闭，置于旋转培养箱上，37℃反应60min；⑧反应结束后，将上述液体2000rpm离心15min，弃上清，加入保存液（含1%BSA、10%蔗糖、2%海藻糖的pH8.00.2M硼酸硼砂缓冲液），5mL，超声2s；⑨将标记后的微球稀释50~100倍，每支200μL分装，即为单人份半成品。胃癌风险标志物联合定量检测试纸制备步骤：①用BIODOT三维喷金点膜仪，以1μL/cm参数，在硝酸纤维素膜上包被胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ、胃泌素17相应的抗体三条检测线，和一条羊抗鼠/羊抗兔IgG质控线，37℃干燥16小时，作为反应膜。②用含0.5%Tween-20的0.1MPBS溶液浸泡玻璃纤维，然后37℃干燥16小时，裁剪17mm×300mm为作为样品垫。③将样品垫、反应膜和吸水纸（22mm×300mm）以层层叠压的形式黏贴组装在底板上。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：试纸条包括样品垫、胃癌风险标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，包被膜上设有三条胃癌风险标志物定量检测线和一条质控区C线，利用磁场将样本中的被测物质浓缩后，利用低背景、高灵敏度的荧光免疫层析法，进行检测被测物质，解决了POCT类产品灵敏度低的问题。可以避免免疫侧向层析试剂检测血液样本时，为降低血液中其他物质的干扰，通常将样本进行稀释后进行测试而造成的灵敏度偏低的问题。附图说明图1为本专利技术胃蛋白酶原Ⅰ测试曲线；图2为本专利技术胃蛋白酶原Ⅱ测试曲线；图3为本专利技术胃泌素17测试曲线；图4为本专利技术胃蛋白酶原Ⅰ测定方法精密度试验结果；图5为本专利技术胃蛋白酶原Ⅱ测定方法精密度试验结果；图6为本专利技术胃泌素17测定方法精密度试验结果；图7为本专利技术的结构示意图；图中：1、底板；2、样品垫；3、胃癌风险标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫；4、包被膜；5、吸水垫；6、盒体；61、盒盖；71、加样孔；72、结果观察窗口；8、胃癌风险标志物定量检测线；9、质控区C线。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。除非上下文另有特定清楚的描述，本专利技术中的检测物名称和参数，数量既可以单个的形式存在，也可以多个的形式存在，本专利技术并不对此进行限定。本专利技术中的步骤虽然用标号进行了排列，但并不用于限定步骤的先后次序，除非明确说明了步骤的次序或者某步骤的执行需要其他步骤作为基础，否则步骤的相对次序是可以调整的。可以理解，本文中所使用的术语“和/或”涉及且涵盖相关联的所列项目中的一者或一者以上的任何和所有可能的组合。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，所述胃癌风险标志物包括胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ与胃泌素17，其特征在于：所述胃癌风险标志物联合定量检测试纸包括盒体，所述盒体包括底板与盒盖，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，检测试纸上方与盒盖连接；所述盒盖设有通孔区；所述检测试纸上方设有检测区，检测区与通孔区相对应；所述检测区包括样品垫、胃癌风险标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有三条胃癌风险标志物定量检测线和一条质控区C线，所述检测线与质控区C线平行排列。

【技术特征摘要】
1.一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，所述胃癌风险标志物包括胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ与胃泌素17，其特征在于：所述胃癌风险标志物联合定量检测试纸包括盒体，所述盒体包括底板与盒盖，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，检测试纸上方与盒盖连接；所述盒盖设有通孔区；所述检测试纸上方设有检测区，检测区与通孔区相对应；所述检测区包括样品垫、胃癌风险标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有三条胃癌风险标志物定量检测线和一条质控区C线，所述检测线与质控区C线平行排列。2.根据权利要求1所述一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，其特征在于：所述磁性稀土荧光微球标记垫上的磁性稀土荧光微球为高分子材料包裹磁性稀土荧光复合物的纳米微球，所述磁性稀土荧光微球的球径为10~500nm，荧光发射波长范围为400~800nm，磁性稀土荧光微球表面修饰活性基团为为氨基、羧基或巯基。3.根据权利要求1所述一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，其特征在于：所述包被膜两端分别与吸水垫和胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ/胃泌素17抗体标记垫相互交叠连接；所述包被膜为硝酸纤维素膜；所述胃癌风险标志物抗体标记垫上方压贴有样品垫，所述样品垫为玻璃纤维样品垫。4.根据权利要求3所述一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，其特征在于：所述胃癌风险标志物抗体标记垫为玻璃纤维或聚酯纤维。5.一种胃癌风险标志物联合定量检测试纸及制备方法，包括胃癌风险标志物抗体标记与制备检测试纸，所述胃癌风险标志物抗体标记步骤：①用羧基化聚苯乙烯微球包裹Eu3+-Fe3O4复合物制备的磁性稀土荧光微球，粒径200nm，固含量为1%；②取上述微球1mL，加入5mLpH7.00.02...

【专利技术属性】
技术研发人员：于龙波，于永涛，黎权，刘日俊，
申请(专利权)人：广州华澳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44