一种和肽素免疫层析检测试剂卡及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种和肽素免疫层析检测试剂卡及其制备方法，旨在提供一种快速简便，灵敏度高且检测结果可靠的和肽素检测方法；该检测试剂卡，包括盒体，所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗和肽素抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条和肽素抗体检测区T线和一条质控区C线，所述检测区T线与质控区C线平行排列。利用本发明专利技术的试剂盒和方法具有灵敏度高、特异性强、快速、简便、可实现对分析物进行定量或定性的测定等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种和肽素免疫层析检测试剂卡及其制备方法
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种测定血液（血清、血浆、全血）中的和肽素含量的检测试剂卡及其制备方法。
技术介绍
下丘脑-脑垂体-肾上腺这一条轴线也被称作“压力轴线”，每次在中风发作时都会被激活。在发病过程中，脑垂体后叶分泌的精氨酸加压素（AVP，又称抗利尿激素、后叶加压素等）扮演着重要角色。然而，精氨酸加压素（AVP）呈脉冲式分泌、释放，结构极不稳定，半衰期短，极易被清除，很难在体外进行准确测量。和肽素（copeptin）作为精氨酸加压素原的碳端部分肽段，不但与AVP等摩尔浓度产生，而且稳定性好、检测方便，因此它可以作为AVP检测的理想替代物，在中风、心衰患者的诊断、病情和预后评估方面发挥积极作用。但现市面上的试剂盒检测操作复杂，费时且结果具有一定偏差，不能满足检测需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作简单、诊断迅速、检测结果可靠的和肽素免疫层析检测试剂卡。为了达到本专利技术的目的，本专利技术提供的技术方案如下：一种和肽素免疫层析检测试剂卡，包括盒体，所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗和肽素抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条和肽素抗体检测区T线和一条质控区C线，所述和肽素抗体检测区T线与质控区C线平行排列。进一步，所述包被膜两端分别与吸水垫和抗和肽素抗体示踪物标记垫相互交叠连接，所述抗和肽素抗体示踪物标记垫上压贴有样品垫，所述抗和肽素抗体示踪物表面设有修饰活性基团，优选地活性基团为氨基、羧基或巯基，所述抗和肽素抗体示踪物为量子点、镧系稀土络合物、纳米荧光微球或有色纳米颗粒，所述量子点为CdSe、ZnS，所述镧系稀土络合物为Eu(TTA)3Phen，所述纳米荧光微球为聚苯乙烯纳米荧光微球，所述有色纳米颗粒为胶体金、有色聚苯乙烯微球。进一步，所述样品垫为玻璃纤维样品垫，所述包被膜为硝酸纤维素膜，所述抗和肽素抗体示踪物标记垫为涂布标记和肽素抗体玻璃纤维或聚酯纤维。一种和肽素免疫层析检测试剂卡的制备方法，包括样品垫、抗和肽素抗体示踪物标记垫与包被膜的制备方法。进一步，所述抗和肽素抗体示踪物标记垫包括量子点、稀土络合物标记抗和肽素抗体，聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记抗和肽素抗体和胶体金标记抗和肽素抗体。进一步，所述抗和肽素抗体量子点与稀土络合物标记垫的制备步骤为：①用标记缓冲液将水溶性羧基量子点、镧系稀土络合物溶解；②在量子点、镧系稀土络合物溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液，室温反应1～2小时，超滤除去未反应的化学物质后加入标记缓冲液；③将抗和肽素抗体加入上述活化的量子点、镧系稀土络合物溶液中，室温偶联反应1～2小时，加入封闭液反应30～60min，超滤除去未反应的化学物质后加入抗体保存液，即可得抗和肽素抗体量子点、稀土络合物标记溶液；④将上述所得的抗和肽素抗体量子点、稀土络合物标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗和肽素抗体量子点、稀土络合物标记垫；所述抗和肽素抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记垫的制备步骤为：①用标记缓冲液将羧基聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球稀释至固含量约0.2%；②在上述聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球溶液中加入EDC溶液和sulfo-NHS溶液，活化10～20min，高速离心30min，去上清后加入适量抗和肽素抗体溶液，混合偶联反应1～2h；③将聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球溶液与抗和肽素抗体偶联溶液，加入封闭液反应30～60min，高速离心20min，去上清，加入抗体保存液即得抗和肽素抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记溶液；④将上述所得的标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗和肽素抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记垫；所述抗和肽素抗体胶体金标记垫的制备步骤为：①制备粒径在30nm左右的胶体金溶液；②在磁力搅拌下，胶体金溶液中逐滴加入0.05MK2CO3调节pH值为8.0～8.5，加入抗和肽素抗体，减慢转速，充分混匀30min；按BSA终浓度质量比1%～2%，加入10％的BSA溶液进行封闭反应，充分混匀30min；③冷冻高速离心30min，弃上清，按原初始标记时所用胶体金溶液体积的40％～100％加入抗体保存液复溶，即得抗和肽素抗体胶体金标记溶液；④将上述所得的标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗和肽素抗体胶体金标记垫。进一步，所述包被膜的制备方法的步骤为：①将羊抗兔或羊抗鼠抗体用0.02M磷酸盐缓冲液稀释0.5～2mg/mL，加入3%的甲醇，即为质控区工作液；②将抗和肽素抗体用0.02M磷酸盐缓冲液稀释至0.8～1.5mg/mL，加入3%的甲醇，即为检测区工作液；③将步骤①、步骤②所得的溶液，用喷金划膜仪以0.8～1.2μL/cm包被到硝酸纤维膜上，检测区与质控区间距为0.4～0.7cm，位于硝酸纤维素膜中间位置，将硝酸纤维膜放入37℃烘箱中，干燥即可。进一步，所述样品垫的制备方法为将样品垫用样品垫缓冲液浸泡，所述的样品垫缓冲液为含0.5～5wt%BSA、0.5～5wt%聚乙烯吡咯烷酮、0.5～5wt%聚乙二醇、0.1～5wt%吐温-20、1～5wt%曲拉通-100的0.01M磷酸盐缓冲液。进一步，所述标记缓冲液为pH5.0～9.0的0.1MMES缓冲液；所述抗体保存液为含1wt%BSA，20wt%蔗糖，10wt%海藻糖，0.1wt%吐温-20，0.1wt%聚乙烯吡咯烷酮的0.05MTris-HCl缓冲液。与现有技术相比，本专利技术所提供的和肽素免疫层析检测试剂卡具有如下优点：本专利技术提供的技术方案，利用免疫层析技术，两种抗体的特异结合反应，形成特异的“抗体-抗原-抗体”免疫复合物，再结合荧光或有色的示踪物标记，试剂卡与荧光仪相配合可对人体血液样本的和肽素进行定量或定性检测。本方法操作简单，诊断迅速，特异性强，灵敏度高，易储存，无须专门的操作人员，只需简单的仪器设备，即可得出结果。这样有利于医护人员抓住最佳治疗时间，在中风、心衰患者的诊断、病情和预后评估方面发挥积极作用。附图说明图1是本专利技术的检测试剂卡结构示意图；图2是本专利技术的检测试剂卡的盒盖俯视图；图3是本专利技术的检测试纸结构示意图；图4是本专利技术的检测试纸俯视图；图5是本专利技术的检测卡判定结果为阴性时示意图；图6是本专利技术的检测卡判定结果为阳性时示意图；图中：1、底板；2、样品垫；3、抗和肽素抗体示踪物标记垫；4、包被膜；5、吸水垫；6、盒体；61、盒盖；71、加样孔；72、结果观察窗口；8、和肽素抗体检测区T线；9、质控区C线。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。除非上下文另有特定清楚的描述，本专利技术中的检测物名称和参数，数量既可以单个的形式存在，也可以多个的形式本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种和肽素免疫层析检测试剂卡，包括盒体，其特征在于：所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗和肽素抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条和肽素抗体检测区T线和一条质控区C线，所述和肽素抗体检测区T线与质控区C线平行排列。

【技术特征摘要】
1.一种和肽素免疫层析检测试剂卡，包括盒体，其特征在于：所设盒体设有底板和盒盖，所述盒盖设有加样孔和结果检测窗口，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，所述检测试纸设有检测区，所述检测区设有样品垫、抗和肽素抗体示踪物标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有一条和肽素抗体检测区T线和一条质控区C线，所述和肽素抗体检测区T线与质控区C线平行排列。2.根据权利要求1所述的一种和肽素免疫层析检测试剂卡，其特征在于：所述包被膜两端分别与吸水垫和抗和肽素抗体示踪物标记垫相互交叠连接，所述抗和肽素抗体示踪物标记垫上压贴有样品垫，所述抗和肽素抗体示踪物表面设有修饰活性基团，所述抗和肽素抗体示踪物为量子点、镧系稀土络合物、纳米荧光微球或有色纳米颗粒，所述量子点为CdSe、ZnS，所述镧系稀土络合物为Eu(TTA)3Phen，所述纳米荧光微球为聚苯乙烯纳米荧光微球，所述有色纳米颗粒为胶体金、有色聚苯乙烯微球。3.根据权利要求1所述的一种和肽素免疫层析检测试剂卡，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维样品垫，所述包被膜为硝酸纤维素膜，所述抗和肽素抗体示踪物标记垫为玻璃纤维或聚酯纤维。4.一种和肽素免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述方法包括样品垫、抗和肽素抗体示踪物标记垫与包被膜的制备方法。5.根据权利要求4所述的一种和肽素免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述抗和肽素抗体示踪物标记垫包括抗和肽素抗体量子点、稀土络合物、抗和肽素抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球和抗和肽素抗体胶体金。6.根据权利要求5所述的一种和肽素免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于：所述抗和肽素抗体量子点与稀土络合物标记垫的制备步骤为：①用标记缓冲液将水溶性羧基量子点、镧系稀土络合物溶解；②在量子点、镧系稀土络合物溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液，室温反应1～2小时，超滤除去未反应的化学物质后加入标记缓冲液；③将抗和肽素抗体加入上述活化的量子点、镧系稀土络合物溶液中，室温偶联反应1～2小时，加入封闭液反应30～60min，超滤除去未反应的化学物质后加入抗体保存液，即可得抗和肽素抗体量子点、稀土络合物标记溶液；④将上述所得的抗和肽素抗体量子点、稀土络合物标记溶液用喷金划膜仪喷至玻璃纤维或聚酯纤维上，喷量为1～5μL/cm，干燥裁剪后即得抗和肽素抗体量子点、稀土络合物标记垫；所述抗和肽素抗体聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球标记垫的制备步骤为：①用标记缓冲液将羧基聚苯乙烯纳米荧光微球、有色聚苯乙烯微球稀释至固含量约0.2%；②在上述聚苯乙烯纳米荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：于龙波，于永涛，黎权，刘日俊，
申请(专利权)人：广州华澳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44