一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸，所述类风湿性关节炎标志物为类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体与C‑反应蛋白，试纸条包括样品垫、类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，包被膜上设有三条类风湿性关节炎标志物定量检测线和一条质控区C线，利用磁场将样本中的被测物质浓缩后，利用低背景、高灵敏度的荧光免疫层析法，进行检测被测物质，解决了POCT类产品灵敏度低的问题。可以避免免疫侧向层析试剂检测血液样本时，为降低血液中其他物质的干扰。
【技术实现步骤摘要】
一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸及其制备方法
本专利技术属于生物医药领域，涉及基于用磁性稀土荧光微球作为示踪标记物的类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸及其制备方法，具体地说是，一种测定血液（血清、血浆、全血）中的类风湿因子/抗环瓜氨酸多肽抗体/C-反应蛋白含量的检测试剂卡。
技术介绍
类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是一个累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫病，具体病因尚不清楚，可能与感染因子和遗传倾向两种因素有关，RA是以关节炎症的多变性、关节破坏、进行性功能障碍为特点的风湿性疾病，我国患病率约为0.3％-0.6％，是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要病因之一。该病早期常因症状不典型被误诊或不能及时确诊，而延迟的治疗使该病的预后很差，如果能够早期确诊本病，并及时给予合理治疗，则会明显改善预后。RA的临床诊断类风湿因子(rheumatoidfactor,RF)是常用的经典血清学指标，但是缺乏特异性，除了患者以外，还可见于结缔组织病、肝炎、肿瘤、感染性疾病等其他的疾病以及正常健康人。尽管RF对RA是非特异的，但是高滴度的RF与RA疾病密切相关。特别是RF滴度越高，提示患者的预后越差，是损伤指标中最强有力的预后因子，其他自身抗体不能取代在诊断和预后判断中的地位。所以，由于RF在RA疾病中具有出现早、灵敏度高等优点，现在仍是临床早期诊断的主要依据之一。抗环瓜氨酸多肽抗体(cycliccitrullonatedpeptide,CCP)在类风湿性关节炎早期出现，与RA患者的关节侵蚀状况和预后存在密切的相关性，抗CCP抗体对类风湿性关节炎的敏感性虽低于类风湿因子，但诊断的特异性接近95％，显著高于类风湿因子等其他临床诊断常用的指标，通过ELISA法检测RA患者的抗CCP抗体，并证明抗CCP抗体对RA诊断有很高的特异性及敏感性，国内目前抗CCP抗体正逐渐应用于对RA的临床珍断。抗CCP抗体是较好的RA早期诊断标志物，也是鉴别非侵蚀性、侵蚀性RA的灵敏指标。C-反应蛋白(C-reactiveprotein，CRP)是在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质（急性蛋白），激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞。CRP在炎症开始数小时就升高，48小时即可达峰值，随着病变消退、组织、结构和功能的恢复降至正常水平。此反应不受放疗、化疗、皮质激素治疗的影响。因此，CRP的检测在临床应用相当广泛，包括急性感染性疾病的诊断和鉴别诊断，手术后感染的监测；抗生素疗效的观察；病程检测及预后判断等。RF、抗CCP抗体、CRP三项指标联合用来诊断RA时，敏感性能得到明显的提高，与其他各单项相比，大大降低了漏诊率；同时阴性预测值也提高，如果RF、抗CCP抗体、CRP指标全为阴性，几乎可以排除患有RA的可能，具有相当高的临床应用价值。目前临床诊断应用最广泛的是采用进口试剂检测血清和血浆中的类风湿因子/抗环瓜氨酸多肽抗体/C-反应蛋白含量。现市面上的试剂盒检测操作复杂，费时，不宜作为普通的筛查，只能用作确诊试验。同时，与此同时市面上的样本进行稀释后进行测试而造成的灵敏度偏低。
技术实现思路
为解决以上问题，方便测试人血清类风湿因子/抗环瓜氨酸多肽抗体/C-反应蛋白，本专利技术提供了一种简单、可靠、成本低廉、灵敏度高的一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸；本检测方法利用磁场将样本中的被测物质浓缩后，利用低背景、高灵敏度的荧光免疫层析法，进行检测被测物质，解决了POCT类产品灵敏度低的问题。可以避免免疫侧向层析试剂检测血液样本时，为降低血液中其他物质的干扰。为了达到本专利技术的目的，本专利技术提供的技术方案如下：一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸，所述类风湿性关节炎标志物为类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、C-反应蛋白，所述类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸包括盒体，所述盒体包括底板与盒盖，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，检测试纸上方与盒盖连接；所述盒盖设有通孔区；所述通孔区设有加样孔和结果检测窗口；所述检测试纸上方设有检测区，检测区与通孔区相对应；所述检测区包括样品垫、类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有三条类风湿性关节炎标志物联合定量检测线和一条质控区C线，所述检测线与质控区C线平行排列。进一步，所述类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微球由高分子材料包裹磁性稀土荧光复合物，所述磁性稀土荧光微球的球径为10-500nm，所述荧光发射波长范围为400-800nm，纳米微球表面修饰活性基团为氨基、羧基或巯基。进一步，所述包被膜两端分别与吸水垫和类风湿性关节炎标志物抗体标记垫相互交叠连接，所述包被膜为硝酸纤维素膜；所述类风湿性关节炎标志物抗体标记垫上方压贴有样品垫，所述样品垫为玻璃纤维样品垫。进一步，所述类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫为玻璃纤维或聚酯纤维。一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸制备方法，包括类风湿性关节炎标志物抗体标记与制备检测试纸，所述类风湿性关节炎标志物抗体标记步骤：①用羧基化聚苯乙烯微球包裹Eu3+-Fe3O4复合物制备的磁性稀土荧光微球，粒径200nm，固含量为1%；②取上述微球1mL，加入5mLpH7.00.02M3-(N-玛琳代)丙磺酸缓冲液（MOPS），混匀，25000rpm离心10min，弃上清；再加入5mLMOPS，90W超声，工作2s，间歇5s，重复2次，25000rpm离心10min，弃上清；③再次加入5mLMOPS，90W超声，工作2s，间歇5s，重复2次，完成对微球的清洗；④在清洗后微球中加入15mgEDC和50mgsulfo-NHS，涡旋混匀后，37℃反应15min；⑤反应完成后，加入2-巯基乙醇8.6μl，终止羧基的活化；⑥分别加入类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、C-反应蛋白对应抗体各1mg，置于旋转培养箱上，37℃反应90～120min；⑦然后加入100μL5%BSA和100μL1%PEG20000，对未标记的位点进行封闭，置于旋转培养箱上，37℃反应60min；⑧反应结束后，将上述液体2000rpm离心15min，弃上清，加入保存液（含1%BSA、10%蔗糖、2%海藻糖的pH8.00.2M硼酸硼砂缓冲液），5mL，超声2s；⑨将标记后的微球稀释50～100倍，每支200μL分装，即为单人份半成品，与类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、C-反应蛋白测定试纸配合使用。类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸制备步骤：①用BIODOT三维喷金点膜仪，以1μL/cm参数，在硝酸纤维素膜上包被类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、C-反应蛋白相应的抗体三条检测线，和一条羊抗鼠/羊抗兔IgG质控线，37℃干燥16小时，作为反应膜。②用含0.5%Tween-20的0.1MPBS溶液浸泡玻璃纤维，然后37℃干燥16小时，裁剪17mm×300mm为作为样品垫。③将样品垫、反应膜和吸水纸（22mm×300mm）以层层叠压的形式黏贴组装在底板上。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：通过检测区包括样品垫、类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸，所述类风湿性关节炎标志物为类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、C‑反应蛋白，其特征在于：所述类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸包括盒体，所述盒体包括底板与盒盖，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，检测试纸上方与盒盖连接；所述盒盖设有通孔区；所述检测试纸上方设有检测区，检测区与通孔区相对应；所述检测区包括样品垫、类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有三条类风湿性关节炎标志物定量检测线和一条质控区C线，所述检测线与质控区C线平行排列。
【技术特征摘要】
1.一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸，所述类风湿性关节炎标志物为类风湿因子、抗环瓜氨酸多肽抗体、C-反应蛋白，其特征在于：所述类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸包括盒体，所述盒体包括底板与盒盖，所述盒体内设有检测试纸，所述检测试纸下方设有底板，检测试纸上方与盒盖连接；所述盒盖设有通孔区；所述检测试纸上方设有检测区，检测区与通孔区相对应；所述检测区包括样品垫、类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫、包被膜和吸水垫，所述包被膜上设有三条类风湿性关节炎标志物定量检测线和一条质控区C线，所述检测线与质控区C线平行排列。2.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸，其特征在于：所述类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微球为由高分子材料包裹磁性稀土荧光复合物，所述磁性稀土荧光微球的球径为10-500nm，所述荧光发射波长范围为400-800nm，纳米微球表面修饰活性基团为氨基、羧基或巯基。3.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸，其特征在于：所述包被膜两端分别与吸水垫和类风湿性关节炎标志物抗体标记垫相互交叠连接；所述包被膜为硝酸纤维素膜；所述类风湿性关节炎标志物抗体标记垫上方压贴有样品垫，所述样品垫为玻璃纤维样品垫。4.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸，其特征在于：所述类风湿性关节炎标志物抗体磁性稀土荧光微球标记垫为玻璃纤维或聚酯纤维。5.一种类风湿性关节炎标志物联合定量检测试纸制备方法，包括类风湿性关节炎标志物抗体标记与制备检测试纸，所述类风湿性关节炎标志物抗体标记步骤：①用羧基化聚苯乙烯微球包裹Eu3+-Fe3O4复合物制备的磁性稀土荧光微球，粒径200nm，固含量为1%；②取上述微球1mL，加入5mLpH7.00.02...
【专利技术属性】
技术研发人员：于龙波，于永涛，黎权，刘日俊，
申请(专利权)人：广州华澳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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