本发明专利技术公开了一种羊α干扰素突变体及其制备方法和应用。本发明专利技术首先公开了一种羊α干扰素突变体，其氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术将所述羊α干扰素突变体第54位氨基酸由赖氨酸(K)突变成谷氨酰胺(Q)得到氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的突变体，其抗病毒活性明显提高。本发明专利技术进一步将氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示突变体进行氨基酸单位点突变、双位点突变和多位点突变，获得多个抗病毒活性提高的羊α干扰素突变体。本发明专利技术利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕生物反应器中表达的所述羊α干扰素突变体的抗病毒活性大幅度提高。本发明专利技术提供的羊α干扰素突变体能够用于制备预防或治疗羊病毒性疾病的药物或试剂。
【技术实现步骤摘要】
羊α干扰素突变体及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种羊α干扰素突变体，还涉及羊α干扰素突变体的制备方法和应用，属于基因工程重组蛋白领域。
技术介绍
干扰素(Interferon，IFN)，是由英国科学家Isaacs于1957年利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感病毒干扰现象时首先发现，是一种具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种作用的细胞因子。干扰素是早期免疫应答中起重要作用，是抗病毒感染的第一道防线。根据其结合膜受体的不同，干扰素可分为三种类型。Ⅰ型干扰素是先天性免疫力的重要组成部分，对抗病毒和胞内寄生菌作用明显，主要包括IFN-α、IFN-β、IFN-ω、IFN-ε、IFN-ζ等亚型，其中IFN-α和IFN-β是哺乳动物中最主要的干扰素。Ⅰ型干扰素识别受体是IFN-α/β受体(IFNAR)，广泛表达于多种细胞中。Ⅱ型干扰素中只有IFN-γ，主要由活化的NK细胞、KNT细胞以及T细胞表达产生，其受体为IFNGR。IFN-γ是重要的免疫应答分子，参与免疫应答的整个过程，调控免疫应答的走向。Ⅲ型干扰素近年发现的一种新型干扰素，具有组织特异性，属于白介素10(IL-10)家族成员，主要包括λ1(IL-29)、λ2(IL-28a)和λ3(IL-28b)。其受体为IL-10R2和IL-28Rα组成的异二聚体。目前对Ⅲ型干扰素的初步了解认为，其与过敏反应和自身免疫疾病有关，具有广谱抗病毒、抗菌、抗寄生虫等作用，参与免疫调节以及对肿瘤有显著的抵制效果，其已成为生物学、临床医学、免疫学、肿瘤学等相关学科中研究与应用的重点内容。羊是人们熟悉的家畜之一，在我国已有5000余年的饲养历史。羊天性耐寒，在我国主要产于较寒冷的高原地区，如青海、西藏、内蒙古等地，其中又以内蒙古地区羊的品种为最佳。羊绒，经过加工，可以纺织成为羊绒衫；羊毛可以做成毡子铺在床铺上；羊皮，可以做成皮草；而羊肉，主要食用肉类之一，也是冬季进补佳品。羊肉的肉质细嫩，味道鲜美，含有丰富的营养，较猪肉和牛肉的脂肪、胆固醇含量都要少。冬季食用羊肉，可收到进补和防寒的双重效果。羊吃百草，固羊有“百药之库”之称。更有“要想长寿，常吃羊肉”的说法。在医疗保健方面，羊更能发挥其独特的作用，羊肉、羊血等等可用于多种疾病的治疗，具有较高的药用价值。然而一些病毒性疾病影响着羊类的生存和发展，也影响着人们的日常生活。因此，亟需一种优质、廉价的羊α干扰素产品来消除病毒性疾病对羊类生存和发展产生的影响。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种羊α干扰素及具有高抗病毒活性的羊α干扰素突变体；利用家蚕杆状病毒表达系统制备所述羊α干扰素或羊α干扰素突变体的方法；以及所述羊α干扰素或羊α干扰素突变体在制备预防或治疗羊病毒性疾病的药物或试剂中的用途。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种羊α干扰素，其氨基酸序列为SEQIDNO.1所示，其编码基因的多核苷酸序列为(a)或(b)或(c)所示：(a)SEQIDNO.2所示的多核苷酸序列；或(b)与SEQIDNO.2的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的多核苷酸序列，该多核苷酸编码的蛋白仍具有干扰素的功能或活性；或(c)与SEQIDNO.2的多核苷酸序列至少有80％以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸编码的蛋白仍具有干扰素的功能或活性；优选的，与SEQIDNO.2的多核苷酸序列至少有85％以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸编码的蛋白仍具有干扰素的功能或活性；更优选的，与SEQIDNO.2的多核苷酸序列至少有90％以上同源性的多核苷酸序列，且该多核苷酸编码的蛋白仍具有干扰素的功能或活性。进一步，一种羊α干扰素突变体，是将所述羊α干扰素的信号肽替换为NCBI上登录号为CAA41790.1的信号肽得到的突变体；所述突变体的氨基酸序列为SEQIDNO.3所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.4所示。进一步，一种羊α干扰素突变体，是将氨基酸序列为SEQIDNO.3所示的羊α干扰素突变体的第54位氨基酸由赖氨酸(K)突变成谷氨酰胺(Q)得到的突变体；所述突变体的氨基酸序列为SEQIDNO.5所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.6所示。进一步，一种羊α干扰素突变体，是将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体进行S30H、P32L、R57K、Q60A、R63Q、F71L、T76A、V77I、L91F、A94E、N101D、H109R、G118D、T121A、M142A、K158G、T178S、A179T和S184R任何一种氨基酸单位点突变获得的突变体；优选地，将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体进行P32L、F71L、V77I、H109R、M142A或K158G任何一种氨基酸单位点突变获得的突变体；其中，将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体进行F71L氨基酸单位点突变获得的突变体的氨基酸序列为SEQIDNO.7所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.8所示。其中，本专利技术所述氨基酸单位点突变P32L，表示将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体的第32位氨基酸由脯氨酸(P)突变成亮氨酸(L)；依此类推。进一步，一种羊α干扰素突变体，是将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体进行P32L-H109R、P32L-F71L、P32L-F77L、P32L-M142A、P32L-K158G、F71L-V77I、F71L-H109R、F71L-M142A、F71L-K158G、V77I-H109R、V77I-M142A、V77I-K158G、H109R-M142A、H109R-K158G或M142A-K158G任何一种氨基酸双位点突变获得的突变体；优选地，将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体进行P32L-K158G、F71L-V77I或H109R-K158G任何一种氨基酸双位点突变获得的突变体；其中，将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体进行F71L-V77I氨基酸双位点突变获得的突变体的氨基酸序列为SEQIDNO.9所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.10所示。其中，本专利技术所述氨基酸双位点突变P32L-K158G，表示将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体的第32位氨基酸由脯氨酸(P)突变成亮氨酸(L)，并且将第158位氨基酸由赖氨酸(K)突变成甘氨酸(G)；依此类推。进一步，一种羊α干扰素突变体，是将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体进行P32L-F71L-K158G、P32L-V77I-K158G、P32L-H109R-K158G、P32L-F71L-V77I、F71L-V77I-K158G、F71L-V77I-H109R、F71L-H109R-K158G或V77I-H109R-K158G任何一种氨基酸多位点突变获得的突变体；优选地，将氨基酸序列为SEQIDNO.5所示的羊α干扰素突变体进行F71L-V77I-K158G氨基酸多位点突变获得的突变体；该突变体的氨基酸序列为SEQIDNO.11所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.12所示。其中，本专利技术所述氨基酸多位点本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的羊α干扰素的信号肽替换为NCBI上登录号为CAA41790.1的信号肽得到的突变体；所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示。
【技术特征摘要】
1.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将氨基酸序列为SEQIDNO.1所示的羊α干扰素的信号肽替换为NCBI上登录号为CAA41790.1的信号肽得到的突变体；所述突变体的氨基酸序列为SEQIDNO.3所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.4所示。2.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将权利要求1所述羊α干扰素突变体的第54位氨基酸由赖氨酸K突变成谷氨酰胺Q得到的突变体；所述突变体的氨基酸序列为SEQIDNO.5所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.6所示。3.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将权利要求2所述的羊α干扰素突变体进行S30H、P32L、R57K、Q60A、R63Q、F71L、T76A、V77I、L91F、A94E、N101D、H109R、G118D、T121A、M142A、K158G、T178S、A179T或S184R中的任何一种氨基酸单位点突变获得的突变体。4.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将权利要求2所述的羊α干扰素突变体进行P32L-H109R、P32L-F71L、P32L-V77I、P32L-M142A、P32L-K158G、F71L-V77I、F71L-H109R、F71L-M142A、F71L-K158G、V77I-H109R、V77I-M142A、V77I-K158G、H109R-M142A、H109R-K158G或M142A-K158G中的任何一种氨基酸双位点突变获得的突变体。5.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将权利要求2所述的羊α干扰素突变体进行P32L-F71L-K158G、P32L-V77I-K158G、P32L-H109R-K158G、P32L-F71L-V77I、F71L-V77I-K158G、F71L-V77I-H109R、F71L-H109R-K158G或V77I-H109R-K158G任何一种氨基酸多位点突变获得的突变体。6.含有氨基酸序列为SEQIDNO.1所示的羊α干扰素的编码基因或者含有权利要求1至5任何一项所述羊α干扰素突变体的编码基因的重组载体或重组宿主细胞。7.氨基酸序列为SEQIDNO.1所示的羊α干扰素或者权利要求1至5任何一项所述的羊α干扰素突变体在制备预防或治疗羊病毒性疾病的药物或试剂中的用途。8.根据权利要求8所述的氨基酸序列为SEQIDNO.1所示的羊α干扰素或者权利要求1至5任何一项所述的羊α干扰素突变体在制备预防或治疗羊病毒性疾病的药物或试剂中的用途，其特征在于，所述羊病毒性疾病包括：羊痘病毒感染、羊传染性脓疱病毒感染或水疱性...
【专利技术属性】
技术研发人员：程奇，李轶女，张志芳，
申请(专利权)人：浙江善测禾骑士生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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