昆虫细胞中的AAV产生、其方法和组合物技术

公开了用于在体外在昆虫细胞中产生腺相关病毒(AAV)的组合物和方法。重组杆状病毒载体包含AAV衣壳蛋白基因表达盒(Cap)、AAV Rep基因表达盒(Rep)和杆状病毒同源区(hr)，所述杆状病毒同源区位于距离AAV表达盒中的起始密码子高达约4kb处。与包含Cap和Rep但没有hr的对照相比，携带包含Cap、Rep和hr的重组杆状病毒的昆虫细胞中杆状病毒和AAV的产生水平更高。此外，在用包含Cap、Rep和hr的重组杆状病毒感染的昆虫细胞中，杆状病毒和AAV产生的水平在细胞连续传代中相对稳定，而在包含含有Cap和Rep但没有hr的重组杆状病毒的昆虫细胞的连续传代中，杆状病毒和AAV产生的水平下降。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】昆虫细胞中的AAV产生、其方法和组合物对现有申请案的引用本申请要求2016年4月21日提交的美国临时申请62/325,817的权益和优先权。申请62/325,817以引用的方式整体并入本文。通过引用并入序列表的序列表是本公开的一部分，包括计算机可读形式和包含核苷酸和/或氨基酸序列的书面序列表。以计算机可读形式记录的序列表信息与书面序列表相同。序列表的主题以引用的方式整体并入本文引言随着第一种腺相关病毒(AAV)介导的基因治疗药物的批准，对大规模AAV载体制造技术的需求不断增加(S.,Mol.Ther.20,1831-1832,2012)。目前有几种生产AAV的技术。传统方法利用三重质粒或双重质粒转染HEK293细胞或其他哺乳动物细胞系。该方法的AAV产率低，并且由于其对贴壁细胞的需要而难以扩大规模(Xiao,X.,Li,J.&Samulski,R.J.,J.Virol.72,2224-2232,1998)。另一种生产AAV的方法利用单纯疱疹病毒(HSV)感染哺乳动物细胞。该方法受到产生足够的HSV种子储备的困难的阻碍，并且还具有低AAV生产力(Booth,M.J.等,GeneT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杆状病毒载体，其包含：AAV Cap表达盒；AAV Rep表达盒；以及杆状病毒同源区(hr)，其位于距离AAV表达盒的起始密码子高达约4kb处。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.21 US 62/325,8171.一种杆状病毒载体，其包含：AAVCap表达盒；AAVRep表达盒；以及杆状病毒同源区(hr)，其位于距离AAV表达盒的起始密码子高达约4kb处。2.根据权利要求1所述的载体，其按5'至3'的顺序包含所述Cap表达盒、所述Rep表达盒和所述杆状病毒同源区(hr)。3.根据权利要求1所述的载体，其按5'至3'的顺序包含所述Rep表达盒、所述Cap表达盒和所述杆状病毒同源区(hr)。4.根据权利要求1所述的载体，其按5'至3'的顺序包含所述Cap表达盒、所述杆状病毒同源区(hr)和所述Rep表达盒。5.根据权利要求1所述的载体，其按5'至3'的顺序包含所述Rep表达盒、所述杆状病毒同源区(hr)和所述Cap表达盒。6.根据权利要求1所述的载体，其按5'至3'的顺序包含所述杆状病毒同源区(hr)、所述Cap表达盒和所述Rep表达盒。7.根据权利要求1所述的载体，其按5'至3'的顺序包含所述杆状病毒同源区(hr)、所述Rep表达盒和所述Cap表达盒。8.根据权利要求1所述的载体，其中所述hr区位于所述Rep表达盒与所述Cap表达盒之间，并且其中所述Rep表达盒和所述Cap表达盒处于头对头(5'至5')取向。9.根据权利要求1-8中任一项所述的载体，其中所述杆状病毒同源区是hr2序列。10.根据权利要求1-9中任一项所述的载体，其中所述载体不包含Rep结合元件(RBE)。11.一种昆虫细胞系，其包括包含根据权利要求1-10中任一项所述的载体的细胞。12.根据权利要求11所述的昆虫细胞系，其中所述细胞还包含第二载体，所述第二载体包含侧接有AAV...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海峰，
申请(专利权)人：威洛克有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US